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2、西葫蘆洗凈、去瓤切片備用。
3、西紅柿洗凈后切小塊備用。
4、剝好的大蒜切片備用。
5、鍋熱后方少許花生油，而后放入蒜瓣爆香。
6、聞到蒜香后，放入切好的西葫蘆，大火翻炒。
7、待西葫蘆略有塌的狀態(tài)時(shí)，放入切好的西紅柿，加少許鹽調(diào)味，大火翻炒。
2、先將葫蘆條用水煮10分鐘左右撈出淋水后切成段備用。
3、鍋內(nèi)放油加熱后倒入切好的五花肉翻炒，加入適量的醬油，切好的蔥，姜等調(diào)料。
4、待肉著色后，在鍋內(nèi)加入適量的水，蓋好蓋子燉大約20分鐘，待肉熟好后加入切好的葫蘆條加熱，開(kāi)鍋后即可。關(guān)火。
今年以來(lái)，全區(qū)60余名紀(jì)檢監(jiān)察干部組成了10個(gè)工作組，先后走訪機(jī)關(guān)、農(nóng)村、學(xué)校、企業(yè)60余家，發(fā)放調(diào)查問(wèn)卷20__余份，對(duì)全區(qū)機(jī)關(guān)作風(fēng)和效能建設(shè)中存在的突出問(wèn)題進(jìn)行認(rèn)真調(diào)查了解和處理，切實(shí)優(yōu)化發(fā)展環(huán)境、提高機(jī)關(guān)效能，認(rèn)真解決群眾反映強(qiáng)烈的突出問(wèn)題，切實(shí)發(fā)揮紀(jì)檢監(jiān)察機(jī)關(guān)在推動(dòng)科學(xué)發(fā)展、轉(zhuǎn)變發(fā)展方式、加強(qiáng)社會(huì)管理、維護(hù)和諧穩(wěn)定等方面的有效作用，為活力__、魅力山城建設(shè)保駕護(hù)航。
__區(qū)始終堅(jiān)持把紀(jì)檢監(jiān)察工作放在經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展全局中來(lái)認(rèn)識(shí)和把握，建立健全紀(jì)檢監(jiān)察機(jī)關(guān)牽頭、職能部門(mén)參與的定期檢查和專(zhuān)項(xiàng)督查制度。堅(jiān)持圍繞中心、服務(wù)大局，切實(shí)加強(qiáng)對(duì)上級(jí)和區(qū)委、區(qū)政府重大決策部署的監(jiān)督檢查，出臺(tái)了《20__年執(zhí)法監(jiān)察工作要點(diǎn)》，確定保障性安居工程、節(jié)能減排和環(huán)境保護(hù)、改善和保障民生等20項(xiàng)重點(diǎn)監(jiān)督檢查項(xiàng)目，做到工作項(xiàng)目化，項(xiàng)目具體化。在城鄉(xiāng)低保集中檢查工作中，通過(guò)查檔案、聽(tīng)匯報(bào)、入戶查、訪鄰里等方式，切實(shí)掌握低保戶真實(shí)情況，現(xiàn)已對(duì)10個(gè)鎮(zhèn)街、開(kāi)發(fā)區(qū)隨機(jī)抽取的44個(gè)村150余名城鄉(xiāng)低保戶進(jìn)行了入戶檢查，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題6項(xiàng)，提出監(jiān)察建議6條，有效防止了收入超標(biāo)仍舊領(lǐng)取低保、“人情?！?、“關(guān)系?！钡痊F(xiàn)象的發(fā)生。
__區(qū)始終堅(jiān)持把改進(jìn)作風(fēng)、提高效能作為紀(jì)檢監(jiān)察機(jī)關(guān)的重要任務(wù)，著力建設(shè)“效能__”。積極搭建作風(fēng)效能建設(shè)載體，開(kāi)展了作風(fēng)效能建設(shè)公開(kāi)承諾活動(dòng)，借助電視、報(bào)紙、網(wǎng)絡(luò)、“行風(fēng)熱線”等媒體，組織73個(gè)部門(mén)和單位進(jìn)行公開(kāi)承諾，接受社會(huì)監(jiān)督。同時(shí)，加強(qiáng)效能檢查，建立健全群眾訴求快速解決機(jī)制，建成網(wǎng)絡(luò)投訴系統(tǒng)，拓寬投訴受理渠道，嚴(yán)肅查處行政不作為、慢作為、亂作為等行為，上半年共受理群眾投訴25件。
【關(guān)鍵詞】控煤構(gòu)造；聚煤盆地；盆緣斷裂；掀斜斷塊；壘塹構(gòu)造
葫蘆島市虹螺峴煤田位于遼寧省西部，含煤地層為古生代石炭系及二疊系。研究區(qū)面積約142平方公里，是遼寧省老煤炭基地之一。目前遼西地區(qū)煤炭資源面臨枯竭，尋找新的煤炭資源已成當(dāng)務(wù)之急，部本文利用以往的鉆探成果，運(yùn)用構(gòu)造學(xué)和地質(zhì)力學(xué)的觀點(diǎn)，對(duì)研究區(qū)控煤構(gòu)造及其演化進(jìn)行探討，為老礦區(qū)深部開(kāi)采、尋找煤炭資源、煤層氣及地?zé)豳Y源提供科學(xué)依據(jù)。
1、地質(zhì)背景
1.1區(qū)域地質(zhì)
