TCT制片質量控制研究

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摘要：目的進行液基薄層細胞學（tct）制片質量控制，提高細胞學檢測的特異性和診斷的準確率。方法分析我院7018例婦科液基細胞學病例，對制片過程（取材、制片、固定、染色、封片）進行質量控制，有宮頸上皮細胞異常者做病理組織學檢查。結果TCT優(yōu)片率99.6%（6989/7018），3例不滿意標本。部分細胞學陽性病例進一步在我院行陰道鏡檢查并取活檢，LISL、HISL和鱗狀細胞癌的細胞學與病理組織學符合率分別為71.88%（23/32）、90.90%（10/11）和100%。結論TCT制片質量控制有利于提高宮頸病變的診斷，TCT在宮頸病變的篩查無損傷，易操作，敏感性高，可作篩查宮頸癌的檢查。

關鍵詞：宮頸腫瘤；TCT技術；篩查；質量控制

引言

液基薄層細胞學（TCT）技術的應用為細胞病理醫(yī)生提供了高質量的標本，亦是臨床婦科作為宮頸癌早期篩查診斷的重要手段[1]。液基薄層細胞學（TCT）標本制片質量控制是準確發(fā)現(xiàn)病變的前提，它包括標本收集、涂片制備、固定染色等。為更好地將TCT技術服務臨床診斷，現(xiàn)分析7018例TCT檢查標本結果，以探討提高TCT標本質量的方法。

1資料與方法

1.1一般資料。

收集本醫(yī)院病理科2013年10月至2014年10月行宮頸脫落細胞TCT檢查的標本7018例，主要來源于本院婦科門診患者及體檢中心體檢者。不滿意標本3例，重新取樣合格后進行檢測?；颊吣挲g17-88歲，臨床表現(xiàn)多為白帶異常、外陰瘙癢、接觸性出血、宮頸炎等，部分病例無癥狀行體檢。

1.2方法。

1.2.1標本采集：

婦科醫(yī)師先拭去過多的白帶或宮頸口的血液后，用采樣刷插入宮頸管內，輕緩施力順時針旋轉5周，不留死角，收集宮頸口的脫落細胞，將宮頸刷放入盛有保存液的小瓶內，送病理科檢測。

1.2.2涂片制備：

TCT制片是自動制片涂片，開啟Thinprop2000機器，將放有保存液的標本瓶放入固定槽，套上過濾膜，通過機器的攪拌分散細胞、采集、轉送細胞[2]，利用真空虹吸作用將細胞均勻噴涂在經(jīng)靜電處理過的玻片上，并自動將玻片送入固定瓶，固定液采用95%乙醇，固定時間十五分鐘以上。對于多血性及多粘液標本的處理，可經(jīng)離心震蕩制作涂片。

1.2.3涂片染色：

采用巴氏改良染色法，按順序從95%酒精固定15分鐘，水洗，浸入改良Gill半氧化蘇木素2min，水洗，1%氨水返藍1min，水洗，浸入95%酒精1min，桔黃G10s，95%酒精IIIIII各10s，浸入EA50染液1min，95%酒精IIIIII各10s，無水酒精IIIIII各2min，浸入二甲苯IIIIII各2min，中性樹膠濕封。

1.3細胞學診斷。

采用TBS分類標準[3]：無上皮內病變或惡性病變（NILM）；意義不明的非典型鱗狀細胞（ASCUS）；不除外高度鱗狀上皮內病變的非典型鱗狀細胞（ASC-H）；低度鱗狀上皮內病變（LSIL），包括人乳頭瘤病毒（HPV）感染和宮頸上皮內瘤變（CIN）I級；高度鱗狀上皮內病變（HSIL），包含CINII級、CINIII級或中重度異型增生及原位癌（CIS）；鱗狀細胞癌（SCC）；非典型腺細胞（AGC）；腺癌。該分類系統(tǒng)也對標本質量進行評估，對微生物和炎癥程度或萎縮等分別加以描述。TBS報告正常或炎性反應作為細胞學陰性，ASCUS及以上病變?yōu)榧毎麑W陽性。

1.4優(yōu)等片診斷標準。

據(jù)子宮頸細胞學Bethesda報告系統(tǒng)第二版[4]規(guī)定：一張質量好的TCT片最低細胞數(shù)量至少需要有5000個保存完好和形態(tài)清晰的鱗狀細胞。片子干凈，色彩鮮艷，無氣泡，封膠適量，鏡下細胞核、質清楚，角化細胞、非角化細胞一目了然，有助于診斷，此為優(yōu)等片。

1.5分析方法。

以優(yōu)等片為標準，分析不滿意片子的原因以及改進方法，進行質量控制。細胞學陽性者行陰道鏡檢查，在陰道鏡下對病變處取材做病理活檢，后行常規(guī)制片，HE染色，光鏡下觀察。對檢查的結果進行分析并以病理活檢診斷的結果為標準與細胞學進行對照。

2結果

2.1制片結果。

7018例片子中，有6989例達到優(yōu)等片這個標準，優(yōu)片率99.6%（6989/7018）；29例不滿意片子原因如下：5例制片染色太淡，核紅，原因是Gill蘇木素染色時間短，或返藍時間過短，或染液（包括桔黃G和EA50液）使用時間過長，采取延長Gill蘇木素返藍時間，或更換染液可達到優(yōu)等片標準；3例染色太濃，染色時縮短染色時間可達到優(yōu)等片標準，或采用1%鹽酸酒精分化；1例封片有氣泡，二甲苯浸泡至蓋玻片自動脫落，重新封片達到優(yōu)等片標準；20例血液和粘液過多，用Cytolyt液和離心機、震蕩儀多次處理后再制片，17例達到優(yōu)等片標準，2例血液、粘液過多導致細胞量太少和1例取材收集細胞太少，放棄診斷，要求重新取材。

