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關鍵詞:生物制氫 生物制氫技術 研究進展
能源短缺和環(huán)境污染是人類所面臨的兩大難題。隨著經(jīng)濟的發(fā)展,大量化石燃料的使用帶來的環(huán)境污染日益加重。由化石能源過度使用所帶來的全球氣候變化、酸雨、臭氧層破壞、荒漠化加劇、生物多樣性減少已占據(jù)21世紀世界所面臨十大主要問題中的5個。因此,開發(fā)新能源勢在必行。氫氣作為燃料,具有高熱值、清潔、高效、可再生等優(yōu)點為目前最具發(fā)展?jié)摿Φ囊环N新能源。傳統(tǒng)的化學產(chǎn)氫方法采用電解水或熱解石油、天然氣,需要消耗大量的電力或礦物資源,生產(chǎn)成本也普遍較高。生物制氫越來越受到人們的重視。該文主要介紹了生物制氫的方法、原理、研究進展,指出存在的問題及研究方向。
一、生物制氫概述
1.光解水制氫
光解水制氫是微藻及藍細菌以太陽能為能源,以水為原料,通過光合作用及其特有的產(chǎn)氫酶系,將水分解為氫氣和氧氣。此制氫過程不產(chǎn)生二氧化碳。藍細菌和綠藻均可光解水產(chǎn)生氫氣,但它們的產(chǎn)氫機制卻不相同。藻類的產(chǎn)氫反應受氫酶催化,可以利用水作為電子和質子的原始供體,這是藻類產(chǎn)氫的主要優(yōu)勢。藍細菌同時具有固氮酶和氫酶,其產(chǎn)氫過程主要受固氮酶作用,氫酶主要在吸氫方向上起作用。藍細菌也能利用水作為最終電子供體,其產(chǎn)氫所需的電子和質子也來自于水的裂解。
(1)綠藻產(chǎn)氫
綠藻是目前發(fā)現(xiàn)的唯一一種既能進行光合作用放氧,又存在氫代謝途徑的真核微生物。綠藻在光照和厭氧條件下的產(chǎn)氫由氫酶介導。這種方法的優(yōu)點是耗能低、生產(chǎn)過程清潔無污染且作為原料的水資源豐富,引起世界各國生物制氫領域研究單位的重視。研究表明,光照條件下,氫酶所需還原力除水以外,內源性有機物(淀粉)也可作產(chǎn)氫還原力。對于O2對產(chǎn)氫酶的抑制作用,徐斐、何定兵、胥義指出運用基因工程的方法對綠藻中編碼氣體通道的密碼子進行定點突變,最終獲得耐氧性高產(chǎn)菌株是一個很有價值的突破點。
(2)藍細菌產(chǎn)氫
藍細菌是一種好氧的光養(yǎng)細菌。藍細菌能夠通過光合作用合成并釋放氫氣。藍細菌的許多種屬都含有能夠進行氫代謝和氫合成的酶,包括固氮酶和氫化酶。固氮酶催化產(chǎn)生分子氫,氫化酶既可以催化氫的氧化也可以催化氫的合成,是一種可逆雙向酶。
2.光合細菌產(chǎn)氫
光合生物產(chǎn)氫利用光合細菌或微藻將太陽能轉化為氫能。目前,研究較多的產(chǎn)氫光合生物主要有藍綠藻、深紅紅螺菌、紅假單胞菌、類球紅細菌、夾膜紅假單胞菌等。
光合細菌只含有一個光合中心,相當于藍綠細菌的PSⅠ,其所固有的只有一個光合作用中心的特殊簡單結構,決定了它所固有的相對較高的光轉化效率,具有提高光轉化效率的巨大潛力。電子供體是有機物或還原態(tài)硫化物,所以光合磷酸化過程不放氧,且只產(chǎn)生ATP而不產(chǎn)生還原力。與綠藻和藍細菌相比,這種只產(chǎn)氫不放氧的特性,可大大簡化生產(chǎn)過程。
3.厭氧發(fā)酵產(chǎn)氫
暗發(fā)酵產(chǎn)氫是利用厭氧產(chǎn)氫細菌在黑暗、厭氧條件下將有機物分解轉化為氫氣。目前,認為厭氧細菌產(chǎn)氫過程可通過丙酮酸產(chǎn)氫途徑、甲酸分解產(chǎn)氫途徑、通過NADH/NAD+平衡調節(jié)產(chǎn)氫途徑等三條途徑實現(xiàn),丙酮酸產(chǎn)氫途徑和甲酸分解產(chǎn)氫途徑有時也稱為氫的直接產(chǎn)生途徑。
二、存在的問題及研究方向
1.光解水制氫
除了存在與光合細菌產(chǎn)氫相同的問題之外,藻類光解水產(chǎn)氫還存在氧氣對產(chǎn)氫酶的抑制作用以及光轉化效率低兩個方面的主要障礙應主要集中在以下幾個方面開展研究:利用基因工程改造、培育耐氧菌株,克服綠藻光合產(chǎn)氫的同時產(chǎn)生氧氣的瓶頸問題;通過基因工程改進產(chǎn)氫菌株提高其光轉化效率,同時研究開發(fā)新型光合生物反應器提高反應器的光傳導效率,提高光轉化效率。
2.光合細菌產(chǎn)氫
如何縮短光合細菌的產(chǎn)氫時間,提高光轉化效率、改善光合細菌氧的耐受程度原料成本太高是目前光合細菌產(chǎn)氫所面臨的問題。光合細菌產(chǎn)氫可利用的原料范圍廣泛,針對不同的原料篩選高效產(chǎn)氫菌株是提高光合細菌產(chǎn)氫效率的重要途徑。
3.厭氧發(fā)酵產(chǎn)氫
原料轉化效率偏低、產(chǎn)氫速率偏低是目前厭氧發(fā)酵產(chǎn)氫的主要問題。運用分子生物學手段對菌種及產(chǎn)氫過程的關鍵酶進行改造,提高關鍵菌株的產(chǎn)氫效率是值得研究的方向。利用代謝工程手段等現(xiàn)代生物技術手段對產(chǎn)氫細菌進行改造的研究目前在生物制氫領域還沒有展開,是很值得深入研究的方向。通過細菌的代謝工程改造和控制,將是突破暗發(fā)酵制氫低轉化率的重要突破口。
總之,生物制氫是解決能源危機,實現(xiàn)廢物利用,改善環(huán)境的有效手段,將擁有廣闊的社會和經(jīng)濟前景。為此,本著獨立自主、勤儉辦一切事業(yè)的精神加快生物制氫技術研究與開發(fā)的步伐,是時展的必需。
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[關鍵詞] 藥物載體;給藥系統(tǒng);研究方向
[中圖分類號]R91 [文獻標識碼] B[文章編號] 1673-7210(2010)01(c)-162-02
通過藥物載體來實現(xiàn)給藥過程,是近年來藥劑學的一個熱門課題。因此,世界發(fā)達國家紛紛開發(fā)這一領域,以期利用有效載體達到給藥系統(tǒng)的合理化、理想化。
1 通過藥物載體實現(xiàn)給藥過程的優(yōu)點
根據(jù)目前所掌握的資料統(tǒng)計,依靠載體與機體的理化效應或生物物理的相互作用,或在體外對載體的制導作用給藥。其優(yōu)點可歸納為13點:A.限制藥物的分布;B.延緩控釋;C.易于進入薄壁組織;D.定向性極強;E.藥物的釋放不影響藥物的作用;F.藥物受到保護;G.藥物的種類容納量高;H.可減少宿主對藥物的過敏性;I.藥物轉運中損失少;J.具有生物相容性的性質;K.可以生物降解;L.易于制備;M.載體不引起病情的變化。
2 給藥系統(tǒng)的發(fā)展過程