研究區(qū)位于華北地臺(tái)的東北部，燕遼臺(tái)褶帶遼西坳陷頭臺(tái)子～黃土坎～楊家杖子斷隆帶的中段，東、西邊緣分別被錦州-哈爾套斷裂、黃土坎逆沖斷裂所限，東、西邊緣斷裂為聚煤盆地含煤地層形成期間的同沉積盆緣斷裂。聚煤盆地基底為古生界的寒武系及奧陶系地層，分布在煤系地層南部，盆地老底為元古界的青白口系、薊縣系、長(zhǎng)城系地層，分布在盆地南北兩側(cè)，在煤田的西南側(cè)成煤期后侵入大面積燕山期花崗巖體。聚煤盆地形成于古生代晚期，含煤地層為古生代石炭系及二疊系。見(jiàn)附圖1
1.2礦區(qū)地質(zhì)
受錦州-哈爾套斷裂、黃土坎逆沖斷裂及虹螺山花崗斑巖侵入體的影響，虹螺峴煤田總體走向近東西向，傾向北或北偏西，地層傾角為15-30°的單斜構(gòu)造。東部中生代地層于湯河子?xùn)|北與錦州～阜新盆地連通，北部受黃土坎逆沖斷裂及西南部受燕山期虹螺山花崗斑巖侵入體影響，破壞了煤田的延展，區(qū)內(nèi)平行EW向、NEE向、NNE向斷裂，將煤田切割成互不連續(xù)的條塊狀構(gòu)造。見(jiàn)附圖1
2、構(gòu)造特征
2.1區(qū)域構(gòu)造形跡
虹螺峴盆地南部為山神廟～高橋斷裂，走向?yàn)榻麰W向剪性斷裂；東南部為錦州-哈爾套斷裂帶，走向整體為NEE向集束正斷層，傾向盆內(nèi)傾角為65°；西北部為黃土坎逆沖斷裂帶，斷裂帶走向由NNE轉(zhuǎn)向NEE集束狀逆沖斷層，走向與錦州-哈爾套斷裂帶近于平行，傾向盆外，傾角在60°～70°。本區(qū)上述三組主要斷裂構(gòu)造線，均為煤盆地盆緣斷裂，從斷層切割關(guān)系分析，近EW向和NEE向兩組發(fā)育較早，自元古界以來(lái)就有過(guò)復(fù)雜活動(dòng)，其中近EW走向斷裂要早于NEE向。煤田的構(gòu)造格局主要受NEE向、NNE向斷裂所控制。斷裂位置詳見(jiàn)附圖1
2.2研究區(qū)構(gòu)造特征
①走向近EW斷裂：煤田范圍內(nèi)發(fā)育三條走向近EW正斷層，由南側(cè)淺部至北側(cè)深部斷層編號(hào)分別為F10、F42、F43，斷層性質(zhì)為張性正斷裂，傾向南，傾角60～70度，延展長(zhǎng)度5～10km，斷層受NNE向斷裂切割成若干段。②NNE向斷裂：區(qū)內(nèi)發(fā)育一系列走向NNE向正斷層，對(duì)煤系地層影響較大的有21條，斷層性質(zhì)為張性正斷裂，傾向西或東，傾角60～72度，延展長(zhǎng)度1.5～15km，其中F39為煤田與本次預(yù)測(cè)區(qū)分界斷層。詳見(jiàn)附圖1
3、控煤構(gòu)造樣式
葫蘆島市虹螺峴煤田主要控煤構(gòu)造樣式為伸展構(gòu)造樣式，按結(jié)構(gòu)樣式劃分為掀斜斷塊和壘塹構(gòu)造兩種類(lèi)型。
3.1掀斜斷塊
此類(lèi)斷塊是在張應(yīng)力作用下所形成的正斷層對(duì)含煤建造的改造作用，該構(gòu)造樣式多發(fā)育在低應(yīng)力區(qū)，在虹螺峴煤田比較常見(jiàn)。如區(qū)內(nèi)早期發(fā)育近的EW斷裂，形成了斷層面向南傾斜的掀斜式構(gòu)造，后期發(fā)育的NNE向斷裂形成了斷層面向西傾斜的掀斜式構(gòu)造。詳見(jiàn)圖1、圖3
3.2壘塹構(gòu)造
此類(lèi)斷裂構(gòu)造是沿著對(duì)傾或被傾的雙斷面發(fā)生拉張形成的，按結(jié)構(gòu)劃分為地壘式和地塹式，煤田的東部邊界F1～F2斷層間及西部的F29～F39斷層間為地塹式構(gòu)造斷裂，該區(qū)域含煤地層免遭剝蝕保存完整，分布穩(wěn)定，但賦存深度相對(duì)較大，不利于開(kāi)采。煤田的中部F17～F29斷層間及預(yù)測(cè)區(qū)西部的F39～F46斷層間為地壘式構(gòu)造斷裂，該區(qū)域含煤地層遭剝蝕，構(gòu)造破壞煤系賦存，煤層分布不穩(wěn)定不連續(xù)，不利于礦山開(kāi)采。詳見(jiàn)圖2、圖3
4、構(gòu)造演化
本區(qū)經(jīng)歷了加里東期、海西期（中、下古生界）構(gòu)造運(yùn)動(dòng)后與華北地臺(tái)一起升起，形成了沉積盆地，中石炭世下陷開(kāi)始接受沉積，于上石炭系及下二迭系沉積了成煤巖系，上二迭紀(jì)的沉積盆地縮小，受印支運(yùn)動(dòng)的影響，地殼的臺(tái)升，致使全區(qū)缺失三迭紀(jì)地層，湯河子預(yù)測(cè)區(qū)缺失侏羅紀(jì)地層。侏羅紀(jì)～早白堊紀(jì)，隨著揚(yáng)子板塊與華北板塊的碰撞使整個(gè)中國(guó)東部大陸的擠壓逐漸達(dá)到極為強(qiáng)烈的程度，使遼西地區(qū)的隆起和拗陷進(jìn)一步加強(qiáng)，在本區(qū)表現(xiàn)為煤田西南側(cè)的虹螺山花崗斑巖侵入體及EW向的正斷裂及NNE向逆斷裂。同時(shí)也使印支期構(gòu)造進(jìn)一步加強(qiáng)。晚早白堊紀(jì)～古近紀(jì)，隨著特拉斯洋的封閉，印度板塊與歐亞大陸的碰撞，造成華北大陸向太平洋蠕散。在本區(qū)表現(xiàn)為NNE、NE向正斷裂，并伴隨著升降活動(dòng)。該期構(gòu)造運(yùn)動(dòng)疊加并改造燕山期構(gòu)造，其成生的NNE、NE向數(shù)條斷裂，將煤田切割成互不連續(xù)的條塊狀構(gòu)造。形成了現(xiàn)在不規(guī)則的網(wǎng)狀格局。
