談無菌工藝模擬試驗(yàn)方案設(shè)計

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摘要：各國GMP及PDA技術(shù)報告早已推行無菌工藝模擬試驗(yàn)。結(jié)合法規(guī)要求，從培養(yǎng)基模擬灌裝方案的設(shè)計，風(fēng)險評估工具，前提條件確認(rèn)，模擬介質(zhì)選擇，灌裝批次與數(shù)量，容器裝量，最差條件選擇，環(huán)境監(jiān)測頻率，目檢，培養(yǎng)與觀察，促生長試驗(yàn)、操作記錄、總結(jié)報告等方面進(jìn)行分析，并結(jié)合實(shí)例探討西林瓶生產(chǎn)線無菌工藝模擬試驗(yàn)的策略，以提高生物制藥行業(yè)非最終滅菌產(chǎn)品的無菌保障水平。

關(guān)鍵詞：無菌工藝；培養(yǎng)基模擬灌裝；試驗(yàn)方案；策略

無菌工藝模擬驗(yàn)證活動，可評價無菌制劑生產(chǎn)過程的無菌保障水平?！端幤飞a(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010版）及附錄1無菌藥品，無菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無菌制劑）[1-2]中均對無菌工藝模擬驗(yàn)證有強(qiáng)制要求。FDA無菌工藝藥品指南、PDATR22、PIC/S[3-5]等也有無菌工藝模擬試驗(yàn)的要求。本文從方案的設(shè)計，風(fēng)險評估工具，前提條件確認(rèn)，模擬介質(zhì)選擇，灌裝批次與數(shù)量，容器裝量，最差條件選擇，環(huán)境監(jiān)測頻率，目檢，培養(yǎng)與觀察，促生長試驗(yàn)、操作記錄、總結(jié)報告等方面進(jìn)行分析，并結(jié)合實(shí)例探討西林瓶生產(chǎn)線無菌工藝模擬試驗(yàn)的策略，以提高生物制藥行業(yè)非最終滅菌產(chǎn)品的無菌保障水平。

1無菌工藝模擬試驗(yàn)定義

無菌工藝模擬試驗(yàn)是指采用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基或其他介質(zhì)，模擬制劑生產(chǎn)中無菌操作的全過程，評價該工藝無菌保障水平的一系列活動。正常生產(chǎn)的灌裝程序，用模擬介質(zhì)代替產(chǎn)品，來模擬無菌生產(chǎn)的試驗(yàn)過程。

2西林瓶生產(chǎn)線無菌工藝模擬試驗(yàn)的策略

以新建重組人源化抗PD-1單克隆抗體注射液生產(chǎn)線為例，方案設(shè)計主要從以下幾個方面進(jìn)行考慮：

2.1風(fēng)險評估工具的選擇

目前產(chǎn)品工藝流程為：化凍-在一次性攪拌袋中混合-預(yù)過濾-除菌過濾-灌裝，培養(yǎng)基模擬灌裝工藝流程為：稱量溶解-在一次性攪拌袋中混合-預(yù)過濾-除菌過濾-灌裝。根據(jù)工藝流程先采用魚骨圖對工藝過程中的關(guān)鍵風(fēng)險點(diǎn)進(jìn)行風(fēng)險識別，找出關(guān)鍵風(fēng)險點(diǎn)，再用FMEA逐一將這些風(fēng)險點(diǎn)進(jìn)行評估，低等級風(fēng)險項(xiàng)在驗(yàn)證方案中僅作確認(rèn)或不設(shè)計任何措施，風(fēng)險等級中、高級風(fēng)險項(xiàng)在方案中進(jìn)行設(shè)計考察。根據(jù)評估結(jié)果輸出驗(yàn)證內(nèi)容矩陣。

2.2前提條件確認(rèn)

試驗(yàn)前應(yīng)確認(rèn)無菌工藝模擬驗(yàn)證方案的已培訓(xùn)，參與無菌工藝模擬驗(yàn)證的人員已接受各自崗位操作規(guī)程的培訓(xùn)，培訓(xùn)結(jié)果符合要求，且已獲得授權(quán)進(jìn)行操作，進(jìn)入B級潔凈區(qū)人員的更衣已確認(rèn)且放行，模擬灌裝樣品觀察方法的培訓(xùn)，潔凈廠房、公用工程、生產(chǎn)設(shè)備、檢驗(yàn)設(shè)備及輔助設(shè)備設(shè)施驗(yàn)證確認(rèn)已完成，確認(rèn)SOP中糾正性和固有性干預(yù)項(xiàng)內(nèi)容在A級區(qū)域動態(tài)氣流狀態(tài)下已模擬，確認(rèn)儀表的校準(zhǔn)在效期內(nèi)使用，確認(rèn)相關(guān)文件已生效，確認(rèn)測試用的物料狀態(tài)已放行。

2.3最差條件選擇

如表1所示。

2.4目檢確認(rèn)

