分子生物學技術(shù)精選(九篇)

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第1篇：分子生物學技術(shù)范文

關(guān)鍵詞：羊肉；鴨肉；分子生物學；鑒別

Abstract： This study has established a molecular biological method for the identification of mutton adulterated with duck meat. Based on the target genes， namely the mitochondrial cytochrome b gene （cytb） sequences of mutton and duck， we designed one universal forward primer （F） and two specific reverse primers （Rmutton and Rduck） and mixed them in a certain proportion. The target DNA fragments were obtained by one cycle of polymerase chain reaction （PCR） amplification. By the sizes of the DNA bands in the agarose gel， we judged whether the mutton was adulterated with duck. Results indicated that duck adulteration in the tested samples could be confirmed by the appearance of specific bands at both 367 and 480 bp. On the other hand， the appearance of specific bands at 367 bp but not at 480 bp could not confirm mutton adulteration with duck. The proposed method in this study was accurate， reliable， simple， quick and useful for meat species screening and the detection and supervision of adulterated meat.

Key words： mutton； duck； molecular biology； identification

DOI：10.7506/rlyj1001-8123-201705009

中D分類號：TS251.7 文獻標志碼：A 文章編號：1001-8123（2017）05-0046-05

羊肉性溫，中醫(yī)認為進食羊肉可以補虛益氣，促進人體血液循環(huán)，提高抵抗力，因此羊肉成為冬季滋補及抗寒的重要食物來源[1]。近年來，隨著生活水平的不斷提高，羊肉及其制品的消費量不斷上升，涮羊肉、烤羊肉等都深受消費者的喜愛[2]。然而部分商販為了獲取不法利益，利用食品質(zhì)量檢測手段的不足，用價格相對低廉的肉類冒充羊肉或者將其摻入羊肉中進行販賣，尤其是羊肉卷和羊肉串等加工后的羊肉制品，消費者難以從形態(tài)紋理和肉質(zhì)口感上對其進行識別，這種摻假造假的行為嚴重干擾市場秩序，影響消費者的身體健康和合法權(quán)益[3-5]，因此加強對該類食品的品質(zhì)鑒別十分必要。

早期的肉源鑒別技術(shù)主要依靠光譜、色譜及酶聯(lián)免疫吸附測定等技術(shù)[6-10]，但因操作復(fù)雜、耗時耗力且對樣品要求高而不能滿足對肉制品進行準確、快速鑒別的需求。隨著基因工程的普及推廣，以聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測為代表的分子生物學檢測手段已成為各類食品摻假檢測的標準化方法[11-12]，也是轉(zhuǎn)基因食品判別技術(shù)研究的熱點方向。

根據(jù)線粒體基因組DNA序列差異設(shè)計物種特異性引物在常規(guī)PCR方法中已見報道[13-14]，但多數(shù)方法一次只能擴增一個目的片段，如果單獨檢測每一個項目，則存在費時費力、步驟繁瑣和消耗試劑量大等弊端。因此，亟需建立一套準確度高、重復(fù)性好且特異性強的分子生物學檢測方法，為規(guī)范市場秩序、保障食品安全提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮羊肉、鴨肉、雞肉和牛肉樣品均購買于農(nóng)貿(mào)市場。

動物組織全基因組提取試劑盒 北京全式金公司；Taq DNA聚合酶、PCR緩沖液、瓊脂糖 生工生物工程（上海）股份有限公司；dNTP、核糖核酸酶A、DS2000 DNA Marker、1 kb DNA Ladder Marker、蛋白酶K溶液、膠回收試劑盒 日本TaKaRa公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Thermal Cycler PCR儀 美國Hybaid公司；Dyy-11凝膠電泳儀及電泳槽 中國六一機械廠；AlphaImager HP凝膠成像系統(tǒng) 美國Alpha Inotech公司；Microfuge 22R高速冷凍離心機 美國Beckman公司。

1.3 方法

1.3.1 DNA提取

1.3.1.1 純?nèi)鈽覦NA提取

稱取羊肉、鴨肉、雞肉和牛肉各20 mg左右，分別置于研缽中用液氮研磨至粉末，使用DNA提取試劑盒提取各肉樣總DNA。并對提取得到的DNA進行純化，除去殘存蛋白質(zhì)和RNA，使用紫外分光光度儀和凝膠電泳測試DNA的濃度及純度，并將DNA稀釋至質(zhì)量濃度為20 ng/μL備用。

1.3.1.2 羊肉、鴨肉混合樣品的制備及DNA提取

分別稱取99 g羊肉和1 g鴨肉，將兩者絞碎并混合，再用電動組織勻漿器進行研磨、勻漿，制成摻雜鴨肉的混合肉樣，取20 mg混合肉樣按1.3.1.1節(jié)的方法提取其DNA并進行檢測，將DNA稀釋至質(zhì)量濃度為20 ng/μL備用。

1.3.2 引物設(shè)計

在GenBank中檢索得到羊（accession EM130780.1）和鴨的線粒體基因序列（accession KC466567.1）。通過LaserGene中的MegAlign工具在基因庫中分析和比對羊、鴨的線粒體基因保守序列，確定針對不同物種線粒體細胞色素b基因（cytb）中的特定片段，分別設(shè)計2 種物種的相同上游引物F和具有各自物種特異性的下游引物（羊引物R羊、鴨引物R鴨），引物信息詳見表1。

1.3.3 引物特異性驗證

分別用羊肉、鴨肉、雞肉和牛肉的全基因組作為PCR擴增模板，加入羊肉特異性引物（F/R羊）得到PCR擴增a物，取5 μL產(chǎn)物進行凝膠電泳檢測，驗證羊肉引物的特異性。鴨肉引物（F/R鴨）的特異性驗證同羊肉引物。

1.3.4 羊肉、鴨肉成分的鑒定

將羊肉特異性引物和鴨肉特異性引物混合，使用提取的羊肉、鴨肉及其混合肉樣的DNA作為模板進行PCR擴增，多次優(yōu)化實驗以確定引物配比，其最佳反應(yīng)體系見表2。

最佳PCR反應(yīng)條件為：94 ℃、5 min；94 ℃、30 s；50 ℃、30 s；72 ℃、30 s；32 個循環(huán)；最后72 ℃延伸8 min。取5 μL產(chǎn)物進行凝膠電泳檢測。

1.3.5 羊肉真?zhèn)舞b別

隨機抽取在售羊肉5 批，按照1.3.1.1節(jié)的方法提取肉樣DNA，并按照1.3.4節(jié)進行PCR檢測和凝膠電泳，鑒定此5 批肉樣中是否含有鴨肉成分。將市售羊肉PCR檢測擴增出的條帶進行切膠回收，分別送至青島擎科生物技術(shù)有限公司進行測序，并將測序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫中羊和鴨的線粒體Cytb基因序列進行比對。

2 結(jié)果與分析

2.1 肉樣DNA質(zhì)量及純度檢測

采用1.3.1節(jié)中的方法提取的羊肉、鴨肉、雞肉、牛肉及混合樣的DNA凝膠電泳結(jié)果見圖1。

由圖1可知，所有樣品的條帶清晰，無明顯拖帶且電泳孔亮度不明顯，說明提取的總DNA無降解、無蛋白質(zhì)殘留。用紫外分光光度儀測得DNA樣品的OD260 nm/OD280 nm均在1.8～2.0之間，符合進行PCR的要求。

2.2 引物特異性檢測

基于PCR手段對樣品進行鑒別時，首先必須確定合成的引物是否具有特異性，以確保用此引物進行的PCR反應(yīng)能得到特異性目的片段，進而確定其能否滿足檢測需要。按1.3.3節(jié)的方法分別使用羊肉引物（F/R羊）、鴨肉引物（F/R鴨）對4 種肉樣進行PCR擴增，結(jié)果見圖2～3。

由圖2～3可知，僅在羊肉樣品中檢測到單一目的條帶，而在其他肉類中未檢測到條帶，說明本實驗設(shè)計的羊肉引物（F/R羊）具有特異性；使用鴨肉引物進行PCR反應(yīng)，同樣僅在鴨肉中檢測到明顯的目的條帶，說明設(shè)計的鴨肉引物（F/R鴨）特異性良好。

2.3 羊肉中鴨肉成分的鑒定

按1.3.4節(jié)配制PCR擴增體系并進行PCR擴增，羊肉、鴨肉及其混合肉樣的電泳結(jié)果如圖4所示。

由圖4可知，經(jīng)過調(diào)整引物比例和優(yōu)化反應(yīng)參數(shù)，在相同的反應(yīng)體系下，單一模板及混合模板的PCR產(chǎn)物條帶均清晰、單一，并與引物設(shè)計中的預(yù)期條帶大小一致，且混合模板的電泳條帶差別明顯，說明本研究用于羊肉中鴨肉摻假鑒別的PCR檢測方法可以達到預(yù)期效果，2 種肉類均可實現(xiàn)特異、高效的PCR擴增與鑒別。

2.4 市售羊肉的PCR檢測

根據(jù)上述檢測方法，隨機抽取5 份市場流通中的羊肉進行檢測。由圖5可知，第1批羊肉在480 bp和367 bp處出現(xiàn)2 條特異性條帶a1和a2，表明該批羊肉中摻雜有鴨肉；第2、5批羊肉只在367 bp處出現(xiàn)羊的特異性目標條帶b和e，表明該2 批羊肉中未摻雜鴨肉；而第3、4批羊肉則只在490 bp處出現(xiàn)鴨的特異性目標條帶c和d，說明該2 批羊肉為假冒產(chǎn)品。陰性對照樣品未出現(xiàn)條帶。

將條帶a1、a2、b、c、d、e的測序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫中羊和鴨的線粒體Cytb基因序列進行比對，結(jié)果如圖6～7所示。

由圖6～7可知，a2、b和e序?qū)嵨挥谘蚓€粒體Cytb基因序列上，a1、c和d序?qū)嵨挥邙喚€粒體Cytb基因序列上。

3 討 論

市場調(diào)研結(jié)果表明，流通領(lǐng)域中的羊肉有不同程度的摻偽造假現(xiàn)象，其中尤以摻雜鴨肉現(xiàn)象最為突出[15]，羊肉的質(zhì)量安全逐漸受到消費者和市場監(jiān)管部門的重視。因此，建立一種準確度高、重復(fù)性好的檢測方法，對于相關(guān)部門加強對市場的監(jiān)管十分必要。本研究采用的PCR鑒定方法較其他方法具有更高的靈敏性、特異性和便捷性，因此其在肉類品種鑒定分析上起到重要作用[16-18]。

研究表明，在物種進化過程中，線粒體DNA的進化速度要快于細胞核內(nèi)的DNA[19]，因此線粒體DNA具備更明顯的種間多態(tài)性和種內(nèi)多態(tài)性，能夠更精準地將有較近親緣關(guān)系的物種區(qū)分開來[20-21]。另一方面，細胞中線粒體DNA的含量是核DNA的1 000 倍以上，線粒體內(nèi)DNA具有更加穩(wěn)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，跟細胞核內(nèi)DNA相比，線粒體DNA的提取比較簡單，并可以應(yīng)用于PCR反應(yīng)中[22]。