5、湯河子預(yù)測(cè)區(qū)
預(yù)測(cè)區(qū)位于葫蘆島市虹螺峴煤田東側(cè)，西以39斷層為界，東以39斷層為界，東西長(zhǎng)約12公里，南北寬約9公里，面積108平方公里。該預(yù)測(cè)區(qū)是虹螺峴煤田的東延部分，應(yīng)存在古生代煤系地層。經(jīng)過(guò)多期次構(gòu)造運(yùn)動(dòng)影響，煤系地層埋藏1500米以下較深（見(jiàn)附圖3），在以往普查時(shí)，由于鉆探工程設(shè)備能力所限，未能穿越該煤系地層。根據(jù)虹螺峴煤田煤質(zhì)特征及煤層氣賦存特點(diǎn)（高瓦斯煤田），煤層氣資源是可觀的。
本區(qū)處于東西向構(gòu)造及新新華夏系構(gòu)造疊加區(qū)，是有利于成煤的構(gòu)造部位，由于該區(qū)構(gòu)造強(qiáng)烈，是地?zé)岙惓^(qū)，加之地表水補(bǔ)給條件充沛，張性斷裂發(fā)育，具備地?zé)豳Y源生儲(chǔ)條件，極有可能在該區(qū)發(fā)現(xiàn)地?zé)豳Y源。
融資1200萬(wàn)，估值過(guò)億，首次廣告價(jià)2200萬(wàn)，以小視頻吐槽負(fù)能量為主的Papi醬的爆炸式躥紅，正式拉開(kāi)了網(wǎng)紅經(jīng)濟(jì)的帷幕。而依靠演唱七國(guó)語(yǔ)言《小幸運(yùn)》和五國(guó)語(yǔ)言《那些年》走紅的美拍紅人Danny，在唯品會(huì)x周杰倫的會(huì)上作為“首席驚喜官”助理的出現(xiàn)，無(wú)疑讓網(wǎng)絡(luò)主播和視頻達(dá)人們興奮不已，仿佛已經(jīng)從中看到了自己這一職業(yè)的光明未來(lái)……
網(wǎng)紅經(jīng)濟(jì)正在成為一種不可忽視的商業(yè)模式。伴隨著這種模式的崛起，短視頻直播行業(yè)也終于度過(guò)了堪稱(chēng)煎熬的積累時(shí)期，進(jìn)入了一個(gè)爆發(fā)性發(fā)展的階段。而在這場(chǎng)“突如其來(lái)”的爆發(fā)之中，網(wǎng)紅的爭(zhēng)奪成為了一個(gè)核心的關(guān)鍵點(diǎn)。
網(wǎng)紅經(jīng)濟(jì)不能失去娛樂(lè)化內(nèi)容
在中國(guó)互聯(lián)網(wǎng)發(fā)展史中，內(nèi)容輸出的變更有三次較大的變化。最早的論壇博客的所生產(chǎn)的名人，以文字的深度和廣度取勝。而到微博微信的大V和自媒體，則是以碎片化和精準(zhǔn)化的圖文取勝。如今終于進(jìn)入了短視頻直播的造星時(shí)代，伴隨著這種以影像為主的內(nèi)容表現(xiàn)形式異軍突起，場(chǎng)景娛樂(lè)化正成為這場(chǎng)迭代中最主流的旋律。
事實(shí)上，無(wú)論是作為泛生活類(lèi)直播第一平臺(tái)的美拍還是其他如映客、花椒，所誕生的網(wǎng)紅們都有著一個(gè)非常明顯的標(biāo)簽：娛樂(lè)化。早期在互聯(lián)網(wǎng)具有關(guān)注度的話題是偏向于嚴(yán)肅和正式的，因?yàn)樵缙诘纳暇W(wǎng)條件非常高，用戶也是以社會(huì)精英為主。而隨著互聯(lián)網(wǎng)的逐漸普及大眾，話題開(kāi)始傾向于娛樂(lè)和碎片化。
如今移動(dòng)互聯(lián)網(wǎng)興盛，90后00后也已成長(zhǎng)為互聯(lián)網(wǎng)的主流用戶，傳統(tǒng)的內(nèi)容已經(jīng)很難引起這一批“新新人類(lèi)”的網(wǎng)絡(luò)共鳴，隨之而來(lái)的，便是娛樂(lè)化內(nèi)容的大行其道。所以，papi醬如此，Danny也是如此，都是娛樂(lè)化內(nèi)容的典型代表。
淺析音樂(lè)達(dá)人Danny在美拍的走紅之路，就其個(gè)人而言，固然離不開(kāi)他本身出色的音樂(lè)才能，再回顧其在平臺(tái)垂直頻道(音樂(lè)達(dá)人)的活躍和相關(guān)美拍內(nèi)容，都是陽(yáng)光積極給用戶帶來(lái)愉快體驗(yàn)的視頻內(nèi)容為主，這正好符合當(dāng)前90后00后的口味，憑借著這些較為優(yōu)質(zhì)的內(nèi)容再加上美拍在垂直頻道的不斷內(nèi)容建設(shè)，也為眾多帶有個(gè)人特色和才藝的直播達(dá)人提供了一個(gè)展示平臺(tái)，Danny迅速積累了大量的美拍粉絲，并且隨著人氣的積累迅速爆發(fā)。