回顧給藥系統(tǒng)的發(fā)展過程,可以分為4個階段:第一代是普通劑型,例如丸劑、片劑、膠囊和注射劑;第二代是緩釋制劑和前體藥物;第三代是控釋系統(tǒng);第四代是定向(又稱靶向)給藥系統(tǒng)。按目前實驗研究要求和載體與機體的物理和生物物理的相互作用,第四代給藥系統(tǒng)由藥物-大分子和藥物-抗體共軛物以及膠體微粒載體組成。這種設計應該說是劑型開發(fā)中最有希望的給藥系統(tǒng)之一。
世界著名的藥劑學家Gregoriadis指出,若使藥物產(chǎn)生最佳作用,有兩種方法,首先是設計新的生物活性分子,既有效又能選擇特定的受體;其次是使用載體將活性分子指向機體的特定部位,然后在識別此特殊部位之后主動或被動釋放出藥物。很顯然這種理論方法實施的結果,就是實現(xiàn)靶向性給藥系統(tǒng)(TDS)。靶向性給藥一是依靠它們與機體的理化或生物物理的相互作用實現(xiàn);二是在外通過載體的制導作用(國外叫作導彈方法)。
根據(jù)上述理論可以得出結論:若想實現(xiàn)給藥系統(tǒng)的理想化、合理化,首要的條件是:①必須具備有效的載體材料;②必須保證藥物的穩(wěn)定性;③最大有效的負載;④容易制備;⑤不宜受制備條件的影響。
除此之外,采用微球型時,要考慮藥物在微球中的位置、基質材料的類型、數(shù)量、微球的大小和密度、交聯(lián)的程度和性質、物理及化學類型、藥物的分子量和濃度以及釋放環(huán)境對于藥物的影響等。
3 通過藥物載體給藥的方法
目前,通過藥物載體給藥的方法有3種:第一種是將藥物直接包入微球內;第二種是制備的未載運的微球放入藥液中包蔽攜藥;第三種是制作特殊載體裝置植入給藥。用于制備有效載體的材料基質有以下種類:高密度脂蛋白;低密度脂蛋白;乳糜微粒;聚烷基丙烯酸酯;磁性鐵淀粉;淀粉;聚丙葡聚糖;磺酸型離子交換樹脂;乙基纖維素;改性纖維素;聚丙烯酰胺;磁性鐵乙基纖維素;天然磷脂質;磷脂酰膽堿(PC);磁性鐵聚丁基丙烯酸酯;聚甲基丙烯酸甲酯;羧甲基化交聯(lián)的葡聚糖;酰胺;聚苯乙烯;瓊脂糖;蛋白質;明膠;DL-聚乳酸;巴西棕櫚;磷脂酰乙醇胺(PE);脫酸磷脂酰膽堿(LPC);硅橡膠。
尚有一些正在研究試制中,上面所列材料通過一定的制備方法攜藥后,可以靜注輸送至腫瘤、關節(jié)內注射、直接注入腫瘤組織、做皮下植入、角膜滯留、腸道做輻射保護、肌注做皮下貯存庫等,從而實現(xiàn)給藥理想化。
4 給藥系統(tǒng)研究發(fā)展的方向
理想的給藥系統(tǒng)(DDS)研究結果是使藥物更具有選擇性,集中于人體的特定靶部位,在特定的時間內持續(xù)發(fā)揮藥效,并且盡快全部排出體外,以減少對臟器的損害。同時對不同的給藥部位具有不同的要求,其研究發(fā)展的方向如下:①減少藥物對胃腸道的反應。②防止消化道酶對藥物的分解。③延長藥物通過胃的時間。④對吸收部位具有控制方法。⑤溶解控制系統(tǒng)的精密化。⑥擴散控制系統(tǒng)的精密化。⑦通過pH控制溶解速度。⑧可分解為高分子化合物被機體利用。
4.1 經(jīng)口DDS的研究方向
①如何將更多的藥物制成經(jīng)皮DDS。②進一步弄清透皮治療吸收機制。③解決透皮吸收的物理、化學及生物學影響因素。④開發(fā)透皮吸收促進劑。⑤開發(fā)新基質。⑥開發(fā)能精密控制釋藥的控制膜。⑦開發(fā)黏附層。⑧建立藥物透皮利用的監(jiān)測與利用評價方法。
4.2 經(jīng)黏膜DDS的研究方向
①盡量控制初期爆發(fā)效應,達到迅速均勻釋藥。②開發(fā)富有柔軟性高分子的物質。③開發(fā)透明度更高的分子材料。④開發(fā)精密釋藥、副作用小的物質。⑤開發(fā)量微而高效的眼用藥。⑥開發(fā)復方給藥系統(tǒng)。
4.3 注射用DDS的研究方向
①注射用量小量化。②延長注射給藥的藥效。③減少注射次數(shù)。④降低不良反應。⑤開發(fā)小型化、持續(xù)性注射裝置。⑥開發(fā)靶向型注射劑。
4.4 靶向型DDS的研究方向
4.4.1 前體藥物的研究①對藥物進行化學修飾,使之能選擇性地僅作用于癌細胞。②只有被消化道黏膜吸收的前體藥物才顯示活性。③保留體內活化前體藥物的需要量。④研制在體內不產(chǎn)生有害物質的前體藥物。
4.4.2 乳濁液的研究①開發(fā)注射安全度高的乳化用油及新乳化劑。②研制最佳乳化裝置及機械乳化條件。③提高高濃度乳化液的制劑技術與穩(wěn)定性。④提高復合型乳狀液的制劑技術與穩(wěn)定性。⑤建立快速評定乳狀液穩(wěn)定性的標準方法。⑥提高乳狀液粒子的微?;途换夹g。⑦更有效地控制乳狀液粒表面的電學性質。⑧提高趨向靶部位的有效率。
4.4.3 微球(囊)的研究①平均粒度、粒徑分布的精密控制。②提高球壁的柔軟性。③控制球壁的表面電位。④精密控制靶部位的釋藥速度。⑤使抗原性趨于最小。⑥使組織相容性增至最大。⑦開發(fā)在體內分解的新的高分子物質。
4.4.4 脂質體的研究①提高囊化率。②提高貯存期的穩(wěn)定性。③開發(fā)不用有機溶劑的制備方法。④防止藥物從脂質體內泄漏。⑤提高到達網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)以外細胞的性能。⑥開發(fā)與抗體結合的脂質體。
綜上所述,藥劑學的發(fā)展必定會給人們的用藥起到量與質的變化。給藥系統(tǒng)將逐漸實現(xiàn)合理化、理想化,使新的給藥系統(tǒng)用藥次數(shù)不斷減少,用藥總劑量明顯減少;藥物的治療作用顯著增強,藥物的吸收率大大提高;藥物的不良反應降低,進一步提高藥物對人體特定部位的選擇性。
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2012年7月到鸚哥嶺自然保護區(qū)工作站的畢業(yè)生米紅旭和蔣帥,已多次與巡護隊伍、科研隊伍踏進鸚哥嶺自然保護區(qū);為了不讓父母擔心,兩人每次進出山都會向父母報平安。
米紅旭和蔣帥是一對情侶,從東北林業(yè)大學碩士畢業(yè)生后,兩人遠離家人與繁華的都市,主動放棄穩(wěn)定優(yōu)越的工作,選擇落戶窮鄉(xiāng)僻壤的海南鸚哥嶺熱帶雨林保護區(qū)。
四個多月過去了,兩人很快地融入了這個護林團隊,并對保護區(qū)工作相當熟悉?!斑@個團隊就像一家人一樣,只要有空就互相幫忙,關系簡單而友好。”
明年,兩人準備結婚,將來作為獨生女子的他們,還打算把雙方父母都接到海南,真正扎根鸚哥嶺保護區(qū)。
選擇夢想戰(zhàn)勝現(xiàn)實
米紅旭和蔣帥在東北林業(yè)大學讀本科時是同班同學,專業(yè)是生物學。本科畢業(yè)報考研究生時,他們依然同時選擇了生物類專業(yè),只不過米紅旭的專業(yè)是動物學,研究方向是鳥類生物學;蔣帥的專業(yè)是微生物,研究方向是環(huán)境微生物。