因此在國內(nèi)外的研究中，用于肉類來源鑒定的序列主要位于線粒體上，其中最常用的序列為12S rDNA、16S rDNA、Cytb和D-loop等[23-26]。

本研究通過對羊、鴨的線粒體Cytb進行分析比對，根據(jù)分析結(jié)果在序列保守區(qū)設(shè)計羊、鴨通用的上游兼并引物，并分別在兩者的序列特異區(qū)設(shè)計特異性下游引物，采用一次PCR反應(yīng)的方法鑒別羊肉中是否摻雜鴨肉，經(jīng)反復(fù)實驗證明，該方法可實現(xiàn)在一個反應(yīng)體系中體現(xiàn)出2 個不同物種的特異性，且引物序列具備靈敏性和穩(wěn)定性；所建立的PCR檢測方法樣品用量少，可在幾小時內(nèi)準確、快速地得出結(jié)果，具有較強的實用性。

隨著生物技術(shù)（基因芯片、蛋白質(zhì)芯片等）的飛速發(fā)展和其他新興技術(shù)的不斷涌現(xiàn)，在后續(xù)的工作中，需要進一步加強基因檢測等多種檢測技術(shù)的結(jié)合使用，擴大應(yīng)用領(lǐng)域[27-28]。例如：基于基因的多態(tài)性，在PCR的基礎(chǔ)上發(fā)展指紋圖譜技術(shù)和DNA條形碼技術(shù)，不僅可以鑒定物種還可以追蹤溯源[29-30]；在生產(chǎn)及檢測過程中引入大數(shù)據(jù)技術(shù)，構(gòu)建數(shù)據(jù)庫，共享物種的特征數(shù)據(jù)及模型；在現(xiàn)有的檢測技術(shù)基礎(chǔ)上，研發(fā)更加低成本、高通量、準確可靠的檢測方法，提高摻假檢測鑒別的能力，完善肉類摻假檢測技術(shù)體系，為我國肉類食品的質(zhì)量安全做好保障，這些工作需要在今后的研發(fā)中作進一步的探索。

參考文獻：

[1] 鄭燦龍. 羊肉的營養(yǎng)價值及其品質(zhì)的影響因素[J]. 肉類研究， 2003， 17（1）： 47-48.

[2] 丁存振， 肖海峰. 我羊肉供需現(xiàn)狀及趨勢分析[J]. 農(nóng)業(yè)經(jīng)濟與管理， 2016， 37（3）： 86-96.

[3] 張慧霞， 宗卉， 吳建平， 等. 應(yīng)用SYBR GreenⅠ實時熒光PCR溶解曲線檢測鵪鶉源性成分[J]. 中國畜牧雜志， 2010， 46（17）： 70-72.

[4] HUBALKOVAL Z， KRALIK P， TREMLOVA B， et al. Methods of gadoid fish species identification in food and their economic impact in the Czech republic： a review[J]. Veterinarni Medicina， 2007， 52（7）： 273-292.

[5] 張馳， 邱皓璞， 張筠， 等. 熒光定量PCR檢測肉制品中鴨源性成分[J]. 食品科學， 2013， 34（18）： 154-157.

[6] 馬永征， 馬冬， 白娣斯， 等. 免疫學檢測肉類制品摻假研究進展[J]. 肉類研究， 2012， 26（9）： 26-29.

[7] MAGDSIENA M， EDWARD P. Species identification of meat by electrophoretic methods[J]. Acta Scientiarum Polonorum Technologia Alimentaria， 2007， 6（1）： 5-16.

[8] XU Y J， JIN M L， WANG L J， et al. Differential proteome analysis of porcine skeletal muscles between Meishan and Large White[J]. Journal of Animal Science， 2009， 87（8）： 2519-2527. DOI：10.2527/jas.2008-1708.

[9] SENTANDREU M ?， SENTANDREU E. Authenticity of meat products： tools against fraud[J]. Food Research International， 2014， 60（6）： 19-29. DOI：10.1016/j.foodres.2014.03.030.

[10] MONTOWSKA M， POSPIECH E. Species-specific expression of various proteins in meat tissue： proteomic analysis of raw and cooked meat and meat products made from beef， pork and selected poultry species[J]. Food Chemistry， 2013， 136（3/4）： 1461-1469. DOI：10.1016/j.foodchem.2012.09.072.

[11] AIDA A A， CHEMAN Y B， WONG C M， et al. Analysis of raw meats and fats of pigs using polymerase chain reaction for Halal authentication[J]. Meat Science， 2005， 69（1）： 47-52. DOI：10.1016/j.meatsci.2004.06.020.

[12] SHARMA A， KMMAR S， SHARMA N， et al. Prospects in bioscience： addressing the issues[M]. India： Springer， 2013： 49-54. DOI：10.1007/978-81-322-0810-5.

[13] 李通， 尹艷， 王海， 等. 聚合酶鏈式反應(yīng)快速鑒別5 種常見肉類別[J]. 食品科學， 2013， 34（8）： 249-252.

[14] HOPWOOD A J， FAIRBROTHER K S， LOCKLEY A K， et al. An actin gene-related polymerase chain reaction （PCR） test for identification of chicken in meat mixtures[J]. Meat Science， 1999， 53（4）： 227-231.

[15] 王彤， 劉顯軍. 混合羊肉卷的鑒別與管理[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)， 2013， 33（16）： 69-70. DOI：10.13881/ki.hljxmsy.2013.16.033.

[16] ABBAS D， PAYAM G D， EBRAHIM R. Molecular assay to fraud identification of meat products[J]. Journal of Food Science and Technology， 2014， 51（1）： 148-152. DOI：10.1007/s13197-011-0456-3.

[17] 李瀟， 曲焱焱， 張丕喬， 等. 聚合酶鏈式反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性和芯片生物分析技術(shù)用于渤海地區(qū)魚種鑒定[J]. 色譜， 2011， 29（7）： 673-676.

[18] 范麗麗， 李培， 傅春玲， 等. 實時熒光聚合酶鏈式反應(yīng)法檢測食品中豬源性成分[J]. 食品科學， 2013， 34（8）： 224-227.

[19] HEBERT P D N， RATNASINGHAM S， WAARD J R D. Barcoding animal life： cytochrome c oxidase subunit 1 divergences among closely related species[J]. Proceedings of the Royal Society B： Biological Sciences， 2003， 270（Suppl1）： 96-99. DOI：10.1098/rsbl.2003.0025.

[20] DAVID S， SCOTT E M. DNA barcoding a useful tool for taxonomists[J]. Nature， 2005， 435： 17. DOI：10.1038/435017b.

[21] SACCONE C， de GIORGI C， GISSI C， et al. Evolutionary genomics in Metazoa： the mitochondrial DNA as a model system[J]. Gene， 1999， 238（1）： 195-209. DOI：10.1016/S0378-1119（99）00270-X.

[22] CHANDRIKA M， ZAINONMOHD N， MAIMUNAH M， et al. Meat species identification and Halal authentication analysis using mitochondrial DNA[J]. Meat Science， 2009， 83（1）： 57-61. DOI：10.1016/j.meatsci.2009.03.015.

[23] MIGUEL V， MEIKE T， ARIE M， et al. Comparative performance of the 16S rRNA gene in DNA barcoding of amphibians[J]. Frontiers in Zoology， 2005， 2（1）： 1-12. DOI：10.1186/1742-9994-2-5.

[24] RAMADAN H A I. Sequence of specific mitochondrial 16S rRNA gene fragment from Egyptian buffalo is used as a pattern for discrimination between river buffaloes， cattle， sheep and goats[J]. Molecular Biology Reports， 2011， 38（6）： 3929-3934. DOI：10.1007/s11033-010-0509-0.

[25] HSIEH H M， CHIANG H L， TSAI L C， et al. Cytochrome b gene for species identification of the conservation animals[J]. Forensic Science International， 2001， 122（1）： 7-18. DOI：10.1016/S0379-0738（01）00403-0.

[26] 王康h， 金紅， 蔣利， 等. 藏系綿羊、新疆細毛羊及阿勒泰羊mtDNA D-loop基因序列分析及系統(tǒng)進化研究[J]. 中國畜牧獸醫(yī)， 2014， 41（1）： 160-166.

[27] 歐陽小艷， 莫幫輝， 余華麗. DNA條形碼識別-DNA條形碼與DNA芯片識別蚊媒準確性的比較[J]. 中國國境衛(wèi)生檢疫雜志， 2007， 30（6）： 349-352.

[28] ESCHER N， KAATZ M， MELLE C， et al. Posttranslational modifications of transthyretin are serum markers in patients with mycosis fungoides[J]. Neoplasia， 2007， 9（3）： 254-259. DOI：10.1593/neo.06805.

第2篇：分子生物學技術(shù)范文

【關(guān)鍵詞】農(nóng)產(chǎn)品；有毒有害物質(zhì)；分子生物學；檢測技術(shù)

0 前言

民以食為天，食以安為先。農(nóng)產(chǎn)品安全性要求農(nóng)產(chǎn)品中不應(yīng)含有可能損害或威脅人體的物質(zhì)或因素，它關(guān)系到人體健康和社會穩(wěn)定。隨著世界經(jīng)濟全球化、貿(mào)易自由化和農(nóng)產(chǎn)品國際貿(mào)易的迅速發(fā)展，農(nóng)產(chǎn)品安全已成為事關(guān)人民健康和構(gòu)建和諧社會的重大戰(zhàn)略問題，及時、安全、準確地檢測出農(nóng)產(chǎn)品中的病原微生物是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測的重要內(nèi)容。隨著農(nóng)產(chǎn)品分析物質(zhì)的不斷微量和痕量化，農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)的不斷復(fù)雜，僅使用傳統(tǒng)分析技術(shù)已難以解決所有的問題。分子生物學技術(shù)不僅可以簡化前處理過程、而且操作簡便、檢測成本低、安全可靠，且能進行特異性處理分析，其在農(nóng)產(chǎn)品分析中占據(jù)越來越高的比例[1]，目前在農(nóng)產(chǎn)品 檢測中常用的技術(shù)包括：酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）、基因芯片技術(shù)、分子印跡技術(shù)、聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)、試紙條快速檢測技術(shù)、流動注射免疫分析技術(shù)、生物傳感器技術(shù)（biosensor）等。分子生物學技術(shù)解決了傳統(tǒng)農(nóng)產(chǎn)品前處理所不能解決的問題，特別是在農(nóng)產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)檢測中發(fā)揮了重要的作用。

1 應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中的分子生物學技術(shù)

1.1 酶聯(lián)免疫分析技術(shù)