可以試想，一旦失去娛樂(lè)化內(nèi)容，那么即使美拍這樣成熟的平臺(tái)，也很難在誕生下一個(gè)Danny，更不用說(shuō)培養(yǎng)出簡(jiǎn)直是娛樂(lè)至死的papi醬了。所以，保持內(nèi)容娛樂(lè)化，將是維持網(wǎng)紅經(jīng)濟(jì)和平臺(tái)自身造星能力的重要支撐。
網(wǎng)紅遭各平臺(tái)瘋搶存在一定弊端
網(wǎng)紅經(jīng)濟(jì)的爆發(fā)，加上經(jīng)過(guò)這些年的沉淀，讓忍辱負(fù)重十多年的短視頻直播行業(yè)開(kāi)始進(jìn)入主流的商業(yè)領(lǐng)域。在這種良好的前景之下，正在有越來(lái)越多的新生平臺(tái)誕生，同時(shí)百度、阿里巴巴、小米、騰訊等互聯(lián)網(wǎng)巨頭也紛紛入局。因?yàn)樗腥硕伎吹剑涸谶@個(gè)市場(chǎng)前景廣闊的行業(yè)之中，極有可能會(huì)誕生前所未有的互聯(lián)網(wǎng)巨頭。早早布局網(wǎng)紅經(jīng)濟(jì)的美拍機(jī)會(huì)很大，但也不代表后來(lái)者就沒(méi)有可能。
這意味著視頻直播領(lǐng)域的競(jìng)爭(zhēng)也在越演越烈。內(nèi)容生產(chǎn)輸出成為了所有平臺(tái)面臨的最重要的挑戰(zhàn)。而這種情況下，除了在行業(yè)爆發(fā)之前，已經(jīng)積累起大量視頻達(dá)人用戶的美拍等平臺(tái)，資源相對(duì)較少的大部分的短視頻平臺(tái)開(kāi)始重走微博建立之初的邀請(qǐng)大V路線，以邀請(qǐng)?jiān)谄渌脚_(tái)成為網(wǎng)紅的用戶入駐作為其發(fā)展壯大的重要策略。
例如獵豹今日推出的短視頻平臺(tái)“頭牌”，意圖聚合于各大平臺(tái)的網(wǎng)紅或者明星資源，進(jìn)而分的網(wǎng)紅經(jīng)濟(jì)的一杯羹。但事實(shí)上，如果僅僅是單純的走微博大V路線，這種看似利于發(fā)展的方式是具有明顯不足的。因?yàn)閱渭兊囊詾椤巴鈦?lái)的和尚好念經(jīng)”等于舍本逐末。
首先，對(duì)于網(wǎng)紅們來(lái)說(shuō)，因?yàn)殡S著網(wǎng)紅的入駐，資源肯定會(huì)有所傾斜，這對(duì)于平臺(tái)的原生主播或視頻大人來(lái)說(shuō)來(lái)說(shuō)，是一種變相的壓制。其次，對(duì)于網(wǎng)紅來(lái)說(shuō)，頻繁的更換平臺(tái)，會(huì)稀釋粉絲的注意力，不僅對(duì)網(wǎng)紅，這對(duì)邀請(qǐng)網(wǎng)紅的平臺(tái)來(lái)說(shuō)，也是一個(gè)需要注意的地方。
邀請(qǐng)網(wǎng)紅最重要的環(huán)節(jié)是轉(zhuǎn)化粉絲
而作為一個(gè)短視頻直播平臺(tái)，實(shí)施大V的路線也是一種傷害自身造星能力的行為。平臺(tái)應(yīng)該學(xué)會(huì)培養(yǎng)自己的網(wǎng)紅，努力從0到1，而不是只想從別去拿來(lái)1。否則，一味地爭(zhēng)搶網(wǎng)紅，只會(huì)讓網(wǎng)紅經(jīng)濟(jì)出現(xiàn)泡沫，而無(wú)法培養(yǎng)用戶的忠誠(chéng)度。
那么邀請(qǐng)網(wǎng)紅或者明星這種策略是錯(cuò)誤的嗎？當(dāng)然不是。甚至對(duì)于平臺(tái)制造網(wǎng)紅還有一定幫助。但是這種方式的確存在誤區(qū)：對(duì)很多平臺(tái)來(lái)說(shuō)，往往以為明星和網(wǎng)紅來(lái)了，帶來(lái)了流量就可以了。但事實(shí)上，在這其中，最重要的不僅僅是網(wǎng)紅明星本人，更重要的還有那些隨之而來(lái)的粉絲。
我們需要認(rèn)識(shí)到一點(diǎn)，平臺(tái)邀請(qǐng)明星或者網(wǎng)紅入駐，除了帶來(lái)直接的流量之外，還應(yīng)該有更好的一狀態(tài)：直播平臺(tái)自己的粉絲能產(chǎn)生網(wǎng)紅，而非平臺(tái)的網(wǎng)紅或者明星帶來(lái)了自己的粉絲。所以，如何將新入駐的網(wǎng)紅明星的龐大粉絲流進(jìn)行轉(zhuǎn)化才是重中之重。對(duì)于一個(gè)直播平臺(tái)來(lái)說(shuō)，明星和大V帶來(lái)的影響力有限，也并不能讓平臺(tái)一直保持高的活躍度。但是轉(zhuǎn)化成平臺(tái)的粉絲，或者自我創(chuàng)作者形成的影響鏈，才是每一個(gè)平臺(tái)都應(yīng)該爭(zhēng)奪的東西。
關(guān)鍵詞：禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒：ev loci：ev/J
禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒（Avian endogenous retrovirus，AERs）是一類(lèi)存在于雞基因組中，隨宿主基因組遺傳復(fù)制的前病毒DNA序列。在外源性J亞群禽白血病病毒（ALV-J）出現(xiàn)以前，禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒一直未引起人們重視，直到發(fā)現(xiàn)ALV-J囊膜基因與雞基因組中內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒ev/J部分序列高度同源，人們才逐漸意識(shí)到禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒可能參與了外源性禽白血病病毒新亞群的形成，是外源性ALV-J形成的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。然而，禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒在中國(guó)地方雞種雞群中的存在狀況尚不清楚，本研究采用特異性引物對(duì)湖北省兩個(gè)地方品種雞群進(jìn)行禽了內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒PCR檢測(cè)與分析，旨在了解這兩種雞種基因組中禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的相關(guān)狀況，為進(jìn)一步探索內(nèi)源性禽反轉(zhuǎn)錄病毒與外源性病毒的傳播、進(jìn)化、致病機(jī)理的相關(guān)性等提供一定的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。
1.材料與方法
1.1主要材料與試劑
洪山雞、麻城綠殼蛋雞種蛋分別購(gòu)自隨州市譚龍畜禽開(kāi)發(fā)有限公司洪山雞保種場(chǎng)、麻城綠殼蛋雞原種保種場(chǎng)：M199細(xì)胞培養(yǎng)液和胎牛血清為Hyclone公司產(chǎn)品；PCR相關(guān)試劑和PMD19T-Vector購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司：瓊脂糖凝膠回收試劑盒為北京鼎國(guó)昌盛公司產(chǎn)品：DM2000PlusDNA Marker為北京康為世紀(jì)生物公司產(chǎn)品：引物參照相關(guān)文獻(xiàn)及Genebank相關(guān)序列設(shè)計(jì)，均由上海捷瑞生物公司合成，各引物序列相關(guān)信息見(jiàn)表1。其中H5/H7，F(xiàn)2/R2，F(xiàn)5/R5為檢測(cè)引物，擴(kuò)增片段不測(cè)序。
1.2模板DNA提取
分別取洪山雞（縮寫(xiě)為HS）和麻城綠殼蛋雞（縮寫(xiě)為ML）的10日齡雞胚進(jìn)行原代雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)滿單層，取每個(gè)品種雞細(xì)胞各一瓶，分別收集細(xì)胞，用SDS法提取基因組DNA，用ALV-J特異性引物H5/H7進(jìn)行PCR檢測(cè)，無(wú)外源性ALV-J感染的基因組DNA作為擴(kuò)增禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒基因的DNA模板。
1.3PCR反應(yīng)體系及條件
PCR均采用25μL反應(yīng)體系：10xPCR Buffer2.5μL，Mg2+2μL，dNTP2 μL，上、下游引物各1 μL，模板1 μL，Ex Tag 0.25μL，加去離子水H2O至25μL。PCR循環(huán)條件為：94℃預(yù)變性3 min；94℃變性30 s，退火30 s（不同引物對(duì)應(yīng)的退火溫度見(jiàn)表1），72℃延伸1～2 min（延伸時(shí)間，按Taq酶效率1 kb/min計(jì)算），共33個(gè)循環(huán)：72℃10min，4℃10min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。
1.4目的片段的克隆與測(cè)序
用瓊脂糖凝膠回收試劑盒純化回收PCR產(chǎn)物并與pMDTM19-T Vector連接，轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細(xì)胞，涂布氨芐青霉素平板，篩選陽(yáng)性克隆菌，用M13通用引物對(duì)轉(zhuǎn)化菌進(jìn)行進(jìn)行PCR鑒定，送武漢擎科創(chuàng)新生物科技有限公司測(cè)序。
1.5序列分析
測(cè)序結(jié)果用核酸分析軟件DNAStar進(jìn)行分析，所引用的相關(guān)基因序列均來(lái)自NCBI GenBank：EAV-0（X59844）；ev loci：Clonel（AY013303）；Clone3（AY013304）；Clone6（AY013305）；ev/J：EAV-HP （NC005947）；ALV-J：HPRS-103（Z46390），SD9901（AY897220），YZ9901（AY897222）。