2012年,兩人的研究生專業(yè)同時畢業(yè)?!罢f實話,我的專業(yè)找工作面比較窄,同學們都選擇去了大城市的科研院所,有的為了留在大城市甚至轉行?!泵准t旭說。
在兩人的共同努力下,他們首先在青島找到了工作。女友蔣帥被一家生物制藥公司錄用,起薪3000多元,而米紅旭則從事生物制品的銷售工作。米紅旭始終覺得放棄已經(jīng)學了6年且十分摯愛的專業(yè),非常心痛。恰在此時,學校的老師給他們打電話稱,“海南有個鸚哥嶺自然保護區(qū),是年輕人工作、創(chuàng)業(yè)的好地方。”
得到消息后,米紅旭和蔣帥立即上網(wǎng),從網(wǎng)上看了關于鸚哥嶺青年團隊的報道后,兩人的內心久久不能平靜?!斑@應該是我們去的地方??!”對于這兩個熱愛生物研究,渴望有所作為的年輕人來說,鸚哥嶺自然保護區(qū)是一片廣闊的天地,可以讓他們有所作為,也讓他們神往。
“當時我特別想去,畢竟6年多的專業(yè)知識,如果扔掉就太可惜了?!泵准t旭說,隨后他開始找女友蔣帥商量,沒想到女友特別理解,也非常支持。
接下來是勸說雙方父母。兩人的老家都在東北,米紅旭又是獨生子。所幸雙方的父母都比較開明,最終兩人辭掉了在青島的工作,父母也表示“只要你們兩人在一起,不管到哪里我們都支持”,就這樣兩人決定加入鸚哥嶺自然保護區(qū)團隊。
2012年6月30日晚,飛機緩緩停在海南三亞國際機場,走下飛機一股夾雜著海腥味和潮濕的熱浪襲來,兩人沒有來得及欣賞國際旅游島的夜景,連夜乘車趕到了位于海南白沙市的鸚哥嶺自然保護區(qū)。
兩人共同克服困難
剛到鸚哥嶺的那段時間,每天米紅旭和蔣帥都會早早起床跟隨護林員上山,主要的工作就是在山上進行資源調查,因為對鸚哥嶺的情況不了解,所以前期的上山調查很多。調查需要兩人一組,通常米紅旭和蔣帥都被分到一組,小米對每一塊土地上的植物種類進行辨別統(tǒng)計,而蔣帥則負責記錄下這些數(shù)據(jù),生活中的默契也讓兩人工作起來得心應手、配合得天衣無縫。
最初的鸚哥嶺保護區(qū)生活還是讓這對情侶受了點苦。有時候,還需要在野外搭帳篷宿營。米紅旭說,在熱帶雨林里搭帳篷宿營并不像電視劇拍得那樣浪漫,有很多突況讓人措手不及,特別是山里的蚊蟲和山螞蝗。
米紅旭第一次和護林員上山,就被一種叫不出名字的小蟲咬怕了?!澳窍x子很小,根本不起眼兒,在人的耳邊飛來飛去,不一會兒就落在手臂上?!泵准t旭說,剛開始沒有在意,隨后手臂開始癢,結果全身被撓出40多個包?!爱敵跏欠浅M纯嗟?,不過現(xiàn)在都被咬習慣了,已經(jīng)適應?!泵准t旭笑著說。
米紅旭的女友蔣帥則特別怕山螞蝗。有一次,米紅旭和她去便文村的山上做植物樣方調查,從海拔600米處爬到1400米處。路上有一處陡坡,山螞蝗特別多,蔣帥不小心摔倒了?!耙贿吺橇餮膫?,一邊還有螞蝗叮咬,別提當時我心里有多苦了。”但回憶起來蔣帥卻是笑容滿面:“紅旭很快就用樹枝綁成了拐杖,扶著我一步一步堅持下山。再苦再累,我都不覺得了?!?/p>
后來,他們想出了一個對付山螞蝗的方式。他們用工具做了一個“螞蝗棍”,一個小木棍,頭上綁了一塊布,然后帶著礦泉水瓶,里面裝了一些很濃的鹽水,沾一下螞蝗自動就掉了。
幾個月下來,兩人的體重都明顯下降。米紅旭瘦了20多斤,蔣帥也瘦了8斤。“鸚哥嶺就像一個天然氧吧,雖然條件苦了點,但生活方式很健康,我們就當減肥了?!泵准t旭笑著說。
除了艱苦,當然也有甜蜜的時刻。
米紅旭說,他的研究經(jīng)常需要夜間上山,最近的一次是11月12日,傍晚6點,他和團隊成員開始出發(fā),邊爬山邊看,晚上10點到達海拔1500米的觀景臺,在兩棲天堂(因為此處的動物很多,當?shù)厝巳∶吹搅朔浅:币姷膬蓷珓游铩D橡囿?。“疣螈是中國的特有物種。這個發(fā)現(xiàn)讓我興奮了好幾天?!泵准t旭興奮地說。
金錢不是幸福的標準
米紅旭說,他現(xiàn)在的月工資是1300多元,跟留在大城市的同學沒法比。因為大部分時間都在山上,吃飯基本都在集體食堂,兩人的工資加起來也基本夠用,而且覺得非常幸福,只是衡量幸福的標準里沒有金錢。
“雖然生活條件艱苦,許多時候也會覺得不適應,但是只要跟紅旭在一起,只要在山上能繼續(xù)調查研究,我就覺得這一切都是有意義的?!笔Y帥說。選擇一種與眾不同的生活方式,就需要承受與眾不同的苦難,想要完成理想就需要付出比別人更多的努力。這對米紅旭和蔣帥來說是至理名言。
米紅旭坦言,現(xiàn)在對于他們來說,在保護區(qū)的工作仍處于學習階段,從課本知識到現(xiàn)實實踐,要走的路還很長很長。轉眼間,兩人到鸚哥嶺的時間快5個月了?!奥业搅斯ぷ鞯母杏X,我將鳥類和獸類紅外線監(jiān)測作為研究方向。”米紅旭說,他在保護區(qū)內鳥類和獸類經(jīng)常出沒的地方安裝了自動觸發(fā)照相機,一旦有鳥類和獸類經(jīng)過,相機就會自動拍照,然后他再根據(jù)這些照片研究動物的活動規(guī)律。
蔣帥的研究方向是微生物學,而目前鸚哥嶺自然保護區(qū)內有關微生物真菌的調查資料非常少,她的研究需要從頭開始?!斑@是我感覺很對不住她的地方?!泵准t旭說,蔣帥本來在青島可以和生物醫(yī)藥公司的團隊一起做出很多科研成果,但為了他還是選擇來到海南。
“繼續(xù)學習,專業(yè)與實踐相結合,在研究領域做出自己的成績,這就是我倆的共同理想?!?/p>
隨著環(huán)境污染、生物多樣性降低、自然資源短缺、人地關系矛盾突出等問題的日益涌現(xiàn),人們越來越深切地感受到生態(tài)環(huán)境的重要性。當前“,生態(tài)文明”、發(fā)展“綠色產(chǎn)業(yè)”等已經(jīng)上升為國家的發(fā)展戰(zhàn)略,生態(tài)學這一學科也愈加受到公眾的關注與重視。生態(tài)學原本作為生物學的分支學科,現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)展成為一門獨立的學科,并形成了自己的學科體系。由于生態(tài)學專業(yè)的多學科性與跨學科性,現(xiàn)實生產(chǎn)生活中所出現(xiàn)的諸多環(huán)境與生物方面的問題多能從生態(tài)學的理論與實踐中尋找到解決辦法,生態(tài)學專業(yè)也逐漸成為熱門專業(yè),特別是碩士研究生的報考過程中,生態(tài)學經(jīng)常是學生選擇報考的熱門研究方向。然而,在這欣欣向榮的熱鬧局面下,卻隱藏著許多問題并逐漸暴露出來,著重反映在生態(tài)學專業(yè)的研究生培養(yǎng)方面。而這些問題也是作者在近年來進行生態(tài)學研究生教學培養(yǎng)過程中所發(fā)現(xiàn)的,雖然不能說具有完全的普遍性,但是卻具有一定的代表性,因此希望通過提出并分析這些問題產(chǎn)生的原因及過程,提出相應的解決方案,并為將來生態(tài)學專業(yè)研究生甚至本科生的培養(yǎng)提供可供參考的方法。