酶聯(lián)免疫分析技術(shù)是20世紀70年代初期由荷蘭學者Weeman與Schurrs和瑞典學者Engvall與Perlman幾乎同時提出的。最初ELISA主要用于病毒和細菌的檢測，20世紀70年代后期開始廣泛應(yīng)用于抗原、抗體的測定，范圍涉及到一些藥物、激素、毒素等半抗原分子的定性定量檢測。它是在RIA理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性標記免疫分析技術(shù)。它利用酶標記物同抗原抗體復(fù)合物的免疫反應(yīng)與酶的催化放大作用相結(jié)合，既保持了酶催化反應(yīng)的敏感性，又保持了抗原抗體反應(yīng)的特異性，極大的提高了靈敏度，且克服了RIA操作過程中放射性同位素對人體的傷害。酶聯(lián)免疫分析法在農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中最為常用[2]。農(nóng)獸 藥殘留免疫分析方法的建立包括待測物選擇、半抗原合成、人工抗原合成、抗體制備、測定方法建立、樣本前處理方法和方法評價等步驟。ELISA具有樣品前處理簡單，純化步驟少，大量樣本分析時間短，適合于做成試劑盒現(xiàn)場篩選等優(yōu)點，使其可試驗快速現(xiàn)場監(jiān)測，是現(xiàn)階段農(nóng)產(chǎn)品安全檢測領(lǐng)域應(yīng)用較多的一項檢測技術(shù)。目前酶聯(lián)免疫檢測的農(nóng)、獸藥殘留種類主要包括：有機磷農(nóng)藥、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥、有機氯類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類、獸藥類等。

1.2 PCR技術(shù)（聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)）

該技術(shù)誕生于1985年，由美國Cetus公司和加州大學聯(lián)合創(chuàng)建。PCR技術(shù)利用變性與復(fù)性原理，在體外使用DNA 聚合酶，在引物的引導(dǎo)和脫氧核糖核苷酸（dNTP）的參與下將模板在數(shù)小時內(nèi)進行百萬倍擴增。該技術(shù)可選擇性地放大特定的DNA序列，因此在農(nóng)產(chǎn)品致病性微生物檢測方面發(fā)揮著越來越重要的作用[3]。實時定量PCR技術(shù)是近年發(fā)展起來的新型技術(shù)，該技術(shù)通過直接測定PCR 過程中熒光信號的變化，利用電腦分析軟件對PCR過程中產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物進行動態(tài)監(jiān)測和自動定量，從而成功地實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍。而且，使用實時定量PCR技術(shù)不需要進行凝膠電泳，避免了交叉污染，使反應(yīng)具有更強的特異性和更高的自動化程度。隨著分子生物學技術(shù)的不斷發(fā)展，多重PCR[4]、標記 PCR和不對稱PCR等多種不同的PCR方法都被應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品檢測中，它們的應(yīng)用使PCR技術(shù)擁有了更高的靈敏度和更短的周期[5]。

1.3 試紙條快速檢測技術(shù)

試紙條與試劑盒相比較具有更加易于攜帶、檢測更加迅速等優(yōu)勢。在實際檢測過程中，特別是現(xiàn)場快速檢測，并不一定需要對每個樣品都獲得定量數(shù)據(jù) 而只需要定性地判別出某個樣品是否含有某種農(nóng)獸藥，含量是否超過規(guī)定標準既可[6]。因此只需要幾分鐘或十幾分鐘就可以獲得結(jié)果的快速檢測試紙條是最為合 適的檢測工具[7]。試紙條技術(shù)與試劑盒相類似，其特點是以微孔膜作為固相載 體。標記物可用酶或各種有色微粒子，如彩色乳膠、膠體金、膠體硒等，以紅色的膠體金最為常用。固相膜的特點在于其類似濾紙的多孔性。液體可穿過固相膜流出，也可以通過毛細管層析作用在膜上向前移行。常用的固相載體膜為硝酸纖維素膜、尼龍膜等。試紙條技術(shù)主要包括酶標記免疫檢測技術(shù)（immunoenzyme labeling technique）和膠體金標記免疫檢測技術(shù)（immunogold labelling technique）。酶標記免疫檢測技術(shù)是以酶為示蹤標記物，而膠體金標記免疫檢測技術(shù)是以膠體金作為示蹤標記物，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標記技術(shù)。

1.4 流動注射免疫分析技術(shù)

流動注射免疫分析法是將速度快、自動化程度高、重現(xiàn)性好的流動注射分析與特異性強、靈敏度高的免疫分析集為一體。這種分析方法具有分析時間短、需要樣品量小和操作簡便等特點[8]。利用FIIA對一些樣品分析，測定耗時不足 1min。FIIA有：均相FIIA和非均相FIIA。流動注射免疫分析主要包括：流動注射脂質(zhì)體免疫分析技術(shù)、流動注射熒光檢測、流動注射化學發(fā)光檢測、流動注射分光光度檢測和流動注射電化學檢測。利用FIIA 是一種靈敏性、專一性、準確性好、快速、節(jié)約成本的方法，樣品也不需要預(yù)處理和富集。

2 結(jié)語

隨著經(jīng)濟的全球化發(fā)展和農(nóng)產(chǎn)品的跨區(qū)域、跨國際流通，對農(nóng)產(chǎn)品病原菌的檢測要求也越來越高。從定性和定量兩方面出發(fā)，準確、快速、經(jīng)濟的檢測 方法是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測的發(fā)展方向。盡管分子生物學檢測方法具有諸多優(yōu)點，但目前它們大多處于實驗室階段，不能廣泛應(yīng)用于實踐，僅能作為標準檢測方法的參考。因此，在今后的工作中應(yīng)進一步加快研究步伐，建立真正實用的農(nóng)產(chǎn)品快速檢測方法。產(chǎn)品快速檢測方法。

【參考文獻】

[1]楊大進.改革開放30年食品理化檢測方法的發(fā)展[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2009，21（4）：309-312.

[2]尤敏霞.酶聯(lián)免疫吸附法在食品檢驗中的應(yīng)用[J].河南預(yù)防醫(yī)學雜志，2009，20（3）：237-238，240.

[3]周曉紅，李暉，楊杏芬.食品中諾如病毒RT-PCR檢測技術(shù)研究進展[J].國外醫(yī)學衛(wèi)生學分冊，2009，36（4）：234-238.

[4]宋岱松.多重PCR技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用[J].山東畜牧獸醫(yī)，2009，30（5）：57-58.

[5]雷永良，王曉光，葉碧峰，梅建華，柳付明，陳莎彬，蘭進權(quán)，李永芬，陳秀英.實時熒光定量技術(shù)在食品污染物監(jiān)測中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009，19（4）：828-830，857.

[6]黃小燕，梁珠嫻，李繁，魯玉花.鹽酸克倫特羅快速檢測試紙條的應(yīng)用探討[J].云南大學學報：自然科學版，2008，30（S1）：446-449.

第3篇：分子生物學技術(shù)范文

PCR是一種在機體外部迅速擴大增加特定基因或DNA序列的方法,它是由美國科學家Mullis在1983年發(fā)明的。RT-PCR是從RNA拷貝擴增cDNA的一種方法,其具體操作過程是:首先反轉(zhuǎn)RNA并錄成cDNA,再經(jīng)過PCR加以擴增,從而使它的敏感性得以有效提高,針對dotblot或Northernblot中含有的目的mRNA不高的問題,這一技術(shù)可以有效解決。例如:鄭小偉等人為了對二仙湯治療腎陽虛證的作用機理進行有效的闡釋,在各不相同的時間范圍內(nèi),研究了二仙湯對于患有腎陽虛的大鼠垂體促腎上腺皮質(zhì)激素基因表達所產(chǎn)生的影響,最終的研究結(jié)果表明:二仙湯可以上調(diào)垂體組織ACTH的基因表達,而且用藥的時間如果被延長,那么其表達量就會得到增加,這可以反映出上調(diào)ACTHmRNA表達,是利用二仙湯對腎陽虛證進行治療的作用機理之一;β地中海貧血是一種具有遺傳性和溶血性的貧血病,補腎生血膠囊可以益髓、生血、補腎,對于治療雜合子患者效果比較顯著。為了對其分子機理進行揭示,吳志奎等人利用RT-PCR的相關(guān)技術(shù),研究了使用補腎生血膠囊的患者的α、β和γ珠蛋白mRNA轉(zhuǎn)錄水平,最終得出的研究結(jié)果認為,補腎生血膠囊能夠有效地促進患有β地中海貧血的患者血紅和抗堿血紅蛋白,以及Hb珠蛋白鏈比的明顯增加,相應(yīng)地升高了γ珠蛋白mRNA轉(zhuǎn)錄水平,這表明有關(guān)的補腎生血的中藥對于γ珠蛋白的轉(zhuǎn)錄與表達的促進是非成有力的,而且可以通過誘導(dǎo)促進HbF的合成,同時也代償了β珠蛋白基因所具有的缺陷。

2DDPCR技術(shù)

梁鵬等人于1992年創(chuàng)立了DDPCR技術(shù),具體說就是一種利用PCR技術(shù),對來源各異的mRNA樣品里面的多種cDNA基因一并進行擴充增加與表達的實驗方法。具體說就是:采用錨定反義和隨機正義這兩種類型不同的合成寡核苷酸引物,通過把具有不同來源的擴增cDNA產(chǎn)物的電泳帶譜進行對比,能夠發(fā)現(xiàn)表達存在差異的基因。在中藥作用機理研究的過程中,唐發(fā)清等人主要探索了益氣解毒片如何干預(yù)鼻咽癌患者細胞基因的表達,旨在立足于具有選擇性特征的基因表達水平,研究益氣解毒片對于鼻咽癌進行防治的機理,最終得出研究結(jié)論:益氣解毒片能夠在患者的機體外有效地抑制鼻咽癌細胞基因的表達,除此之外,也可以誘導(dǎo)某些特異基因的表達,最終控制鼻咽癌細胞的生長和發(fā)展。

3核酸分子雜交技術(shù)

核酸分子雜交技術(shù)在目前的分子生物學領(lǐng)域是最基本的,其主要的應(yīng)用原理為:基于特定的條件,2條核酸單鏈(具有一定的同源性)通過堿基互補退火形成雙鏈。雜交的對象主要是待測核酸序列與探針,其中核酸被提取分離后在體外與探針進行雜交的被稱為印跡雜交,而在組織細胞內(nèi)直接進行雜交被稱為原位雜交。在研究中藥作用機理的過程中常用的比較早的有印跡雜交、點雜交和原位雜交。例如:二仙湯主要用于婦女更年期綜合征的治療,屬于抗衰老的知名方劑,廖柏松等人利用核酸分子雜交技術(shù),研究18月大的雌性大鼠下丘腦內(nèi)阿片肽的基因表達水平,得出的研究結(jié)論認為:二仙湯組β內(nèi)啡肽前體阿黑皮素原和腦啡肽原的mRNA水平得到了顯著的提高,與未衰老前的水平相當。因此,可以得出這樣的結(jié)論:二仙湯本身所具有的抵抗衰老的功能,是借助于增強抗氧化酶基因表達水平來實現(xiàn)的。

4DNA陣列技術(shù)

第4篇：分子生物學技術(shù)范文

關(guān)鍵詞：現(xiàn)代分子生物學技術(shù)；創(chuàng)新性試驗；試驗教學改革

中圖分類號 G642.0 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2017）08-0182-03

Abstract：Taking the experiment of “Construction of the eukaryotic expression vector of Flag-ILKAP-pCMV-2b and then detection of the expression by western-blotting in HEK293T cells” as an example，we expored the design scheme，experimantal implementations and results and analysis by the use of modern molecular biological techniques.The implementation of experiment program trained the capability and idea of innovation，foster students' experimental design and operation skills，and also enhanced the initiative and teamwork ability.