2.結(jié)果與分析
2.1模板DNA提取及外源性ALV-J感染排除
以特異性引物H5/H7對(duì)所提取的洪山雞和麻城綠殼蛋雞DNA進(jìn)行外源性ALV-J PCR擴(kuò)增，電泳檢測(cè)顯示陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增出ALV-J對(duì)應(yīng)的片段，本試驗(yàn)所提取的DNA未擴(kuò)增出片段，如圖1所示。
2.2洪山雞和麻城綠殼蛋雞基因組內(nèi)禽反轉(zhuǎn)錄病毒PCR檢測(cè)
分別以洪山雞和麻城綠殼蛋雞基因組DNA為模板，分別用禽反轉(zhuǎn)錄病毒EAV、ev loci、ev/J特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果洪山雞和麻城綠殼蛋雞均檢測(cè)出與EAV、ev loci、ev/J對(duì)應(yīng)的目標(biāo)片段（圖2和圖3）。依據(jù)DNA模板及所使用的引物將從洪山雞基因組中擴(kuò)增出的禽內(nèi)源性病毒反轉(zhuǎn)錄片段依次命名為HS1、HS2、HS3、HS4、HS5、HS6；將從洪山雞基因組中擴(kuò)增出的禽內(nèi)源性病毒反轉(zhuǎn)錄片段依次命名為ML1、ML2、ML3、ML4、ML5、ML6。
2.3目的片段克隆與測(cè)序結(jié)果
將篩選的洪山雞和麻城綠殼蛋雞基因組內(nèi)禽反轉(zhuǎn)錄病毒各片段陽(yáng)性克隆菌送武漢擎科生物技術(shù)公司測(cè)序，得到HS1、HS3、HS4、HS6片段的大小分別為241、881、713、1 479 bp；MLl、ML3、ML4、ML6的大小分別為241、881、713、1 479 bp。
2.4EAV核酸序列分析
測(cè)序結(jié)果DNAStar分析顯示，洪山雞與麻城綠殼蛋雞的EAV中TM（跨膜糖蛋白單位）、LTR（長(zhǎng)末端重復(fù)序列）基因之間區(qū)域的核酸序列（EAV-HS、EAV-ML）同源性為98.8%，而二者與EAV-0內(nèi)源性序列的相應(yīng)區(qū)域同源性分別為98.3%和99.6%：與E51內(nèi)源性序列的同源性分別為74.7%和75.9%（圖4）。進(jìn)化樹(shù)分析顯示，EAV-HS、EAV-ML與EAV-0處于同一分支而與E51處于不同的分支（圖5）。
2.5ev loci核酸序列分析結(jié)果
DNAStar分析顯示，洪山雞與麻城綠殼蛋雞基因組中ev loci的env基因之間的同源性為99.6%，而二者與原型株Clonel，Clone3，Clone6核酸同源性在98.6%-99.0%之間（圖6）。進(jìn)化樹(shù)分析顯示eyHS、ev-ML處于同于分支，而與三個(gè)原型株處于不同的分支（圖7）。
2.5 ev/J核酸序列分析結(jié)果
洪山雞與麻城綠殼蛋雞中ev/J的env基因部分核酸序列之間同源性為99.6%，與EAV-HP相應(yīng)區(qū)域的核酸同源性分別為98.5%、98.9%：與外源性ALV-J原型株HPRS-103及SD9901、YZ9901分離株的同源性為95.5%-98.1%（圖8）。進(jìn)化樹(shù)分析顯示，ev/J-HS、ev/J-ML與ALV-J原型株HPRS-103處于進(jìn)化樹(shù)同一分支，而與外源性ALV-J的SD9901、YZ9901處于不同分支（圖9）。
3.討論
禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒（Avian Endogenous Retrovirus，AERs）是一類(lèi)存在于雞基因組中，隨宿主基因組遺傳復(fù)制的前病毒DNA序列，是外源性禽白血病病毒早期感染留下的“內(nèi)影像”。在外源性J亞群禽白血病病毒（ALV-J）出現(xiàn)以前，禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒一直未引起人們重視，直到發(fā)現(xiàn)ALV-J的env基因與禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒ev/J（EAV-HP）的eny序列具有高達(dá)96%的同源性后，人們才逐漸意識(shí)到禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的重要性。當(dāng)前的研究結(jié)果表明，外源性的ALV-J可能是內(nèi)源性ev/J與其他外源性ALV發(fā)生重組產(chǎn)生的新的亞群，禽內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒可能是外源性禽白血病新亞群形成的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。
《孩子籃子鞋子》