二、存在的問題
(一)片面地理解生態(tài)學的學科任務
許多報考生態(tài)學專業(yè)的學生多存在對該學科認識不足的問題。大部分學生都將生態(tài)學專業(yè)與環(huán)境學專業(yè)等同,認為生態(tài)學就是治理污染、整治環(huán)境的一門學科。作者曾經(jīng)就“為什么報考生態(tài)學專業(yè)”這個問題詢問過多位剛剛考上生態(tài)學專業(yè)研究生的學生,半數(shù)以上的學生回答是“因為現(xiàn)在環(huán)境污染問題很嚴重,學習生態(tài)學能夠治理環(huán)境”,或是“有關生態(tài)環(huán)境的問題現(xiàn)在都是熱門問題,學好生態(tài)學以后好找工作”,等等。這樣的答案充分體現(xiàn)出學生對生態(tài)學這門學科的錯誤認識,這種錯誤認知必然會影響該專業(yè)方向的研究生后續(xù)的學習水平,甚至是學習態(tài)度。生態(tài)學是一門研究生物與環(huán)境之間相互關系的一門學科。生物的生存、繁衍、演化都離不開環(huán)境,可以說生態(tài)學的核心研究任務是探索環(huán)境對生物的影響以及生物對環(huán)境變化的反應和影響。然而,由于受到當前整個世界范圍內所出現(xiàn)的環(huán)境問題的影響,促使我們對生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生了超乎以往的關注,長此以往就導致了社會大眾普遍認為“生態(tài)學是治理環(huán)境的一門科學”或是“生態(tài)學就是環(huán)境學”。因此,幫助學生糾正這一錯誤理解,為他們講解完整的生態(tài)學學科體系和正確的生態(tài)學研究任務,應該成為新生入學后的第一課。
(二)忽略或不重視生態(tài)學的基礎學習及研究
基礎知識和基礎理論的學習是每一門學科的必要學習環(huán)節(jié),也是生態(tài)學方向碩士研究生培養(yǎng)過程中需要進行重點理解和掌握的方面。生態(tài)學是一門綜合性的學科,盡管具有門類眾多的分支學科,但生態(tài)學兼具理論和應用、基礎與創(chuàng)新的研究方向。因此,在針對生態(tài)學專業(yè)的研究生開設的相關課程中,需要設定符合這門學科以及社會發(fā)展需要的培養(yǎng)方案,開設多門有關生態(tài)學的相關課程,如理論生態(tài)學、應用生態(tài)學、基礎生態(tài)學、生態(tài)系統(tǒng)生態(tài)學、景觀生態(tài)學,另外也可以根據(jù)區(qū)域發(fā)展的特色,開設諸如流域生態(tài)學、植被生態(tài)學、農(nóng)業(yè)生態(tài)學、恢復生態(tài)學等方面的科目。以上的學科是每位生態(tài)學方向的研究生在一年級階段展開全面學習的主要內容,都需要基于對相關的基礎知識和基礎理論的充分理解和掌握,才能夠進入到對特定科學問題進行提煉并展開深入研究的階段。然而在實際的教學過程中,作者發(fā)現(xiàn)大部分學生通常忽略了對基礎知識的有效累積,部分學生往往只注重應用研究,或者寧愿花費更多的時間用于學習相關的統(tǒng)計分析軟件,而不愿意花更多的精力再深入理解生態(tài)學這門學科的基礎知識和重要理論。這也導致了有相當比例的學生,雖然已經(jīng)掌握了生態(tài)學方面的相關軟件,并能夠通過操作這些軟件對一些問題進行統(tǒng)計分析,但是卻不能針對研究結果展開合理解釋,出現(xiàn)了只會做圖而不會分析的尷尬局面,而造成這種現(xiàn)象的主要原因就是大部分學生都不具備扎實的基礎知識和理論儲備。另外,許多學生在學習過程中普遍表現(xiàn)出比較浮躁的學習態(tài)度,并且缺少主動思考的能力以及對科研學習的興趣和探索精神,等等。這些問題均在一定程度上限制了學生的學習能力,大大降低了學習和教學效果,因此這迫切地需要在今后的教學過程中尋找到行之有效的方法來解決。
(三)缺乏將理論應用于實際的能力
生態(tài)學基礎理論與實際應用相結合的一門學科,大部分的分支學科(如植被生態(tài)學、景觀生態(tài)學、種群生態(tài)學等)都需要進行野外的實踐調查研究。因此,進入生態(tài)學專業(yè)學習的研究生,一般均被要求進行室內或室外的調查和實驗。例如在一年之中,研究生需要針對所要研究的不同生物類別,分春、夏、秋等不同季節(jié)依次展開野外調查。野外實驗是生態(tài)學中重要的研究方法和獲取第一手數(shù)據(jù)的有效手段,也是將課堂和書本中的基本理論和知識運用于實際,接受現(xiàn)實檢驗的有效途徑。一方面,野外實驗能夠幫助我們發(fā)現(xiàn)現(xiàn)實世界中所實際存在的科學問題,另一方面通過野外調查和實驗所獲取的數(shù)據(jù)能夠有利于研究者提出有效的解決方法,這也一直是生態(tài)學這門學科進行研究生培養(yǎng)的重要目標之一。然而,目前在針對生態(tài)學方向研究生的教學過程中普遍遇到的情況是,大部分的學生缺乏主動參與到野外實踐調查的積極性,不能獨立制訂野外調查計劃和具體實施事宜,甚至部分學生在野外調查工作中消極應付,這些都是造成學生無法主動發(fā)現(xiàn)科學問題,展開實際調查研究的本質原因。此外,許多學生通常還會將理論與實際問題相分離,只會在教師的指導下進行實驗、處理數(shù)據(jù)、繪制圖表,卻無法解釋清楚隱藏在數(shù)據(jù)背后的真實規(guī)律。這其實是缺乏將理論與實際相結合的能力,同時也是造成目前很多學生無法發(fā)表高水平學術論文的主要原因。
三、解決方案
(一)加強基礎理論課的教學,并出臺相應的考核機制
基于對當前生態(tài)學專業(yè)研究生教學過程中所出現(xiàn)的問題,本研究認為應該首先加強對研究生的基礎理論課的教學,通過對生態(tài)學及其主要分支學科中的基礎理論的講解,培養(yǎng)學生的學習興趣,打下扎實的理論基礎,為之后實踐教學的開展奠定基礎。目前我國在研究生教育過程中,大多缺少嚴格的考核機制,加之社會影響以及學生自身的原因,導致了研究生的教育質量一年不如一年,這在一定程度上既浪費了教學資源,也并不能成功實現(xiàn)科研人才的培養(yǎng)。因此,本研究認為,針對生態(tài)學專業(yè)的研究生教學,需要制定嚴格的考核機制,如可以開展不定期的隨堂考,課堂上加強提問以及討論環(huán)節(jié),老師在課堂上隨即根據(jù)學生的表現(xiàn)進行打分,最終按照一定的評分標準,將這部分的成績納入到學科成績中。這樣的考核機制一方面能夠隨時檢驗學生的課堂聽課效果,同時也能督促學生的學習以及提高學習積極性。