Key words：Modern molecular biology technology；Innovation experiment；Experimental teaching reform

新是一個民族的靈魂，是國家綜合國力得以提高的根本，是科學技術(shù)迅猛發(fā)展的基礎(chǔ)。隨著社會經(jīng)濟發(fā)展和時代進步，社會對高等教育提出了更高的要求，具備“創(chuàng)新精神與創(chuàng)新能力”的創(chuàng)新型人才，已成為知識經(jīng)濟時展的迫切需求。大學生作為最具有自主創(chuàng)新能力的社會群體，是創(chuàng)新型國家建設(shè)過程中最為積極活躍的因素，因此，激發(fā)大學生的創(chuàng)新意識和創(chuàng)新能力，是構(gòu)建“創(chuàng)新型國家”的重要組成部分[1-3]。

近年來，我國提出了建設(shè)創(chuàng)新型國家的戰(zhàn)略，開始倡導(dǎo)創(chuàng)新型人才的培養(yǎng)，各類高等院校也在積極探索創(chuàng)新型人才的培養(yǎng)方案，盡管取得了一些經(jīng)驗，但到目前為止還沒有獲得突破性的進展。創(chuàng)新能力和實踐能力的培養(yǎng)是教學改革建設(shè)的核心內(nèi)容和培養(yǎng)質(zhì)量的重要著力點。無論是培養(yǎng)應(yīng)用型、復(fù)合型和拔尖創(chuàng)新型人才的本科教育，還是培養(yǎng)“高端技能型”的高職教育，學生的創(chuàng)新能力、實踐能力培養(yǎng)質(zhì)量和水平已經(jīng)成為衡量一所高校人才培養(yǎng)質(zhì)量的重要因素，直接影響著高校、區(qū)域經(jīng)濟與社會的發(fā)展[4]。但是，創(chuàng)新能力和實踐能力的培養(yǎng)不是一朝一夕就可以完成的，需要長期的積累，需要學生在實踐中充分發(fā)揮創(chuàng)新精神，從而使學生的創(chuàng)新能力和實踐能力得以和諧發(fā)展。高校試驗教學是高校教學體系中的重要環(huán)節(jié)，對培養(yǎng)學生的創(chuàng)新能力和實踐能力等方面起著不可替代的作用，尤其是對于生命科學這類實驗性學科更具有舉足輕重的作用[5]。但是，就現(xiàn)在的試驗教學來看還存在許多問題，按照目前的水平還不能滿足社會對創(chuàng)新型人才培養(yǎng)的要求，這些問題主要體現(xiàn)在下面幾個方面：一是雖然生命科學領(lǐng)域，試驗技術(shù)不斷推陳出新，而試驗教學過程設(shè)備普遍陳舊，驗證手段落后，多為一些驗證性實驗，一般按照試驗指導(dǎo)書或黑板板書的實驗步驟進行，學生無須深思熟慮，因而不利于培養(yǎng)學生的能動性和創(chuàng)新性；二是試驗教學一般一課一題，兩人一組，甚而至于為觀摩性試驗，學生無選擇性，并且前后試驗間無任何銜接性，因而無法激勵學生的縝密的思維邏輯性[6]。

針對以上問題，筆者結(jié)合本實驗室的條件和科研優(yōu)勢，利用現(xiàn)代分子生物學技術(shù)構(gòu)建了基因ILKAP的真核表達載體及通過Western-blotting進行檢測的創(chuàng)新型試驗項目。該項目融合了生物化學、分子生物學、基因工程等試驗內(nèi)容于一體，學生根據(jù)試驗?zāi)康呐c要求，查閱相關(guān)文獻，獨立設(shè)計實驗技術(shù)路線，確定試驗方案，從而有利于學生實踐操作能力、創(chuàng)新能力和解決問題能力的鍛煉，取得了較好的試驗教學效果。

1 設(shè)計實驗項目

洞庭湖地區(qū)是日本血吸蟲的流行區(qū)域，而該區(qū)域的東方田鼠（Microtus fortis）是日本血吸蟲的非適宜宿主，也是唯一一種能感染血吸蟲但不致病具的哺乳動物。學生對該物種的這一特性產(chǎn)生了濃厚的興趣，因此在已有研究發(fā)現(xiàn)東方田鼠骨髓ILKAP基因具有一定的殺蟲特性的基礎(chǔ)上，學生選擇了該課題以中心法則為主線，將ILKAP基因克隆到真核表達載體pCMV-2b，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，建立ILKAP-Flag高表達的HEK293T細胞系，并通過Western-blotting來檢測其是否有表達[7]。此試驗設(shè)計涵蓋了本科階段生命科學專業(yè)的生物化學、分子生物學、基因工程、細胞生物學等一系列課程，是一個較為完整的試驗設(shè)計項目。

2 實施試驗項目

真核表達載體pCMV-2b為實驗室保存，東方田鼠購買于實驗動物中心。首先，教師向?qū)W生下達此次創(chuàng)新型項目的任務(wù)書，學生根據(jù)此任務(wù)書查找相關(guān)文獻，并設(shè)計出試驗技術(shù)路線，安排試驗進程，提出在試驗實施過程中擬解決的問題，從而提高了學生的積極性。其次，學生在試驗過程中常出現(xiàn)的問題有：不知如何設(shè)計引物，為何要在上下游引物添加酶切位點，怎樣選擇合適的限制性核酸內(nèi)切酶；PCR過程中不知如何設(shè)計退火溫度；進行轉(zhuǎn)染時細胞的量的估計，Western-blotting沒有設(shè)計內(nèi)參等等系列問題。因此，教師有必要先對學生的試驗設(shè)計進行指導(dǎo)，并要經(jīng)常進入實驗室解決學生遇到的問題，不定時檢測學生的試驗進度，同時督促學生在試驗過程中養(yǎng)成良好的原始試驗記錄習慣，以及遇到問題時如何妥善處理問題能力的培養(yǎng)。

3 試驗項目結(jié)果與分析

提取室內(nèi)封閉群東方田鼠骨髓和日本血吸蟲童蟲總RNA，用RT-PCR方法檢測ILKAP在正常生理狀態(tài)下的表達情況。RT-PCR結(jié)果顯示：ILKAP在東方田鼠骨髓和日本血吸蟲童蟲中均有表達，根據(jù)ILKAP全長酶切位點分析結(jié)果和質(zhì)粒pCMV-Tag 2b多克隆酶切位點分析，選擇Sma I和Not I作為限制性核酸內(nèi)切酶，酶切過夜，T4 DNA 連接酶16℃過夜，連接目的基因和去磷酸化處理后的空載體，重組后的質(zhì)粒經(jīng)酶切初步鑒定后，送Invitrogen公司測序驗證（圖1）。重組質(zhì)粒Flag-ILKAP-pCMV-2b構(gòu)建成功后，轉(zhuǎn)染至HEK293T細胞，其中空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染作為空白對照，培養(yǎng)細胞48h后收集上清用于Western-blotting檢測。通過Western blotting，SDS-PAGE轉(zhuǎn)膜后，以Flag抗體與PVDC膜共孵育，發(fā)現(xiàn)只有實驗組有條帶，而對照沒有條帶出現(xiàn)（圖2）。

在整個實驗過程中，學生遇到了很多“攔路虎”，例如在設(shè)計引物時不知如何利用生物學軟件primer和oligo相Y合，原始引物設(shè)計好后沒有加酶切位點及保護堿基，其次在對目的片段進行PCR擴增時，退火溫度的摸索花了很長時間，在這個摸索的過程中學會了如何通過查閱文獻以同種屬的物種的基因克隆溫度作為參考，也學會了梯度PCR的使用；最后在用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，不知如何評估細胞數(shù)，轉(zhuǎn)染后不知何時換液，也不知是否需要添加其他試劑等等。但是學生們都找到了解決問題的方法，最終獲得了較為理想的實驗結(jié)果。

4 試驗效果

通過實驗項目的實施，學生在以下幾個方面有了較大的收獲：（1）為保證整個實驗項目的順利進行，首先得從全局著手設(shè)計實驗方案，促進學生自主的去學習課本及試驗指導(dǎo)書之外的知識；（2）學生通過參加科研項目，培養(yǎng)了他們的團隊協(xié)作能力，同時也提高了學生的溝通能力，項目完成后，學生還需整理相關(guān)資料和數(shù)據(jù)，完成并撰寫，為日后畢業(yè)論文的協(xié)作打下了良好的基礎(chǔ)；（3）試驗項目的實施極大地激發(fā)了學生的求知欲，有助于學生創(chuàng)新意思的培養(yǎng)以及獨立試驗技能的提高，同時也通過試驗結(jié)果感受到了科學探究所帶來的成就感。例如，在經(jīng)歷了western blotting的多次失敗的磨練后，到現(xiàn)在感覺只要抗體合適，幾乎就沒有他們做不出來的分子，通過系列試驗的成功，給了學生無窮的自信，使學生對生物科學產(chǎn)生了濃厚的興趣，同時也在試驗過程中感受到了成功的喜悅。（4）在試驗過程中，我們明顯感覺到學生逐步形成了發(fā)現(xiàn)問題、思考問題、解決問題的科學意識，同時分析和解決問題的能力大大加強。比如，在做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試驗時，學生做了很多嘗試來提高轉(zhuǎn)染效率。為了確保轉(zhuǎn)染在對數(shù)生長期內(nèi)進行，學生先繪制培養(yǎng)細胞的生長曲線、確定其對數(shù)生長期，然后再著手做轉(zhuǎn)染；其次在保證DNA的質(zhì)量的前提下，學生按照DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例做了曲線分析，看看reporter的表達效率，以求做到最好的轉(zhuǎn)染效率。（5）極大提高了學生的試驗操作技能。我們平時理論課和實驗課上的一些內(nèi)容例如DNA的瓊脂糖凝膠電泳，雖然理論上有強調(diào)，但實際訓(xùn)練卻很少，尤其是對于大二年級的學生而言很多實驗根本就沒有開展過，創(chuàng)新實驗項目的開展，從實驗準備到試驗結(jié)果的觀察都是一個全新的體驗，學生通過一些列的的生物學試驗，提高了學生的動手操作能力，鍛煉了試驗思維，對于學生而已收獲頗豐，這是傳統(tǒng)的試驗所無法到達的試驗效果。

5 結(jié)語

高等院校生物科學專業(yè)開展創(chuàng)新型實驗是傳統(tǒng)的驗證性試驗向研究創(chuàng)新性試驗的轉(zhuǎn)變，有利于培養(yǎng)學生學習的興趣和探索科學理論的強烈欲望，能為改進實驗教學改革提供新的思路，有利于多方面、多層次、全方位地培養(yǎng)學生的素質(zhì)和能力。大學生在校期間參加科研項目，無論是對于專業(yè)知識的深入了解還是對于日后的就業(yè)問題，都有很大的益處。今后將繼續(xù)深入探索生物科學試驗教學改革、試驗創(chuàng)新意識的培養(yǎng)和試驗技能的提高三者之間的相互整合，以利于創(chuàng)新型、應(yīng)用型的復(fù)合型人才的培養(yǎng)。

參考文獻

[1]韓宏巖，許維岸.生物類本科生綜合實驗設(shè)計與實踐的探索[J].實驗室研究與探索，2014，3（33）：168-171.