孩子，籃子，
籃子放鞋子。
孩子穿籃子里的鞋子，
孩子，放鞋子的籃子。
其它繞口令：
1、《紅葫蘆黃葫蘆》
紅葫蘆紅，黃葫蘆黃。
紅葫蘆比黃葫蘆紅，
黃葫蘆比紅葫蘆黃。
2、《紅花黃花》
紅花兒，花兒紅。
黃花兒，花兒黃。
紅花兒黃花兒黃又紅，
黃花兒紅花兒紅又黃。
3、《媽媽的水粉畫(huà)和佳佳的塑料花》
媽媽有張水粉畫(huà)，
佳佳有朵塑料花，
媽媽把水粉畫(huà)送給佳佳，
佳佳愛(ài)畫(huà)也愛(ài)花。
左手拿水粉畫(huà)，
右手拿塑料花。
學(xué)畫(huà)水粉畫(huà)，
學(xué)做塑料花。
4、《洗澡補(bǔ)襖》
好好和姥姥，
小小和嫂嫂，
姥姥給好好洗澡，
嫂嫂給小小補(bǔ)襖，
姥姥給好好洗完澡，
也補(bǔ)好好好的襖，
冰糖葫蘆的起源與功效
冰糖葫蘆的歷史可謂淵遠(yuǎn)流長(zhǎng)。相傳起源于約八百年前的南宋紹熙年間。那年皇帝趙悖最寵愛(ài)的黃貴妃病了，她面黃肌瘦，不思飲食，御醫(yī)用了許多貴重的藥品，都沒(méi)起到什么效果。趙悖見(jiàn)愛(ài)妃日益憔悴，也整日愁眉不展，最后只好張榜求醫(yī)。一位江湖郎中揭榜進(jìn)宮，為黃貴妃診脈后說(shuō)：“只要用冰糖與紅果（即山楂）煎熬，每頓飯前吃五至十枚，不出半月病準(zhǔn)會(huì)好。”開(kāi)始大家將信將疑，好在這種吃法還合貴妃的口味。黃貴妃按此法服用后，果然如期病愈了。
由此可見(jiàn)，早在宋朝時(shí)就知道山楂的藥用功效。明代名醫(yī)李時(shí)珍曾經(jīng)這樣說(shuō)：“煮老雞肉硬，入山楂數(shù)顆即易爛，則其消向積之功，蓋可推矣。”現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢測(cè)證明，山楂富含維生素C、維生素E、胡蘿卜素等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和膳食纖維。維生素C、維生素E和胡蘿卜素是抗氧化劑，能提高機(jī)體免疫力。膳食纖維是身體的“腸道清道夫”，充足的膳食纖維可以促進(jìn)腸道的蠕動(dòng)和消化腺的分泌，有利于食物的消化和廢物的排泄。此外，山楂中還含有多種活性物質(zhì)，如三萜類(lèi)烯酸和黃酮類(lèi)物質(zhì)，具有擴(kuò)張血管，增加冠狀動(dòng)脈血流量，改善心臟活動(dòng)，軟化血管降低血壓和膽固醇等作用。山楂有如此藥用功效，適量的食用自然可以治病。也許是黃妃所食的山珍海味積住了消化道而致病，小小山楂正好對(duì)癥吧。
冰糖葫蘆的制作與叫賣(mài)
后來(lái)，這種做法傳到民間。老百姓把山楂串起來(lái)，經(jīng)過(guò)多年制作，逐漸積累經(jīng)驗(yàn)，形成以下這種傳統(tǒng)的做法。
制作冰糖葫蘆既簡(jiǎn)單又不簡(jiǎn)單，關(guān)鍵技術(shù)是熬糖。冰糖其實(shí)是砂糖，放在紅銅或黃銅的大勺里熬。熬的時(shí)候一要注意火候，火候不到容易發(fā)黏，吃時(shí)會(huì)粘牙；而火候太大，不僅顏色重且吃起來(lái)發(fā)苦。二要把握稠度，稠了蘸不起來(lái)，稀了掛不住。另外要將山楂去核，去核不能將山楂一切兩半，要用小刀在山楂的中間一轉(zhuǎn)。將核取出后用竹簽穿上，然后放到熬好的熱糖里滾一下。熱糖冷卻后，便成為晶瑩透明的糖葫蘆了。
由于糖的品質(zhì)、熬的技術(shù)和山楂的品質(zhì)等有高下之分，糖葫蘆的品質(zhì)自然也就有高下之分。過(guò)去，一般老百姓認(rèn)為冰糖葫蘆做得最好的是兩家，一家在東安市場(chǎng)，一家是北京琉璃廠的信遠(yuǎn)齋。一到農(nóng)歷十月，這兩家的冰糖葫蘆就開(kāi)始上市了。逛了東安市場(chǎng)的人如果沒(méi)吃那里的冰糖葫蘆，不免有些遺憾。而信遠(yuǎn)齋的冰糖葫蘆當(dāng)時(shí)可稱(chēng)糖葫蘆中的精品。梁實(shí)秋先生在《雅舍談吃》一文中記述道：冰糖葫蘆“以信遠(yuǎn)齋所制為最精，不用竹簽，每一顆山里紅或海棠均單個(gè)獨(dú)立，所用之果皆碩大無(wú)比，而且干凈，放在墊了油紙的紙盒中由客攜去”。
一到冬季，老北京的街巷胡同里就會(huì)傳來(lái)“冰糖葫蘆，冰糖葫蘆……”的叫賣(mài)聲。春節(jié)更是冰糖葫蘆大賣(mài)的時(shí)候。從正月初一到十五，在北京和平門(mén)外琉璃廠廠甸廟會(huì)上人山人海，人潮間四處穿梭著冰糖葫蘆的身影。廠甸廟會(huì)上的糖葫蘆個(gè)頭特別大，它是用長(zhǎng)長(zhǎng)的荊條做芯，在山里紅(山楂)外刷上以忝水做成的飴糖，通體呈白色。小的三尺一條，大的五六尺，頂上還插有用紅紙、綠紙做成的小三角旗。廠甸廟會(huì)起源于明朝嘉靖年間，除其間少數(shù)幾年停頓外，一直延續(xù)不斷，如今已經(jīng)四百年有余了。它與南京夫子廟、上海城隍廟、成都青羊?qū)m并稱(chēng)為中國(guó)四大廟會(huì)?！毒┤A錄》一書(shū)中記載：“歲朝之游，向集廠甸”，“迫興闌游倦，買(mǎi)步偕返，則必購(gòu)相生紙花，乃大串糖葫蘆，插于車(chē)旁，疾駛過(guò)市，途人見(jiàn)之，成知為廠甸游歸也”。糖葫蘆成為北京入歲時(shí)逛廠甸的標(biāo)志，也成為北京人過(guò)春節(jié)的象征。