(二)在實踐教學中設置考核環(huán)節(jié),提高學生的參與性和相互學習的積極性
干部跟班制度是光纖通信傳送網(wǎng)值勤維護管理中的一項業(yè)務制度,通信分隊領導干部要跟班作業(yè),加強對通信值勤維護工作的領導,為了掌握通信分隊領導干部跟班情況,促進干部跟班制度落實,我們開發(fā)了本系統(tǒng)。
1 系統(tǒng)總體結構
系統(tǒng)依托軍事通信網(wǎng)管理信息傳輸網(wǎng),利用指紋身份認證、關系數(shù)據(jù)庫技術,采用客戶端、服務器軟件結構來實現(xiàn)。系統(tǒng)由跟班登記客戶端、管理端和數(shù)據(jù)庫服務器組成。跟班登記客戶端實現(xiàn)跟班登記的功能,管理端主要實現(xiàn)跟班情況查詢統(tǒng)計、跟班人員管理等功能,數(shù)據(jù)庫服務器用于存儲跟班記錄信息。
2 跟班登記客戶端設計
跟班登記客戶端軟件的工作流程為:跟班人員驗證指紋開始跟班,客戶端軟件隨機提示跟班人員驗證指紋對在位情況進行抽查,跟班人員驗證指紋結束跟班,本次跟班情況記錄到數(shù)據(jù)庫服務器中。
指紋識別技術通過特定的數(shù)學算法來分析指紋特征,并判定兩枚指紋特征的相似度,是可靠性高、使用方便、成本低的一項生物識別技術。因此本系統(tǒng)采用指紋識別技術作為身份認證的方法。
指紋識別包括指紋特征分析和匹配兩大過程。指紋特征分析是對指紋圖案的整體特征和細節(jié)特征進行提取的過程,用于指紋登記。指紋特征值匹配是在已注冊的指紋和當前待驗證的指紋之間對指紋圖案的整體特征和細節(jié)特征進行比對匹配,主要用于指紋鑒別。兩個過程都涉及復雜的數(shù)學分析與模式識別技術,為了簡化開發(fā),我們在Fingerprint SDK 2007指紋識別開發(fā)包基礎上進行二次開發(fā),需要進行指紋特征分析和匹配時調用開發(fā)包提供的函數(shù),使用URU4000B兼容型指紋儀。
為了防止跟班人員登記一下跟班便離開機房的現(xiàn)象,軟件中采用了隨機抽查的機制。開始跟班后客戶端軟件將按隨機的時間間隔提示跟班人員再次驗證指紋。如果跟班人員不在則本次跟班強制結束。
跟班登記客戶端軟件流程圖如圖1所示。
3 管理端功能
管理端主界面顯示當前所有的跟班人員,方便機關值班員了解當前臺站跟班情況。
統(tǒng)計查詢功能用于統(tǒng)計每個跟班干部每周的跟班次數(shù)和時間,可以生成電子表格形式的報表,作為講評干部跟班情況的依據(jù)。
干部跟班管理系統(tǒng)使用以后,我們經(jīng)常根據(jù)系統(tǒng)的記錄對干部跟班情況進行講評,有效促進了干部跟班制度的落實。
作者簡介
梁占祥(1973-),男,河北省秦皇島市人。碩士學位?,F(xiàn)為66471部隊工程師。主要研究方向為網(wǎng)絡管理及計算機技術應用。
河北金融學院基礎部河北保定071051
摘要:多元線性回歸模型是根據(jù)得到的若干有關變量的一組數(shù)據(jù),尋找因變量與多個自變量之間的一個函數(shù),使這個函數(shù)對那組數(shù)據(jù)擬合的最好。然后利用方差分析方法對模型誤差進行分析,對擬合的優(yōu)劣給出評價,本文利用此種方法對荒漠區(qū)不同干擾下植物地上生物量的變化趨勢進行研究,對實際的生態(tài)環(huán)境提出一些合理建議。
關鍵詞 :多元線性回歸;數(shù)據(jù)擬合;荒漠區(qū)植物;生物量
1 概述
生態(tài)研究與資源利用是分不開的,荒漠區(qū)是我國典型的溫帶荒漠和干旱脆弱生態(tài)系統(tǒng),生態(tài)環(huán)境條件十分嚴酷,其中荒漠區(qū)的植物生物量在荒漠區(qū)域中扮演著重要的角色,荒漠區(qū)中的植物生物量不僅對于動物的生存有影響,對于荒漠區(qū)中的生態(tài)環(huán)境也有影響。荒漠植被類型和條件與植物量之間存在關系。植物的高度蓋度密度是影響植物量的因子,在不同的干擾下,這種相關性與關系程度也存在一定的差異。因此對于荒漠區(qū)植物生物量的研究具有重要的意義。
本文通過對[1]中數(shù)據(jù)進行擬合分析,發(fā)現(xiàn)不同植物的植物量與其高度蓋度密度的關系符合回歸模型[2],由此可以通過回歸分析建立相應的模型并引入相關系數(shù)[3]進行求解。在求出生物量對高蓋密的回歸模型后,必須考察一下是否真的能由所得的模型來較好的擬合生物量,用模型能否較好的反映或解釋生物量的取值變化?對這些,都必須予以正確的評估和分析。判定系數(shù)在這里就是一個很好地指標:一方面它可以從數(shù)據(jù)變異的角度指出可解釋的變異占總變異的百分比,從而說明回歸直線擬合的優(yōu)良程度;另一方面,它還可以從相關性的角度,說明原因變量生物量y 與擬合變量的相關程度,從這個角度看,擬合變量與原因變量的相關度越大,擬合直線的優(yōu)良度就越高。判定系數(shù)是指可解釋的變異占總變異的百分比,用R表示,它的范圍在0 到1 之間;當R2=1 時,原數(shù)據(jù)的總變異完全可以由擬合直線的變異來解釋,即擬合點與原數(shù)據(jù)完全擬合;當R2=0 時,回歸方程完全不能解釋原數(shù)據(jù)的總變異,生物量的變異完全由與高蓋密無關的因素引起。
2 多元線性回歸模型的建立
3 模型的求解
4 總結
干旱區(qū)是全球生態(tài)系統(tǒng)中的重要類型之一,該地區(qū)的西北干旱區(qū)由于資源豐富、開發(fā)度較低,是我國未來經(jīng)濟建設的戰(zhàn)略要地。但其生態(tài)系統(tǒng)較為脆弱,生態(tài)條件嚴酷,又加上近年來人為干擾不斷增加,使得荒漠化日益嚴重。因此該地區(qū)的生態(tài)和諧問題一直是學術上的熱點問題,而且生態(tài)和諧的問題關乎國之長久,研究這一類問題也是非常有必要的。本文通過建立多元的線性回歸模型,得出了影響植物生物量的幾個因素的關系,給實際生活中的生產(chǎn)活動提供一定的建議。但是可以看到這類問題還只是從一方面研究了荒漠區(qū)的生物植物,還有許多未進行研究的內容在等著大家去研究,比如說荒漠區(qū)的放牧方式,荒漠區(qū)的季節(jié)變換,荒漠區(qū)的生活結構,荒漠區(qū)的開況等等,這些問題研究了以后,它們之間又有什么樣子的關系和牽連,這都是值得狠抓的研究,也是立足于實踐學以致用的研究,只能以后再敘述了。