[2]侯勇，龔競，敬成俊.綜合性酶學實驗與學生創(chuàng)新能力的培養(yǎng)[J].實驗科學與技術(shù)，2009，7（3）：90-91.

[3]梁曉夏，王國慶，馮家勛，等.生物類本科生綜合性實驗設(shè)計與實踐[J].實驗科學與技術(shù)，2009，7（3）：116-118.

[4]涂銘旌，唐英，張進，等.創(chuàng)新型人才培養(yǎng)的思路、方法及路徑（一）[J].西華大學學報，2012，04：1-5.

[5]彭喜旭，唐新科，王海華.植物學與分子生物學研究創(chuàng)新型實驗項目的設(shè)計與實施[J].安徽農(nóng)學通報，2011，17（11）：212-214.

[6]李素康，韓錕.關(guān)于高校實驗教學改革的研究[J].長沙鐵道學院學報（社會科學版），2005，16：1-3.

第5篇：分子生物學技術(shù)范文

[關(guān)鍵詞]醫(yī)學分子生物；實驗教學；教學改革；醫(yī)學檢驗

21世紀是生命科學的世紀，生命科學的發(fā)展伴隨著探究技術(shù)的提升和人才的培養(yǎng)。在科學發(fā)展過程中，分子生物學的理論和技術(shù)已與生物學，醫(yī)學和藥學等眾多領(lǐng)域交叉、融合，是提高探究技術(shù)水平和人才質(zhì)量的一門重要學科[1]，因此，作為醫(yī)學人才培養(yǎng)的醫(yī)學院校，醫(yī)學分子生物學是不可缺少的一門學科。目前，我校僅對醫(yī)學檢驗專業(yè)和醫(yī)學實驗技術(shù)專業(yè)開設(shè)醫(yī)學分子生物學的理論和實驗教學。本文總結(jié)了一些在醫(yī)學分子生物學實驗課教學過程中的心得和體會，希望通過不斷的反思和改進培養(yǎng)出滿足社會和人民需要的高素質(zhì)人才。

1醫(yī)學分子生物學實驗課的主要特點

醫(yī)學分子生物學是一門理論與實踐相結(jié)合的醫(yī)學基礎(chǔ)學科，以核酸和蛋白質(zhì)為研究對象，利用先進的分子生物學實驗技術(shù)對臨床疾病進行診斷，特別是進入21世紀后的短短幾年，無論是疾病發(fā)生、發(fā)展機制的闡明，患病風險的預(yù)測與評價，還是疾病的早期診斷和個體化醫(yī)療的開展，都愈來愈依靠和依賴分子生物學[2]，常見檢測內(nèi)容包括微生物檢驗[3]、腫瘤診斷[4-5]、遺傳病診斷[6-8]和人體各類免疫疾病[9]等。

臨床中應(yīng)用醫(yī)學分子生物學技術(shù)的項目很多，但目前學院針對醫(yī)學生開設(shè)的分子生物學實驗項目有限，例如小鼠肝組織DNA提取和保存，瓊脂糖凝膠電泳檢測核酸，PCR技術(shù)等。然而，醫(yī)學分子生物學技術(shù)發(fā)展迅速，傳統(tǒng)的醫(yī)學分子生物學實驗室僅結(jié)合學院現(xiàn)有的條件開展分子生物學實驗教學項目，內(nèi)容陳舊，技術(shù)簡單，缺乏臨床結(jié)合，不利于學生動手能力和創(chuàng)新能力的培養(yǎng)。隨著分子生物學的不斷發(fā)展，越來越多的高等學校將分子生物學設(shè)為必修課和選修課。我們作為國家醫(yī)學人才培養(yǎng)的搖籃，隨著技術(shù)的更新和發(fā)展，國家和社會對醫(yī)學分子生物學重視程度的增加，這對老師和學生提出了更高的要求，教師應(yīng)不斷更新教學內(nèi)容和實驗技術(shù)，學生應(yīng)掌握理論知識和實驗技術(shù)，設(shè)計實驗緊密結(jié)合臨床，緊跟科學技術(shù)發(fā)展的步伐。

2目前醫(yī)學分子生物學實驗教學面臨的問題

2.1分子生物學實驗室建設(shè)不足

醫(yī)學分子生物學是21世紀研究的新興學科，主要以核酸和蛋白質(zhì)分子為研究對象，對實驗室的條件和設(shè)備的投入要求較高，然而目前學院對分子實驗室建設(shè)的重視程度不高，通常與其他學科共用實驗室，實驗環(huán)境達不到標準，儀器共用、陳舊且破損，使得分子實驗不能順利開展；分子實驗的目的是通過將理論知識應(yīng)用于實踐進而培養(yǎng)學生的動手能力、結(jié)果分析能力和創(chuàng)新能力，但分子實驗試劑和耗材均需進口，價錢昂貴，在實驗試劑和耗材使用方面不能滿足人人均有，導(dǎo)致大部分學生沒有參與實驗，降低了學生對分子生物學實驗課的積極性。分子生物實驗均需要低溫高速離心，為了提高分子實驗結(jié)果的成功率，低溫高速離心機是分子生物學實驗室必備的，且每個教室最少配備一臺低溫高速離心機。在核酸電泳檢測過程中，需要使用溴化乙錠（EB）或其替代物染色，而溴化乙錠為強致癌物質(zhì)，因此，實驗室需要設(shè)置EB專用實驗臺，避免學生操作不當引起實驗隱患；對于核酸電泳結(jié)果均要在紫外燈下檢測，紫外燈下不利于實驗結(jié)果的分析，也不能確保所有學生都能觀察到實驗結(jié)果，準確分析實驗結(jié)果，學院應(yīng)在學生教室配備多媒體，將每個實驗結(jié)果直觀地展現(xiàn)給學生，讓學生觀察并分析，帶動學生的積極性，因此，為了培養(yǎng)社會和國家需要的創(chuàng)興型人才，學院應(yīng)該加強分子實驗室的建設(shè)，建立單獨的分子生物學實驗室，對相應(yīng)儀器和耗材的采購應(yīng)給予大力支持。

2.2實驗用品準備不規(guī)范

分子生物學實驗對試劑和耗材潔凈度高，且試劑名均為英文，分子生物學這門課程的理論和實驗內(nèi)容在學院的開設(shè)時間較晚，現(xiàn)在從事分子實驗耗材準備的老師專業(yè)和英語水平有限，在實驗試劑、耗材和儀器準備過程中空難重重，且準備不全面，影響實驗的順利開展。為了促進分子生物學實驗順利進行，降低實驗準備中試劑和耗材的損失，實驗室或代課教研室應(yīng)對實驗技術(shù)老師進行規(guī)范性培訓(xùn)，如RNA提取過程中使用的吸頭和離心管均為無RNase，學生實驗開始前應(yīng)組織實驗老師了解實驗條件的嚴格性，在口罩和手套配備齊全的基礎(chǔ)上，將吸頭放置配套的吸頭盒內(nèi)，而不是隨意將吸頭倒在一次性手套上，這將誤導(dǎo)學生對分子生物學實驗嚴謹性的認識。學院也可以相應(yīng)的引進分子生物學背景的實驗技術(shù)老師從事教輔或教學工作，這對于分子生物學實驗順利而準確的進行起到重要作用。

3醫(yī)學分子生物學實驗課教學心得

3.1完善分子生物學實驗內(nèi)容和指導(dǎo)手冊

分子生物學是跨越生物、醫(yī)學、農(nóng)學乃至藥學的一門新型學科，優(yōu)質(zhì)的分子生物學實驗課程開設(shè)離不開與相關(guān)專業(yè)的緊密滲透[10]。目前我院僅對醫(yī)學檢驗專業(yè)和醫(yī)學實驗技術(shù)專業(yè)開設(shè)分子生物學實驗，這就要求教師結(jié)合學生的專業(yè)和發(fā)展方向設(shè)計實驗內(nèi)容。只有結(jié)合學生的專業(yè)才能更好的將理論和實際相結(jié)合，激發(fā)學生的積極性。在目前教學中，只能依據(jù)實驗室的環(huán)境和設(shè)備的變化，結(jié)合教學老師主持的科研課題開展一些簡單的分子生物學實驗，而忽略了結(jié)合學生的專業(yè)開設(shè)特色的實驗內(nèi)容。由于固定的實驗材料和內(nèi)容多變，沒有完善的分子生物學實驗指導(dǎo)手冊，這使學生對即將做的實驗毫無頭緒，降低了學生學習分子生物學的積極性，不利于學科的發(fā)展和創(chuàng)新人才的培養(yǎng)。

3.2建設(shè)師資隊伍

分子生物學實驗內(nèi)容設(shè)計，實驗方法的使用以及實驗結(jié)果的解析與教學老師的知識背景和能力具有緊密的聯(lián)系，也是確保良好教學質(zhì)量的關(guān)鍵。目前我們生物與分子生物學教研室的老師分別承擔國家自然科學基金，省級科學基金、省級教育廳課題以及校級課題等多項科研項目，且均為碩士研究生以上學歷，具有較扎實的分子生物學理論基礎(chǔ)和熟練的分子生物學技術(shù)，可以巧妙靈活的為學生設(shè)計相關(guān)的分子實驗內(nèi)容。但是分子生物學內(nèi)容和技術(shù)更新?lián)Q代，學院可以提倡或執(zhí)行“送出去，引進來”的政策，讓教師得到全面的提高，讓學生拓寬眼界享受先進的知識課堂。

3.3提高學生的重視度

分子生物學是一門抽象難懂的技術(shù)學科，學生對分子生物學的理論和技術(shù)應(yīng)用了解的并不多，所以學生對分子生物學理論學習和實驗操作均表現(xiàn)為消極，應(yīng)付的心態(tài)。導(dǎo)致學生對分子生物學不重視態(tài)度的原因之一，是學生沒有了解到分子生物學在臨床或是研究生生活中的重要性。目前，我們教授的學生為大三學生，已經(jīng)有了很強的思考能力，對自己的發(fā)展有了一定的規(guī)劃，為了提高學生對分子生物學的重視程度，學院可以安排學生進入實習單位，比如醫(yī)院，檢測單位或是一些科研機構(gòu)，讓學生在實實在在的生活中了解分子生物學的中重要性以及操作過程的規(guī)范性；也可以舉辦學生經(jīng)驗交流會，讓學院已經(jīng)畢業(yè)工作的學生、實習的學生或者讀研究生繼續(xù)深造的學生分享分子生物學的重要性，提高學生的自主學習能力和對分子生物學由衷地熱愛。