2.2細胞學診斷結果。

NILM伴或不伴炎癥者6688例，95.30%，ASC-US173例，2.46%，ASC-H12例，0.17%，LSIL76例，1.08%，HISL29例，0.41%，SCC1例，AGC8例，0.11%。2.3組織學診斷結果。76例LISL有32例在本院行陰道鏡檢查，組織學23例符合，9例慢性宮頸炎，符合率71.88%；29例HISL有11例在本院行陰道鏡檢查，組織學10例符合，1例CINI，符合率90.90%；1例SCC行陰道鏡檢查，組織學為宮頸中-高分化鱗癌，符合率100%。

3討論

近年液基制片技術的出現(xiàn)大大提高了宮頸癌及癌前病變的檢出率[5]，TCT是有效的宮頸癌篩查技術，克服了傳統(tǒng)涂片的缺陷。本研究表明，絕大部分TCT制片達到了優(yōu)等片標準，有助于診斷，減少了重新取樣的病例數(shù)。而小瓶中剩余的可用于后續(xù)的檢測，如HPV、免疫組化、分子病理等輔助性檢查[6]。但TCT的假陰性，假陽性診斷任客觀存在，所以從標本采集、制片、染色等技術過程介紹如何提高TCT的制片質量，有效降低TCT假陽性和假陰性。

3.1標本采集。

子宮頸上皮的CIN和子宮鱗狀細胞癌大多累及子宮鱗狀上皮和柱狀上皮交界處，即移行帶[7]，所以標本采集應采集到病變部位和宮頸的移行區(qū)（鱗柱交界區(qū)）細胞。檢查前準備：①3天內不使用陰道內藥物或對陰道進行沖洗；②24小時內不應有性行為；③檢查應在非月經(jīng)期內進行。具體取樣步驟：①由醫(yī)生以窺陰器或陰道張開器暴露宮頸；②將宮頸刷的尖端放入宮頸內口，兩邊緊貼頸管外口，輕輕搓動宮頸刷使其順時針旋轉5圈；③慢慢取出宮頸刷，將其放入標有病人編號的小瓶中，小瓶內已加有專用細胞保存液，擰緊瓶蓋；④送檢樣本到病理科。注意標本采集時，先輕輕擦拭過多的白帶或宮頸口的血液，涂片中除鱗狀上皮細胞外，必須見到柱狀上皮細胞或化生的鱗狀上皮細胞。細胞數(shù)，有效細胞成分，供診斷細胞太少或太多紅細胞等因素均可造成假陰性結果。

3.2標本保存固定。

取材后將細胞立即放入放有保存液小瓶里，瓶蓋旋緊，以免倒漏。制片完畢后立即固定，TCT的保存液是一種良好的防腐劑，對細胞有一定的固定作用，但仍未達到固定效果，制片后必須用標準濃度95%乙醇固定，使細胞形態(tài)保存更完好。固定液量還必須充足，新鮮，保持有效濃度。

3.3標本制備。

制片時，如果遇到粘液和血液過多的標本，應采用Cytolyt液和離心機多次處理再制片，以達到優(yōu)等片標準。如紅細胞較多，大紅瓶可以加入1:9的冰醋酸震蕩離心處理后制片；如粘液較多，若成塊的粘液用鑷子取出后再制片；糊狀嚴重者倒出部分，加保存液（大綠瓶）至小瓶的上下線。對粘液、血液實在太多的標本，要求重取材。本文3例標本粘液、血液實在太多，重新取材。

3.4標本染色。

細胞學的常規(guī)染色方法有巴氏染色、蘇木素-伊紅（HE）染色、瑞氏（Wright）染色、邁-格-姬（MGG）染色(8)，巴氏染色法常用于測定細胞雌激素的水平，所以宮頸細胞用巴氏染色法更理想。染色失敗的補救：巴氏染色時遇到染色質量不佳或片子長期存放而退色時，可按以下程序處理后重染：把片子浸泡在二甲苯液內，直到蓋玻片自動脫落，然后片子放入二甲苯內充分浸泡，使樹膠完全融掉。依次放入無水乙醇和95%乙醇中，各2min后放入流水中漂洗，直到胞質顏色完全脫落干凈為止。再放入0.5%鹽酸酒精中分化至顯微鏡下觀察細胞核顏色完全退掉，最后水洗，重新染色，染色時間需要根據(jù)不同環(huán)境溫度進行調節(jié)。冬季溫度較低時延長染色時間，夏季溫度高時，應縮短染色時間。本文結果提示應不斷提高制片技術，加強并逐漸完善細胞形態(tài)學檢查的質量要求與控制，準確診斷率可反應一個單位團體及其診斷者的細胞學水平和準確率。同時，會診和借片有利于交流和借鑒，建立細胞學涂片檔案室，涂片陰性標本至少要保存1年，陽性標本保存5年以上[9]。不斷提高技術質量，既需要實驗室規(guī)范的操作技術，又需要一定的病理學基礎知識，所以必須高度重視和加強對專業(yè)人才的培養(yǎng)。

參考文獻

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[8]全國衛(wèi)生專業(yè)技術資格考試專家委員會.病理學技術[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009.11.

[9]漆明,蔣慶軍，韋海春,等.液基細胞學標本制片、染色及診斷技術的質量控制[J].右江民族醫(yī)學院學報，2009,31（3）:467.

作者：鄧曉紅 石新蘭 李振強 崔鐵莉 賈靜 李玉廣 張寧 林經(jīng)萍 單位：北京市石景山醫(yī)院病理科  北京市石景山醫(yī)院婦產(chǎn)科