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作者簡介:
林宏杰(1980 - ),男,廈門人,碩士,講師,研究方向為模糊數(shù)學方法和決策方法。
關鍵詞:生物統(tǒng)計學;理論結合實踐;數(shù)字化
中圖分類號:G642.0 文獻標志碼:A 文章編號:1674-9324(2014)23-0057-02
食品產(chǎn)業(yè)已連續(xù)多年成為我國第一大產(chǎn)業(yè),不過我國與發(fā)達國家的食品產(chǎn)業(yè)水平還有較大的差距,尤其在產(chǎn)品創(chuàng)新和高附加值方面差距更大。為了縮小差距,有必要投入較多的人力物力和財力進行產(chǎn)品研發(fā)和科技創(chuàng)新。其中最關鍵的就是食品學科人才的培養(yǎng),而生物統(tǒng)計這門課程就承擔著培養(yǎng)高素質食品研發(fā)和生產(chǎn)技術人才的一份重要責任。食品學科中的生物統(tǒng)計學是數(shù)理統(tǒng)計原理和方法在食品科學研究中的具體應用,它實際上就是包括食品試驗設計與統(tǒng)計分析兩方面的內容。它主要解決下面兩個問題:(1)如何合理地進行調查或試驗設計;(2)如何科學地整理、分析所收集的具有變異的數(shù)據(jù)資料,揭示出隱藏在其內部的規(guī)律性。這正是食品學科人才所需具有的知識儲備。所以食品學科中的生物統(tǒng)計學課程在培養(yǎng)高素質的食品研發(fā)和生產(chǎn)技術人才方面占有重要地位。但是這門課涉及較抽象的數(shù)理統(tǒng)計知識,涉及很多公式和原理的理論推導,這導致學生學起來很吃力,在這門課面前有畏難情緒。而且隨著教育改革的不斷推進,要求留給學生更多的自主學習空間,這使得這門課程的授課時間大量縮短,如貴州大學的食品學科的生物統(tǒng)計學課程學時由以前的45學時縮短到目前的32學時。這時候如果再按照傳統(tǒng)的教學方法來上這門課,不但難以完成授課任務,而且學生也會覺得索然無味,教學效果也就可想而知。所以有必要對食品學科的生物統(tǒng)計學課程進行教學改革。
在改革之前,要讓學生把握這門課,先解決下面幾個關鍵問題:
1.如何盡快地把學生引進門。把學生引進門很關鍵,直接關系到學生對這門課程的興趣問題和學生對這門課程學習的主觀能動性。所以要設法對生物統(tǒng)計這門課程的每一個知識點進行形象的歸納概括,找出規(guī)律性的解決問題的辦法,用學生易懂的語言進行。
2.如何應用到具體實踐。學習生物統(tǒng)計的主要目的就是把這門課程應用于實踐。那么如何應用就顯得很關鍵。一個好的辦法是通過合適的案例分析來闡述如何進行試驗課題設計和統(tǒng)計分析,如何應用統(tǒng)計分析的結果找出規(guī)律性的認識或應用于具體實踐。
3.如何把手算和電腦軟件分析運算具體結合起來。生物統(tǒng)計中的手動計算和軟件計算都很重要,但是如何把二者有效結合呢?因為這關系到對這門課程的理解及把握和利用現(xiàn)代分析軟件的分析應用問題。擬設想的辦法就是對于剛開始學習生物統(tǒng)計學和對于不復雜的統(tǒng)計計算就利用手動計算,讓學生切實把握統(tǒng)計分析的具體過程,有些統(tǒng)計分析過程計算太復雜,但是原理并不復雜,這時我們最好借助軟件來進行統(tǒng)計分析而節(jié)省大量的時間來做更重要的事情。
這里筆者根據(jù)自己多年在這門課程方面的教學實踐,并結合這些關鍵問題,覺得可以從以下幾個方面實施生物統(tǒng)計學課程的教學改革。
1.教學內容的有所為與有所不為。目前教學改革的目的是要發(fā)揮學生的主觀能動性,所以要盡可能多地把一些基礎內容如實驗數(shù)據(jù)的整理與特征數(shù)留給學生自學,教師可不講,但是教師要安排相應的習題讓學生在自學時加以回答,因為帶著問題的學習效果會更好。但是對于核心的內容如假設檢驗、方差分析、回歸與相關分析、食品學科基本的試驗設計的一般步驟和方法、試驗設計實施結果的統(tǒng)計分析等,這些內容必須著力講述,重點闡述基本概念和基本原理,重點掌握生物統(tǒng)計方法在食品學科中的功能與用途、方法與步驟,讓學生把握其內在規(guī)律,提高學生解決復雜問題的水平;而對于定理的證明與公式的推導這方面不需要大花時間,因為筆者覺得這方面的內容實際上就是數(shù)學變換,可以留給學生在課下自學,教師有選擇性地重點講解結合學生課下的自主學習,可讓學生更快地步入生物統(tǒng)計學世界。而對于難點問題和復雜問題,則也主要靠教師的講述學生才可能把握,不過該怎么講呢?筆者覺得最簡單的方法是把一個難點問題、復雜的問題分解成若干簡單的問題,那么這個復雜的問題也就變得簡單了,學生也更易把握了。如方差分析這一部分看起來很難也很復雜,但是如果把其分解成平方和的求解、自由度的求解、方差的求解、F檢驗和多重比較這幾部分,也就不難把握這部分內容了。
2.注重食品學科中生物統(tǒng)計案例講解,理論結合實踐。生物統(tǒng)計學的教學內容也應與目前食品學科的進展相適應,包括每講述一個基本原理之后就應列舉食品學科方面相應的實例講解。而且每年食品學科的科研和生產(chǎn)實踐都會有不少新成果,這些成果的取得大多是在統(tǒng)計學的指導下取得的,那么教師可通過具體的案例分析來探索這些成績是如何取得的,激起學生的興趣。對于一些入門的基礎知識可以多講,而對于入門之后的一些很復雜的計算應少講,只要告訴學生基本的分析過程和如何應用有關統(tǒng)計分析軟件來進行求解即可。
3.教學手段多樣化。以現(xiàn)代的幻燈片課件教學為主,同時輔以傳統(tǒng)的黑板板書。對于容易把握的知識,可以用幻燈片課件教學。而對于難點、關鍵點和學生的疑問解答,最好把幻燈片和板書結合起來,因為板書更隨意,可以最大程度結合上課的具體情況發(fā)揮教師的隨機應變能力,可依據(jù)具體情況而變動,這樣也易使課堂氣氛活躍,學生印象亦會深刻得多。
4.實現(xiàn)教學內容資源的數(shù)字化。充分利用現(xiàn)代先進的數(shù)字化技術,制作合適的教學大綱、教學多媒體課件、習題和參考答案、教學案例等,并把這些內容掛網(wǎng),以方便學生的課下學習。