3.4增加多媒體教學

多媒體課堂教學已成為理論課上必不可少的教學手段，但在實驗教學中應(yīng)用的較少。分子生物學是通過多種先進技術(shù)手段研究核酸等生物大分子的功能、形態(tài)結(jié)構(gòu)及其重要性和規(guī)律性的科學[11]。其內(nèi)容抽象，枯燥無味，實驗結(jié)果無法直觀地展現(xiàn)給學生，使學生很容易產(chǎn)生厭學的情緒[12]。為了提高教學質(zhì)量，我們應(yīng)該利用多媒體將一些難懂的分子生物學技術(shù)原理和過程通過動畫、幻燈片和視頻等直觀地展現(xiàn)給學生，如大腸埃希菌質(zhì)粒的提取和檢測，PCR技術(shù)的原理和操作過程等，使學生在輕松愉快的氛圍下，快速掌握分子生物學知識。實驗結(jié)果檢測過程中，我們可以通過多媒體將檢測的結(jié)果展示給學生，讓學生觀察討論，給出依據(jù)并提出相應(yīng)的答案，教師通過分析學生的討論結(jié)果，了解學生的思維動態(tài)，并給出正確結(jié)果。根據(jù)學生的反饋，板書教學結(jié)合多媒體展示利于學生對知識的認知和掌握。

3.5開放實驗室

要想成為一名國家需要的優(yōu)秀人才，除了掌握扎實的理論知識，具有熟練的實驗室操作技能，同時也要具備活躍的創(chuàng)新思維。因此，為了更好地培養(yǎng)學生的各方面能力，實驗室可以結(jié)合實際課程開放實驗室，讓學生查閱文獻，鞏固理論知識，應(yīng)用實驗課上的分子生物學技術(shù)結(jié)合臨床疾病設(shè)計實驗，給學生提供更多的動手機會，培養(yǎng)學生的自主學習能力和創(chuàng)新能力[13-15]，同時提高學生對分子生物學課程的興趣和重視。在開放實驗室期間，至少安排一位指導(dǎo)教師，既規(guī)范學生的操作技能，又可以幫助學生分析實驗結(jié)果，這樣培養(yǎng)學生的思考能力和分析問題的能力。目前學校僅對醫(yī)學檢驗專業(yè)和醫(yī)學實驗技術(shù)開設(shè)醫(yī)學分子生物學實驗課，開放分子生物實驗室，不僅讓已學習分子生物學的專業(yè)的學生鞏固理論知識和實驗課內(nèi)容，也為其他醫(yī)學生提供了學習機會和創(chuàng)新平臺。

3.6鼓勵學生參與教師科研

生命科學的研究離不開分子生物學技術(shù)，目前學校的教師均有自己的研究課題，學生可以適當參與教師的科研工作，了解分子生物學的重要性，增強學生學習的主動性和積極性。學校也為學生開設(shè)大學生創(chuàng)新項目，學生將學習的分子生物學理論和實驗技術(shù)結(jié)合臨床設(shè)計實驗，大大地發(fā)揮學生的主觀能動性，激發(fā)學生的求知欲和創(chuàng)新能力?？蒲泻徒虒W的相互結(jié)合，相互滲透，不僅豐富了分子生物學實驗教學的內(nèi)容，也提高了學生的綜合素質(zhì)和科研思維[16]，為國家和社會培養(yǎng)更優(yōu)秀的人才。

3.7改革實驗成績評定方法

常規(guī)的實驗成績評定是根據(jù)學生提交紙質(zhì)的實驗報告進行評定，然而，醫(yī)學分子生物學實驗課不僅僅評定學生掌握的理論知識，同時考察學生們的動手能力、分析結(jié)果能力、創(chuàng)新能力等，因此，將醫(yī)學分子生物學實驗成績評定內(nèi)容分為實驗理論測評和實驗操作技能測評，實驗理論測評包括實驗原理，實驗步驟以及實驗內(nèi)容的應(yīng)用，這樣有利于學生自主學習醫(yī)學分子生物學并加深對分生生物學的認識；實驗操作技能的測評：考察學生的實驗設(shè)計能力、動手操作能力、實驗結(jié)果分析能力。經(jīng)過觀察實驗課堂學生的表現(xiàn)，部分同學主動參與到實驗課堂中，而其他同學僅僅是旁觀者，通過實驗成績評定的改革，提高學生實驗設(shè)計能力、自主動手能力和分析問題能力，為國家和社會培養(yǎng)創(chuàng)新人才具有重要的意義。

4總結(jié)

第6篇：分子生物學技術(shù)范文

關(guān)鍵詞：分子生物學實驗；生物科學師范專業(yè)；實踐周教學；教學改革

中圖分類號：G642.423文獻標志碼：A文章編號：1674-9324（2018）12-0268-03

生物科學是21世紀的領(lǐng)先學科，大多數(shù)高校都設(shè)有生物科學學科，該學科的基本理論是在實驗基礎(chǔ)上建構(gòu)起來的，理論與實踐緊密結(jié)合。而作為生命科學的基礎(chǔ)學科，《分子生物學實驗》是一門應(yīng)用廣泛的學科，涵蓋生物學、醫(yī)學、農(nóng)學乃至藥學，是從事生命科學研究的必備研究技能。分子生物學是在分子水平上研究生命現(xiàn)象的科學，通過研究生物大分子（核酸、蛋白質(zhì)）的結(jié)構(gòu)、功能和生物合成等方面來闡明各種生命現(xiàn)象的本質(zhì)。《分子生物學實驗》是生命科學研究領(lǐng)域中融技術(shù)前沿性、創(chuàng)新性、挑戰(zhàn)性于一體的大型專業(yè)實驗課程，是學生直接接受分子生物學基本技能和前沿技術(shù)訓(xùn)練，培養(yǎng)學生科研技能、科研思維，進而提升學生研究素質(zhì)?！斗肿由飳W實驗》是生物科學專業(yè)的一門重要專業(yè)能力實踐課，為必修課程。為了使生物科學專業(yè)人才能夠更好地掌握分子生物學的理論知識和實驗操作能力，長江師范學院生物科學專業(yè)在很早就開展了《分子生物學實驗》課程，教學內(nèi)容也隨著學科發(fā)展不斷進行改進，但隨著分子生物學的快速發(fā)展以及硬件設(shè)施的不斷改進，傳統(tǒng)的《分子生物學實驗》課程教學產(chǎn)生了不少問題急需解決。為此，本文以長江師范學院生物科學師范專業(yè)為例，針對《分子生物學實驗》教學實踐中存在的不足，根據(jù)學生培養(yǎng)目標和課時要求，對高?！斗肿由飳W實驗》教學進行改革，將課程教學改為實踐教學周，以提高分子生物學實驗教學質(zhì)量，增強師范生的綜合素質(zhì)。

一、生物科學師范專業(yè)《分子生物學實驗》實踐周教學特色

生物科學師范專業(yè)《分子生物學實驗》課程特色。分子生物實驗技術(shù)自開設(shè)以來，成為當今研究生命科學各學科和醫(yī)學領(lǐng)域中重要的研究工具，緊跟科學前沿，在分子生物學教學中，實驗教學占有舉足輕重的地位。為了使生物科學專業(yè)人才能夠更好地掌握分子生物學的理論知識和實驗操作能力，我校生物科學專業(yè)在很早就開展了“分子生物學實驗”課程，教學內(nèi)容也隨著生物科學的發(fā)展而進行創(chuàng)新與改革。實驗內(nèi)容從起初的幾個相互獨立的簡單實驗項目，逐步演變成綜合性分子生物學實驗。目前的課程內(nèi)容是依據(jù)遺傳信息傳遞的規(guī)律及教師的科研內(nèi)容進行設(shè)置，并進一步整合成為系統(tǒng)的綜合性實驗，實驗內(nèi)容包括基因克隆、遺傳多樣性檢測、分子標記、DNA指紋圖譜構(gòu)建、基因功能驗證等實驗項目。因此課程實驗所需儀器比較昂貴，實驗周期也相對較長。通過本課程實驗教學的學習，使學生獲得核酸物質(zhì)的提取、分離、純化與鑒定、電泳技術(shù)、引物設(shè)計、PCR擴增、分子標記、基因克隆等方面的獨立實驗?zāi)芰蚵殬I(yè)技能。強化學生創(chuàng)新思維、獨立解決問題的能力和分子生物學領(lǐng)域基本操作技能，提高學生在分子生物學領(lǐng)域綜合運用實驗技能或職業(yè)技能分析和解決問題的能力，培養(yǎng)學生發(fā)現(xiàn)問題、分析和解決問題的創(chuàng)新精神。通過學習本課程使學生從分子水平認識生命現(xiàn)象和生物學規(guī)律，能夠?qū)W生的畢業(yè)課題研究設(shè)計和今后的科研生涯提供極大的幫助，為今后從事相關(guān)專業(yè)的研究、教學工作奠定堅實的基礎(chǔ)。

二、生物科學師范專業(yè)《分子生物學實驗》教學中存在的主要問題

（一）實驗條件差，實驗經(jīng)費不足

由于《分子生物學實驗》相關(guān)儀器和藥品都較昂貴，儀器設(shè)備往往有限。而經(jīng)費是限制《分子生物學實驗》課程教學的重要因素，缺乏經(jīng)費直接導(dǎo)致設(shè)備套數(shù)、藥品、耗材數(shù)量不足，學生動手機會減少。上課人數(shù)較多，但儀器設(shè)備等有限，必定影響預(yù)期的實驗教學效果，如多組學生共用一套移液器，有的學生上完《分子生物學實驗》，連移液器都不能正確使用。另外，由于缺乏計算機機房，《分子生物學實驗》中生物信息學方面的實驗無法開展。

（二）教學方式單一、學生學習積極性不高

傳統(tǒng)的教學老師講原理和步驟，學生按老師指導(dǎo)進行操作，學生思考和主動參與的過程就被省略了，動手完全與動腦脫節(jié)。動手能力的培養(yǎng)是實驗教學的一個重要內(nèi)容，但不經(jīng)思考地完成實驗根本談不上能力的培養(yǎng)。另外，實驗室缺乏多媒體設(shè)備，許多教學圖片及視頻無法展示。由于被動參與實驗、為了混學分或?qū)Ψ肿由飳W較陌生，多數(shù)學生參與實驗的積極性不高，甚至有的在一旁觀看別人操作自己根本就不動手，最后照抄別人的實驗結(jié)果。

（三）實驗教學安排、管理不合理

一是，課時安排少，隨著課程改革及新培養(yǎng)方案的實施，長江師范學院《分子生物學實驗》課程只有18個學時，如此少的課時要學生學習分子生物學實驗技術(shù)，給課程教學帶來了新的挑戰(zhàn)。二是，《分子生物學實驗》項目所需實驗時間較長，有時需要較長時間的等待，如PCR擴增，需要3—4小時，而許多實驗可以連續(xù)做完。傳統(tǒng)《分子生物學實驗》教學按周和學時劃分實驗，使實驗連貫性差，學生在實驗中不知道做的實驗有什么用。而老師為了在規(guī)定時間或更短時間完成實驗，往往選擇簡單的實驗，或一些實驗過程老師只向?qū)W生進行講解，不要求學生進行操作，學生不參與實驗的全部過程，導(dǎo)致學生只知其一、不知其二。三是，實驗分組不合理，一般4—5個人一組共同完成一個實驗，而實驗儀器相對較少，有些儀器或?qū)嶒炛挥胁糠滞瑢W進行操作，其他學生只能觀望，嚴重影響實驗的效果。