當(dāng)天開始培養(yǎng)已灌裝西林瓶的時間，不應(yīng)晚于灌裝結(jié)束（灌裝完最后一瓶）后6h。該時間足夠完成灌裝后目視完整性檢查。目檢檢查主要目的是確定其破損情況、濁度、生長模式，從中了解是否存在微生物污染跡象。在轉(zhuǎn)移并進(jìn)行培養(yǎng)之前，已灌裝單元應(yīng)儲存于鎖定或受控區(qū)域，在進(jìn)行培養(yǎng)之前，已灌裝后產(chǎn)品必須在受控溫度下儲存。

2.5培養(yǎng)與觀察確認(rèn)

2.5.1培養(yǎng)確認(rèn)如表2所示。

2.5.2觀察確認(rèn)對已灌裝西林瓶進(jìn)行目視檢查，確定其破損情況、濁度、生長模式，從中了解是否存在微生物污染跡象。在目檢結(jié)束后，向微生物實(shí)驗(yàn)室提供出現(xiàn)任何混濁或生長模式反應(yīng)微生物污染痕跡的容器進(jìn)行微生物鑒定。

2.6促生長試驗(yàn)

完成培養(yǎng)和目視檢查后，立即從該批次于灌裝開始、中間和結(jié)束階段取樣品，進(jìn)行促生長測試。促生長試驗(yàn)菌種選擇除標(biāo)準(zhǔn)菌株白色念珠菌、黑曲霉菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌等之外，還可考慮加入環(huán)境監(jiān)測和無菌檢查中的微生物。

2.7操作記錄

器具清洗滅菌操作、膠塞滅菌操作、配液、灌裝、軋蓋、目檢等所有操作、干預(yù)執(zhí)行、物料平衡等信息應(yīng)詳細(xì)記錄在批生產(chǎn)記錄中，環(huán)境監(jiān)測、培養(yǎng)與觀察、促生長試驗(yàn)結(jié)果等結(jié)果應(yīng)被記錄下來，作為驗(yàn)證報告的附件。

2.8總結(jié)報告

無菌工藝模擬驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)為零污染。出現(xiàn)任何陽性都應(yīng)進(jìn)行徹底、規(guī)范的調(diào)查，并重新執(zhí)行模擬灌裝。培養(yǎng)基模擬灌裝的所有結(jié)果將在培養(yǎng)基灌裝總結(jié)報告中進(jìn)行匯總，批準(zhǔn)總結(jié)報告后，培養(yǎng)基驗(yàn)證將結(jié)束。報告至少描述以下內(nèi)容：批號、容器尺寸、過濾與灌裝時間、灌裝時間、灌裝速度、人數(shù)、干預(yù)活動評估、環(huán)境監(jiān)測結(jié)果、物料平衡、培養(yǎng)條件、促生長試驗(yàn)結(jié)果、偏差、培養(yǎng)基灌裝評估（可接受、結(jié)論、后續(xù)行動）。

3討論

無菌工藝模擬試驗(yàn)因產(chǎn)品劑型、工藝會有一些差異，在方案設(shè)計時易忽略一些細(xì)節(jié)問題，如干預(yù)內(nèi)容應(yīng)包括SOP中固有性干預(yù)和糾正性干預(yù)項(xiàng)及干預(yù)次數(shù)，干預(yù)項(xiàng)的設(shè)計還應(yīng)同時考慮上一次模擬灌裝時實(shí)際發(fā)生的干預(yù)項(xiàng)，干預(yù)的頻次設(shè)計應(yīng)結(jié)合日常生產(chǎn)干預(yù)累計數(shù)據(jù)的統(tǒng)計。模擬干預(yù)內(nèi)容及頻率設(shè)計應(yīng)有詳細(xì)干預(yù)計劃表，干預(yù)記錄設(shè)計時還應(yīng)詳細(xì)記錄下每個干預(yù)項(xiàng)剔廢數(shù)量，以及已加塞和未加塞的數(shù)量。維修模擬過程若無詳細(xì)的SOP作為指導(dǎo)，每個維修人員維修操作內(nèi)容可能會不同。灌裝軋蓋工序中已加塞剔廢產(chǎn)品收集培養(yǎng)，以及灌裝結(jié)束緩沖罐內(nèi)尾料收集培養(yǎng)都不可忽視，在培養(yǎng)結(jié)果發(fā)生異常時，均可作為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)調(diào)查使用。模擬灌裝過程中干預(yù)計劃外的實(shí)際發(fā)生的干預(yù)項(xiàng)應(yīng)被詳細(xì)記錄解決措施，并確認(rèn)是否經(jīng)過詳細(xì)評估。隨著法規(guī)的更新，工藝流程的優(yōu)化，符合各類法規(guī)及規(guī)范要求的無菌工藝模擬試驗(yàn)方案設(shè)計將會越來越完善。

作者：周海霞 單位：上海君實(shí)生物工程有限公司