5.手動練習和軟件應用相結合。對于剛剛開始學習生物統(tǒng)計學的學生來說,加強手動練習是引領它們快速入門的一個好方法。手動練習可加強學生的理解能力,把握解決基礎的典型的統(tǒng)計分析和試驗設計的一般程序。但是隨著學習的不斷深入,手動計算會越來越復雜,不過基本的統(tǒng)計分析過程是類似的,這時就有必要借助軟件來分析和解決統(tǒng)計分析問題。軟件可以用來分析統(tǒng)計分析問題,也可用來進行試驗設計,學生應該先掌握一些權威統(tǒng)計分析軟件如SPSS和試驗設計軟件Design-expert的一些最基本的用法。
筆者通過這幾方面的教學改革探索,取得了不錯的效果。學生覺得生物統(tǒng)計學沒有想象的那么難,產(chǎn)生了難能可貴的興趣,有不懂的問題也更愿意和老師、同學探討。當然隨著時代的不斷發(fā)展,要讓學生學好、教師教好這門課,食品學科的生物統(tǒng)計學教學方法也應不斷改進:進一步探索教學規(guī)律,優(yōu)化教學過程,完善教學體系,全面提高該課程的教學質量。
參考文獻:
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[2]王欽德.食品試驗設計與統(tǒng)計分析[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學出版社,2011.
[3]李玉閣.“生物統(tǒng)計學”課程教學初探[J].生物學雜志,2006,(5):52-54.
關鍵詞:荷葉水提物;氧化低密度脂蛋白;單核細胞趨化蛋白1;血管細胞黏附分子1
中圖分類號:R285 文獻標識碼:A 文章編號:1673-7717(2011)04-0799-04
Water Extract of The Lotus Leaf Suppressed Expression of Monocyte Chemoattractant
Protein-1(MCP-1) and Vascular Cell Adhesion Molecule 1(VCAM-1) Induced By
Oxidized Low Density Lipoprotein (Ox-LDL) in Human Umbilical Vein Endothelial Cells
ZHANG She-bing, XU Xin, MA Shao-chun, TANG Liang-qiu, JIANG Zhi-ping,F(xiàn)AN Wen-mao,
CHEN Jin-feng,CHANG Guan-nan, YANG Li-jun
(Department of Cardiology, Yuebei People's Hospital, Shaoguan 512026,Guangdong,China)
收稿日期:2010-11-25
基金項目:廣東省“建設中醫(yī)藥強省”科研立項(2009066);韶關市科技信息局資助項目[韶科(衛(wèi))2009-01]
作者簡介:張社兵(1971-),男,湖南郴州人,副主任醫(yī)師,醫(yī)學博士,研究方向:冠心病心律失常。
通訊作者:徐新(1956-),男,江蘇無錫人,教授,碩士研究生導師,碩士,研究方向:動脈粥樣硬化。
Abstract:Objective:To investigate the expressions of monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1) and vascular cell adhesion molecule 1(VCAM-1) induced by oxidized low-density lipoprotein(Ox-LDL) in human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) suppressed by water extract of the lotus leaf.Methods:HUVECs were cultured and treated with Ox-LDL of 3 different concentrations (25 microg/L, 50 microg/L, and 100 microg/L) for 24 hours. We determined mRNA expressions of MCP-1 and VCAM-1 by semi-quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) .Concentration of MCP-1 and VCAM-1 protein in medium was measured using the enzyme linked-immuno-sorbent assay (ELISA) method. Pretreated HUVECs with water extract of the lotus leaf 24 hours before adding Ox-LDL ,then cells were treated with Ox-LDL(50 microg/L) for 24 hours. mRNA expressions of MCP-1 and VCAM-1 were determined by semi-quantitative RT-PCR. Concentration of MCP-1 and VCAM-1 protein in medium was measured using the ELISA method.Results:Exposure of HUVECs to Ox-LDL (25 microg /L,50 microg /L and 100 microg /L respectively) resulted in upregulation of MCP-1 and VCAM-1,both mRNA and protein expressions, in a dose-dependent manner. Expressions of MCP-1 and VCAM-1 induced by Ox-LDL(50 microg /L) were significantly suppressed by water extract of the lotus leaf in a dose-dependent manner. Conclusions:our results suggest that Ox-LDL can induce expressions of MCP-1 and VCAM-1 in a dose-dependent manner in HUVECs, and this process can be suppressed by water extract of the lotus leaf.