（四）課程考核單一

教師對實驗教學要求較低，考核方式一般是通過學生的平時成績結(jié)合期末實驗理論及操作考試進行考核。其中，平時成績包括：驗預(yù)習報告、原始記錄和實驗態(tài)度；實驗技能；實驗報告。各部分成績的比例如下：實驗預(yù)習報告、原始記錄、實驗態(tài)度和實驗技能占20%，實驗報告占40%，實驗理論及操作考試占40%。這種單一的考核方式不易調(diào)動學生的學習積極性，靠抄取他人實驗結(jié)果和實驗報告、臨時反復(fù)操作儀器和背誦實驗原理，一樣可以取得較好的實驗成績，使實驗課程在促進學生能力發(fā)展方面的作用有限。

三、生物科學師范專業(yè)《分子生物學實驗》實踐周教學建設(shè)與改革

（一）加強實驗室建設(shè)，增加實驗經(jīng)費

實驗室依托中央與地方共建特色優(yōu)勢學科實驗室——作物遺傳育種實驗室、武陵山特色植物資源保護與利用重慶市重點實驗室以及武陵山片區(qū)綠色發(fā)展協(xié)同創(chuàng)新中心的建設(shè)，購置了大量分子生物學儀器設(shè)備，教學與科研共用相關(guān)儀器設(shè)備，以科研促進教學的提升，如購置50套移液器，保證上課時每位學生人手一套移液器。建立生物科學專用機房、在實驗室安裝多媒體設(shè)備，可以進行生物信息學相關(guān)實驗及實驗課多媒體教學。同時向?qū)W校申請《分子生物學實驗》實踐周專用經(jīng)費，保證實驗相關(guān)藥品的購置。

（二）多元化教學，提高學生學習積極性

實驗教學以大組單位，每大組人數(shù)不超過30人，將學生分成1人1小組，獨立完成實驗內(nèi)容。實驗教學采用實驗現(xiàn)場操作、多媒體課件教學、專題講座、專題討論及機房上機的方式。第一次上課時可以組織學生觀看相關(guān)科幻電影或進行專題講座，以提起學生的學習興趣，實驗中等待的過程可以組織學生就大家關(guān)心的分子生物學技術(shù)進行討論，如轉(zhuǎn)基因及安全性、你能否接受克隆人和生物武器等?！叭蝿?wù)驅(qū)動和問題導(dǎo)向”，鼓勵學生自主進行課前學習、獨立思考，發(fā)現(xiàn)問題，積極解決問題，再通過課堂與教師交流，完成知識的內(nèi)化。并且全天候開放實驗室，作為實驗教學的課外延伸，增加學生實驗訓(xùn)練的機會，實驗結(jié)果不理想時，也有機會利用課外時間快速重做，提升學生學習積極性，增強學生的動手能力，提高教學質(zhì)量。實施教學科研一體化，將教師最新的課題研究內(nèi)容引入實驗教學。同時鼓勵部分優(yōu)秀學生參與教師科研項目，教師指導(dǎo)學生開展分子生物學方面的創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目和科研項目。

（三）實踐周教學，提升實驗的連貫性

實驗教學改為實踐周，實驗共40個學時，在一周之內(nèi)完成一個綜合性實驗，如“玉米rDNAITS序列克隆及分析”、“胭脂蘿卜花青素生物合成結(jié)構(gòu)基因克隆”、“榨菜種質(zhì)資源遺傳多樣性的SSR分子標記檢測”、“胭脂蘿卜新品種DNA指紋圖譜構(gòu)建”、“胭脂蘿卜DFR基因過量表達效應(yīng)分析”和“參與調(diào)控胭脂蘿卜花青素生物合成轉(zhuǎn)錄因子MYB的篩選”等來源于教師科研的實驗，提高實驗的連貫性和教學質(zhì)量。每學期開學之前相關(guān)老師必須討論制定好詳細的分子生物學綜合實驗實踐周的實施方案。

（四）加強教師指導(dǎo)和課程考核，提高教學質(zhì)量

教學需要4—5名相關(guān)教師，將學生分成兩大組交叉進行相關(guān)教學。1人一個小組進行實驗，多環(huán)節(jié)評價學生實驗操作的過程，注重實驗基本操作能力的評價?？己藘?nèi)容包括實驗預(yù)習及原始記錄、實驗操作、實驗報告、實驗態(tài)度和學術(shù)報告5個部分，其中實驗預(yù)習及原始記錄占10%，實驗操作占30%，實驗報告占30%，實驗結(jié)果占20%，學術(shù)報告占10%，實驗成績總分100分。新的考核方式更注重實驗過程的考核，能有效地保證教學的質(zhì)量。

四、結(jié)語

第7篇：分子生物學技術(shù)范文

分子生物學是一門新興的前沿學科，以分子生物學為基礎(chǔ)的克隆重組技術(shù)已成為現(xiàn)代生物技術(shù)的核心。醫(yī)學領(lǐng)域分子生物學研究日新月異的發(fā)展，使人類對疾病的認識、預(yù)防、診斷和治療發(fā)生深刻的變革，醫(yī)學科學已從整體、細胞水平逐步深入到分子水平。所以分子生物學理論與技術(shù)的應(yīng)用已成為醫(yī)學院?？己搜芯可|(zhì)量的本文由收集整理一個重要指標。為此，本文就如何在醫(yī)學分子生物學實驗教學過程中培養(yǎng)研究生的創(chuàng)新思維和實踐能力，如何培養(yǎng)研究生在分子生物學技術(shù)方面的動手能力，加強對理論知識的理解，鍛煉學生分析問題、解決問題的能力，深入了解分子生物學的內(nèi)涵等方面進行了一些探索。

1 解放思想，培養(yǎng)創(chuàng)新思維

通過教學實踐我們認為，要取得良好的教學效果，必須要對“分子生物學”實驗教學進行一個正確的目標定位。從課程性質(zhì)來看，分子生物學是從分子水平探討生命變化的規(guī)律。研究生開設(shè)分子生物學這門課程的目標是在掌握分子生物學基本理論的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)其在分子生物學技術(shù)方面的動手能力。因此，我們在分子生物學實驗課教學過程中以“精”和“新”為原則確立教學內(nèi)容，講清基本理論，注重相關(guān)學科知識點之間的相互聯(lián)系；緊跟學科前沿，介紹最新的研究動向和方法；結(jié)合教師自身的研究課題，引導(dǎo)學生積極思維，調(diào)動學生的學習興趣；設(shè)置啟發(fā)思維情景，著重培養(yǎng)學生的創(chuàng)新性思維和創(chuàng)新能力。希望學生通過這門課的學習，發(fā)揮學生參與課堂教學的主觀能動性，激發(fā)學生獨立思考問題的意識和能力。

2 優(yōu)化教學內(nèi)容，培養(yǎng)創(chuàng)新能力

分子生物學領(lǐng)域發(fā)展迅速，知識更新快。為了緊跟學科前沿，提高學生的學習興趣，達到最佳的教學效果，我們沒有選用固定教材，而是以《分子克隆實驗指南》為覽本，圍繞分子生物學幾大基本技術(shù)及一些最新的技術(shù)方法，結(jié)合教師的在研課題，安排了質(zhì)粒的小量提取、酶切實驗、pcr實驗、mtt、western bolt五個實驗內(nèi)容，使整個實驗過程內(nèi)容環(huán)環(huán)相扣，每一部分實驗都承上啟下，而且整個實驗過程全部由學生自己獨立完成。在整個教學過程中，教師通過啟發(fā)式教學，引導(dǎo)學生對實驗過程、結(jié)果進行分析、綜合歸納各種可能影響因素，培養(yǎng)了學生的科研素質(zhì)和獨立進行科研工作的能力。使學生產(chǎn)生強烈的學習欲望，理解和掌握了醫(yī)學研究中常用的分子生物學技術(shù)和科研思路，充分調(diào)動學生學習的主動性，提高學生的動手能力和思考能力，為完成學位課題研究以及將來從事科研工作打下良好的基礎(chǔ)。

3 改革實驗教學，培養(yǎng)實踐能力

按本院分子生物學的課程設(shè)置，計劃學時僅18個學時，如按照傳統(tǒng)的教學方法，在有限的學時內(nèi)很難完成醫(yī)學分子生物學實驗的教學內(nèi)容。并且不同的實驗內(nèi)容，所需時間存在差異。因此，我們在實驗教學過程中，根據(jù)不同的實驗內(nèi)容存在時間的差異以及不同實驗存在很多等待時間的特點，靈活組織教學過程。如在酶切實驗過程中，由于有前面質(zhì)粒提取的經(jīng)驗，在實驗開始首先安排配制反應(yīng)體系，在酶切反應(yīng)過程等待的時間中講解酶切原理、步驟、注意事項以及酶切分類等延伸知識部分，這樣使整個實驗課的時間充分利用，游刃有余。pcr實驗中，學生利用課余時間進行電泳，得到實驗結(jié)果，通過查閱相關(guān)資料分析，得出結(jié)論。這樣教師由“傳授型”轉(zhuǎn)為“指導(dǎo)型”，學生由“被動接受驗證型”轉(zhuǎn)為“主動參與探索型”。這樣不僅提高了學生查閱文獻的能力和實驗操作的能力，同時也激發(fā)了學生科研的主動性，培養(yǎng)了學生的創(chuàng)新實踐能力。

4 嚴謹?shù)目蒲袘B(tài)度，培養(yǎng)良好實驗習慣

分子生物學實驗對實驗試劑和實驗設(shè)備要求非常嚴格，對接觸分子生物學實驗的學生需要讓其了解實驗常規(guī)設(shè)備的使用方法和用途，正確掌握實驗操作手段，如移液器的使用、培養(yǎng)液的配制、高壓滅菌消毒、無菌操作、離心機使用等。這就要求教師在實驗教學過程中引導(dǎo)學生養(yǎng)成良好的實踐操作習慣和學習習慣，通過合理的組織安排，盡最大可能確保人人參與實驗，培養(yǎng)學生動手能力、獨立科研能力，培養(yǎng)學生團結(jié)協(xié)作意識。另外，每次實驗課，要求學生對每次實驗課的內(nèi)容，實驗前的準備工作以及實驗后的收尾工作都有很好的了解，做到有始有終。教師在整個實驗過程中，除了對每個實驗的步驟和原理進行必要的講解外，更側(cè)重于對實驗技巧、注意事項的提示。通過實驗，學生的分子生物學實驗技能得到很好的鍛煉，有利于其今后獨立開展科研工作。

5 結(jié)語

第8篇：分子生物學技術(shù)范文

關(guān)鍵詞： 分子生物學 教學改革 問題 思考

分子生物學是研究核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征及其重要性、規(guī)律性和相互關(guān)系的科學，是人類從分子水平上真正揭示生物世界奧秘，由被動地適應(yīng)自然界轉(zhuǎn)向主動地改造和重組自然界的基礎(chǔ)學科[1]。分子生物學的發(fā)展經(jīng)歷了孕育、創(chuàng)立和高速發(fā)展三個階段，如今已經(jīng)形成了許多新的交叉學科和分支學科，并且基本理論已滲透到生物學的各個領(lǐng)域。分子生物學已逐漸成為現(xiàn)代生物學領(lǐng)域最具活力的學科之一，在推動我國科學事業(yè)的發(fā)展、推動生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的崛起、推動國民經(jīng)濟持續(xù)高速發(fā)展等方面具有重要的作用。隨著現(xiàn)代分子生物學理論體系的不斷發(fā)展和完善，新知識、新概念、新技術(shù)和新理論不斷涌現(xiàn)，給分子生物學教學帶來了巨大的挑戰(zhàn)[2]。