冰糖葫蘆的回憶與聯(lián)想
一位朋友曾撰文描寫(xiě)童年時(shí)在北京吃冰糖葫蘆的情景。到了春節(jié)，他最喜歡同大人們一起去逛廟會(huì)。那里最先吸引他眼球的不是甑兒糕、玻璃粉、螺絲轉(zhuǎn)兒、馬蹄燒餅以及爆肚、炒肝、驢打滾、糖耳朵，而是如紅樹(shù)般聳立在街邊的冰糖葫蘆。還沒(méi)走進(jìn)廟會(huì)大門(mén)，總是先買(mǎi)一串通紅的冰糖葫蘆。他總是攥在手里老半天舍不得吃，先用舌頭輕輕舔掉凝固的糖稀，含到嘴里等它慢慢地溶化，清涼涼、甜絲絲的氣息充盈了全身，五臟六腑滋爽；再輕輕地咬一口山楂細(xì)細(xì)一嚼，那滋味兒，酸中帶甜，甜里透酸，仿佛一種迷人的旋律蕩漾在心頭。多么美妙?。∫嗵鹨嗨?、甜酸相伴，原汁原味的生活不就是這個(gè)樣子嗎？
無(wú)獨(dú)有偶，妻子也是冰糖葫蘆的崇拜者。不管是不是節(jié)假日，她總要不時(shí)地買(mǎi)回家?guī)状?。她告訴我，她從小就特別喜歡吃冰糖葫蘆，那甜甜的、酸酸的味道對(duì)她有著極大的誘惑力，每當(dāng)聽(tīng)到“冰糖葫蘆……”，她總是央求爸爸媽媽?zhuān)缓蠛徒憬愕艿苊妹脗円黄鸪鋈ベI(mǎi)。她富有詩(shī)意地說(shuō)：“冰糖葫蘆簡(jiǎn)直就是我們幸福的童年。你看，一個(gè)個(gè)冰糖葫蘆，紅紅的、圓圓的，不就像我們童年時(shí)那紅撲撲的圓臉蛋嗎？我們吃著冰糖葫蘆長(zhǎng)大的日子，不就像是用竹簽子一個(gè)一個(gè)串起來(lái)的山里紅嗎？所有的女孩子都喜歡吃冰糖葫蘆，都喜歡在一串串甜蜜的夢(mèng)想里流連忘返?！?/p>
冰糖葫蘆的今天與期盼
已至春了，卻并不見(jiàn)轉(zhuǎn)暖。寒風(fēng)依然是刮著的，像刀子般劃過(guò)臉頰，深入骨髓的涼意，毫無(wú)春的氣息。盡管如此，也是正月啊，快過(guò)年的日子。城是小的，溢滿了祝福。小巷本清清冷冷，現(xiàn)也熱鬧起來(lái)。雖是南方的地兒，從不會(huì)下雪，但也濕冷的。孩子們的小臉兒被凍得通紅，卻滿不在乎，四處奔跑著，蕩滿了歡聲笑語(yǔ)。
大街小巷的年貨把這塊兒巴掌大的地方渲染得通紅，人們提著大包小包的東西，倒也不匆忙，悠悠的閑逛著。我牽著奶奶的手，才四五歲的年紀(jì)，當(dāng)然是對(duì)一切充滿了好奇。便四處張望著。
小巷口的老屋已只剩下木頭了，覆滿了塵埃，蛛網(wǎng)。年逾古稀的老人倚著老屋，身上穿著的不過(guò)是打著補(bǔ)丁的大衣。這是如此寒冷的天氣啊。他不冷嗎？我問(wèn)。奶奶看了我一眼，笑了笑，沒(méi)有回答。老人嘴中喊著：“糖葫蘆，賣(mài)糖葫蘆嘍！”哦，原來(lái)是賣(mài)冰糖葫蘆的。
老人就在那兒坐著，靠著破損的磚墻，不忘了那捧兒冰糖葫蘆。只是沒(méi)人理會(huì)，自顧自地走著，仿佛沒(méi)看見(jiàn)。小孩子們也許會(huì)被糖葫蘆的香味兒吸引，便望望，卻又被大人拽著走了。眼中嫌惡的神色并不難讀。
我望著老人，也不說(shuō)話。這時(shí)候的我尚且年幼，又知道些什么啊。老人也望了望我，笑了，這般慈祥。他向我招招手，讓我過(guò)去。我會(huì)意，跑到老人跟前，看著老人從冰糖葫蘆中取下一根，遞給我。我接過(guò)來(lái)吃了，老人笑著摸摸我的頭。一切是這般和諧啊，似也不寒了。
糖葫蘆化在嘴里，甜甜的味道。
天色漸漸暗了吧，也愈是寒了。行人漸漸少了，小鋪?zhàn)右矌狭碎T(mén)。老人不再喊了，微微嘆了口氣，撐著站起，蹣跚著走了。那背已駝，再不挺拔?；璋档臒艄庀?，老人滄桑的背影。該慶幸吧？那寒風(fēng)并不再呼嘯。
老人每一年都會(huì)在這兒，輕聲叫著，嘶啞著喉嚨，每年都會(huì)向我笑著，遞過(guò)來(lái)一根冰糖葫蘆。像是舞臺(tái)上的人偶，上演著不失一毫的戲碼。
又是一年的春，人們來(lái)來(lái)往往，街道又紅起來(lái)了，熙熙攘攘。我又四處張望著，尋找老人的身影，卻一無(wú)所獲。爺爺，你在哪兒？終是一直沒(méi)找到。感覺(jué)是少了什么，一切都不對(duì)勁了。哦，對(duì)了，是老人的叫喊。
不知多少個(gè)年，再也沒(méi)有看到老人，還有他那慈祥的笑容。直到后來(lái)才在長(zhǎng)輩們聊天的時(shí)候，聽(tīng)到談起那位老人的事兒，才知道，老人早已去了。不知是什么情感涌上心頭，夾雜在一起。那年老人與我的談話，仿佛近在耳畔。
“爺爺，您應(yīng)該在家里享福了啊，為什么要賣(mài)糖葫蘆呢？”
“呵呵，你還小，還不懂，這糖葫蘆啊，可是我們的傳統(tǒng)文化。要是沒(méi)了，中國(guó)也就沒(méi)了！”
……
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