Key words:water extract of the lotus leaf;oxidized low-density lipoprotein;monocyte chemoattractant protein-1;vascular cell adhesion molecule 1
氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,Ox-LDL)是動脈粥樣硬化最明確的危險因子之一,Ox-LDL可能通過誘導內皮細胞表達黏附分子和趨化因子,募集單核細胞向血管內皮黏附,從而在動脈粥樣硬化的發(fā)生中起重要作用。荷葉為睡蓮科植物蓮的葉,又名藕葉,種植于我國南方大部分省份,荷葉藥、食兩用,既往研究表明,荷葉中的生物活性物質具有降脂、減肥、降血壓等多種作用【sup】[1-4]【/sup】。本研究旨在探討荷葉水提物能否抑制Ox-LDL誘導的血管內皮細胞表達趨化因子和黏附分子。
1 材料與方法
荷葉水提物(由湘南學院關章順教授提供),提取方法按文獻【sup】[11]【/sup】,人臍靜脈內皮細胞[ATCC, USA.(CRL-1730)],新生小牛血清(中南大學湘雅中心實驗室),RPMI 1640培養(yǎng)基(GIBCO),Ox-LDL(北京協(xié)和三友公司),Trizol(Molecular Research Center, Inc),RevertAid【sup】TM【/sup】 First strand Cdna Synthesis Kit(Fermentas),臺盼藍染色細胞存活率檢測試劑盒(江蘇碧云天生物技術研究所),TaKaRa Taq【sup】TM【/sup】 Hot start version[寶生物工程(大連)有限公司],DNA Ladder Marker[寶生物工程(大連)有限公司],引物設計與合成(北京奧科生物技術有限責任公司),MCP-1和VCAM-I ELISA試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)
1.1 人臍靜脈內皮細胞的培養(yǎng) 人臍靜脈內皮細胞株(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)用含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)基(含10mmol/L的HEPES,2mmol/L谷氨酰胺,1.5g/L碳酸氫鈉,10%小牛血清),37℃、5%CO【sub】2【/sub】培養(yǎng)箱中培養(yǎng),隔天換液,生長至85%融合時接種于6孔板,接種密度為1×10【sup】6【/sup】/孔。臺盼藍染色檢測細胞活力大于90%。待細胞貼壁生長占孔板底面積約50%滿后,隨機分組用于實驗,每組重復3孔。
1.2 Ox-LDL刺激和藥物干預實驗 Ox-LDL刺激組為細胞中分別加入25mg/L、50mg/L、100mg/L的Ox-LDL,共同孵育24h,藥物干預組則分別在細胞中加入10mg/L、20mg/L、40mg/L的荷葉水提物(用含DMSO的無血清培養(yǎng)基配制,DMSO含量<1‰)共同孵育24h,去上清,分別再加50mg/L的Ox-LDL刺激24h,收集細胞用于提取總RNA,空白對照組細胞中除不加Ox-LDL和藥物外其余條件同刺激組。
1.3 半定量RT-PCR方法檢測細胞的單核細胞趨化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和血管細胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)的mRNA的表達:收集細胞,用Trizol提取細胞總RNA,經(jīng)紫外分光光度儀(Beckman DU-640)測定OD 260/280比值在1.8-2.0,半定量RT-PCR檢測MCP-1和VCAM-1的mRNA表達,RT-PCR操作按試劑盒說明書進行。RT反應條件:70℃ 5min,25℃ 5min,25℃ 10min,42℃ 60min,70℃ 10min。人MCP-1引物:上游引物5’-CAT AGC AGC CAC CTT CAT TCC-3’,下游引物:5’-GAG TTT GGG TTT GCT TGT CCA-3’,PCR擴增片段長254 bp。人VCAM-1引物序列:上游:5’-TCT ACG CTG ACA ATG AAT CC-3’,下游:5’-ACT TGA CTG TGA TCG GCT TC-3’,擴增長度178bp;GAPDH引物序列:上游:5’-TCGGAGTCAACGGATTTGGTCGTA-3’,下游:5’-ATGGACTGTGGTCATGAGTCCTTC-3’,擴增長度521bp。引物由北京奧科生物技術有限責任公司合成。MCP-1反應條件:94℃變性30秒、55℃退火30秒、72℃延伸60秒,30個循環(huán);最后72℃延伸7min。VCAM-1反應條件:94℃ 5min,(94℃ 40s,59℃ 40s,72℃ 40s)30個循環(huán),然后72℃ 5min。PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳,以MCP-1和VCAM-1擴增條帶的吸光度值(A value)與GAPDH條帶的吸光度之比作為MCP-1和VCAM-1 mRNA的表達量。
1.4 酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay,ELISA)測定細胞上清MCP-1和VCAM-1含量 采用酶聯(lián)免疫吸附法測定細胞上清中MCP-1和VCAM-1的蛋白水平,檢測靈敏度為15.6-1000pg/mL,操作步驟嚴格按照試劑盒及酶標儀的說明書進行。批內批間變異系數(shù)均控制
1.5 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示,用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析,多個樣本均數(shù)比較用One-Way ANOVA,兩兩比較用LSD法,P
2 結 果
2.1 不同濃度Ox-LDL刺激后HUVECs的MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表達及細胞上清MCP-1和VCAM-1含量變化
如圖1、2、3所示,分別用25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L的Ox-LDL刺激HUVECs后,MCP-1和VCAM-1 mRNA的表達及細胞上清中的含量呈濃度依賴性上調(P
2.2 荷葉水提物干預后MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表達及細胞上清MCP-1和VCAM-1含量變化
如圖4、5、6示,荷葉水提物干預后,HUVECs的MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表達及細胞上清MCP-1和VCAM-1含量呈濃度依賴性下降。
3 討 論
在動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)的發(fā)生發(fā)展過程中,循環(huán)單核細胞趨化、聚集、黏附到血管內皮是AS的最早期事件,其繼而浸入到血管內皮下,參與血管壁的炎癥反應和泡沫細胞的形成【sup】[5]【/sup】。由血管內皮細胞產(chǎn)生的趨化因子和黏附分子在介導循環(huán)單核細胞趨化、聚集、黏附到血管內皮的過程中起了至關重要的作用。既往研究表明MCP-1和VCAM-I參與了動脈粥樣硬化形成,其作用在于趨化單核細胞向內皮募集,促進清道夫受體的表達,誘導血管平滑肌細胞的增殖和移動等【sup】[6-8]【/sup】。