分子生物學課程是高等農(nóng)業(yè)院校生命科學領(lǐng)域重要的基礎(chǔ)課程之一，得到了教師和學生的普遍重視，在國內(nèi)各綜合性高校、師范院校及地方院校的本科生和研究生培養(yǎng)中都將其列為必修課或限修課。筆者通過對《分子生物學概論》課程教學存在的問題進行剖析，就教師自身綜合素質(zhì)和能力、教學內(nèi)容、教學方法和教學手段等進行改革探索，旨在提高教學質(zhì)量，推動我校應(yīng)用型大學建設(shè)。

1.園藝專業(yè)《分子生物學概論》課程概述

河北科技師范學院園藝專業(yè)擁有75年辦學歷史，是河北省品牌特色專業(yè)、河北省農(nóng)業(yè)教育創(chuàng)新高地建設(shè)牽頭專業(yè)，也是我校應(yīng)用型大學建設(shè)專業(yè)綜合改革重點專業(yè)。園藝專業(yè)培養(yǎng)適應(yīng)園藝產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化發(fā)展需求，德、智、體、能全面發(fā)展，能從事園藝相關(guān)領(lǐng)域的教學與科研、生產(chǎn)與開發(fā)、示范與推廣、經(jīng)營與管理等工作的應(yīng)用型專業(yè)技術(shù)人才，可在園藝企業(yè)、事業(yè)單位從事教學、科研、開發(fā)、管理等工作?！斗肿由飳W概論》是園藝專業(yè)開設(shè)的一門專業(yè)任選課程，本課程包括理論教學和實驗教學兩部分，其中理論教學內(nèi)容以核酸的相關(guān)內(nèi)容為主線，包括核酸的結(jié)構(gòu)、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)翻譯的詳細機制，以及真核、原核基因表達調(diào)控的機制和研究進展。實驗教學使學生能夠掌握比較全面的分子生物學理論知識和實驗技能，通過該課程的學習，使學生了解分子生物學技術(shù)發(fā)展的現(xiàn)狀、未來及其應(yīng)用，為以后生命科學類專業(yè)課的學習和未來從事生命科學相關(guān)的教學、研究等工作打下堅實的基礎(chǔ)。

2.園藝專業(yè)《分子生物學概論》課程教學存在的問題

2.1知識抽象，缺乏感官認識。分子生物學理論抽象而深奧，遠離日常生活，感官認識缺乏，導(dǎo)致學生很難接受微觀而抽象的知識。比如染色體與DNA章節(jié)的內(nèi)容，因都是微觀小分子，缺乏對染色體的正確認識，加之復(fù)雜抽象的二級結(jié)構(gòu)、高級結(jié)構(gòu)等，無法進行感官認知，進而造成認知困難，難以理解。

2.2填鴨式教學，難以激發(fā)興趣。傳統(tǒng)的填鴨式教學，以教師講授為主，缺乏創(chuàng)新，學生被動聽課，很難讓學生長時間保持精力集中。加之，現(xiàn)在學生自主意識強，自控能力差，易受外界因素影響，造成沒興趣上課，玩手機、上網(wǎng)等情況時有發(fā)生，進而導(dǎo)致不能有效吸收消化課堂內(nèi)容。

2.3實驗教學學時偏少，學生參與程度不足。大部分分子生物學實驗需要花費大量時間進行準備，且多數(shù)試劑具有毒性，使得很多實驗內(nèi)容難以開展。另外，實驗過程中等待時間很長，比如PCR反應(yīng)、蛋白質(zhì)電泳等，都需要幾個小時的等待。但實驗學時少，時間根本無法滿足，很多教師采用穿插式實驗教學法，導(dǎo)致學生參與度不夠，無法深切領(lǐng)會實驗內(nèi)容，影響教學效果。

3.強化教學效果的幾點思考

分子生物學是一門新興學科，新理論、新技術(shù)層出不窮，理論知識和研究方法的不斷更新，給課程教學帶來更大的挑戰(zhàn)。為優(yōu)化教學研究，提高學生興趣，促進學生學習動力，提高教學質(zhì)量，筆者從教學內(nèi)容、方法等方面進行了思考。

3.1優(yōu)化教學內(nèi)容，明確教學重點。分子生物學與其他相關(guān)學科存在知識點交叉，比如染色體與DNA在生物化學、遺傳學、育種學等課程中都有涉及。如果統(tǒng)一規(guī)劃這幾門課程的教學內(nèi)容，實現(xiàn)各有側(cè)重，主次分明，每門科目重點突出地講解各自知識點，可在有限的學時內(nèi)，讓學生明確學習重點。

3.2立足應(yīng)用型大學建設(shè)，合理選擇教材。課程設(shè)置要緊緊圍繞學校的辦學定位，在強調(diào)基礎(chǔ)知識重要性的同時，加強學科應(yīng)用的講解，培養(yǎng)學生動手實踐能力。教材選擇不能照搬，要綜合考慮學生接受能力和培養(yǎng)目標，比如可以選擇《生命科學名著：分子生物學》、《現(xiàn)代分子生物學》、《基因Ⅷ》等。筆者認為朱玉賢等編著的《現(xiàn)代分子生物學》教材，圖文并茂，認知性強，能啟發(fā)學生與實際生活相聯(lián)系，易于學生接受。

3.3改進教學手段，提高教學質(zhì)量。分子生物學知識較為微觀和抽象，晦澀難懂。傳統(tǒng)的教學手段無法滿足教學的需求，而多媒體教學清晰直觀、圖文并茂。備課環(huán)節(jié)要多花時間和精力制作PPT，并適時通過動畫來展示復(fù)雜的邏輯。比如在講授轉(zhuǎn)座子等部分內(nèi)容時，可以借助玉米花斑圖片，展示轉(zhuǎn)座機制，將復(fù)雜的分子機理與現(xiàn)實生活中的玉米聯(lián)系起來，增強認知。

3.4理論聯(lián)系實際，增強動手能力。增加實驗教學學時，加強學生實驗操作技能，著力培養(yǎng)動手能力和科研素養(yǎng)。在實驗項目中可先安排驗證型實驗[3]，比如DNA提取、電泳技術(shù)、PCR方法等，再增設(shè)研究型實驗，比如與黃瓜單性結(jié)實有關(guān)的SSR分子標記篩選等，引發(fā)學生思考，制訂實驗方案，并以小組的形式開展實驗。這樣有助于幫助學生理解抽象的理論知識，掌握實驗技能，增強動手能力和解決問題的能力。同時，啟發(fā)學生大膽創(chuàng)新，學以致用，利用所學解決現(xiàn)實問題，成為社會有用的應(yīng)用型人才。

參考文獻：

[1]朱玉賢.現(xiàn)代分子生物學[M].北京：高等教育出版社，2007.

[2]林謙.分子生物學教學改革探索[J].安徽農(nóng)學通報，2011，17（13）：215-216.

[3]呂彩云.基于地方應(yīng)用型高?！斗肿由飳W》課程教學改革探索[J].黃山學院學報，2016，18（3）：128-130.

第9篇：分子生物學技術(shù)范文

關(guān)鍵詞：分子生物學；實驗教學；教學改革

中圖分類號：G642.423 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2012）03-0186-02

目前，分子生物學實驗技術(shù)已廣泛應(yīng)用到各類生物學專業(yè)的科研工作中，成為生物學領(lǐng)域科學研究的基本實驗技能。分子生物學實驗課程是各大院校生物類研究生入學的必修課，此門課程掌握的程度影響著研究生后續(xù)科研工作的開展。所以如何讓研究生在學習分子生物學理論知識后盡快掌握扎實的實驗技能成為分子生物學教學實踐的研究熱點。

近年來，針對如何提高我校研究生實驗教學質(zhì)量的問題，我們曾經(jīng)走訪考察了北京大學、清華大學和北京師范大學等國內(nèi)著名大學，學習領(lǐng)會重點知名學校的教學思維和教學內(nèi)容，結(jié)合北京林業(yè)大學實際情況和教學特點，在教研室集體多次討論的基礎(chǔ)上，本著注重培養(yǎng)研究生科研素質(zhì)和科研思維、提高研究生實際動手能力的目的，我們優(yōu)化了為全校生物科學、生物技術(shù)、林學、園林等專業(yè)開設(shè)的研究生分子生物學實驗技術(shù)課程體系，對改革教學內(nèi)容和教學方法進行了嘗試，并取得了較好的教學效果。

一、分子生物學實驗教學存在的問題

我校原來的分子生物學實驗教學內(nèi)容比較簡單。實驗內(nèi)容主要包括一些基本的實驗操作技術(shù)：如植物DNA和質(zhì)粒DNA的提取、RNA分離純化、DNA酶切鑒定及重組、PCR擴增技術(shù)、感受態(tài)細胞制備、目的基因連接與轉(zhuǎn)化等等。這些單項實驗彼此間缺乏內(nèi)在聯(lián)系，學生往往會在認真做好了實驗，并得到理想的實驗結(jié)果后，反過來請教老師這個實驗的用途是什么?？梢娪捎趯嶒瀮?nèi)容之間存在的不連貫性，學生就可能沒有真正理解和掌握分子生物學實驗課程中的核心問題。后續(xù)課程效果調(diào)查表明，雖然研究生抱著很大的熱情和期待認真地學完該課程，但實驗結(jié)束后，留在學生腦海中的印象模糊，到實驗室進行后續(xù)的科研工作時，還是感到無所適從、無處下手。即實驗的效果并沒有充分發(fā)揮出來。此外，由于受實驗課時和經(jīng)費的影響，傳統(tǒng)教學中任課教師會在實驗前為學生做好一切準備工作，如試劑配制、儀器調(diào)試，甚至把藥品分裝成小份分發(fā)到每個小組。這種做法嚴重地限制了學生上課學習的積極性。由于研究生缺乏學習的主動性，在實驗前沒有做充分準備的預(yù)習，產(chǎn)生的后果是實驗結(jié)果出來后，學生不知如何分析，實驗中出現(xiàn)的問題也不知如何解決。這種現(xiàn)象嚴重影響了學生對實驗課的興趣，不利于學生動手能力和創(chuàng)新能力的培養(yǎng)。實驗教學的目標不僅要傳承課堂所學的知識及增強實驗技能的訓(xùn)練，更要在實驗教學中培養(yǎng)學生的科研素質(zhì)、科研技能和創(chuàng)新能力。為了使研究生真正得到分子生物學實驗技術(shù)的鍛煉，有必要對現(xiàn)有的實驗教學體系進行改革，以便真正達到培養(yǎng)研究生的目的。

二、分子生物學實驗教學改革的探索

1.實驗內(nèi)容的改革。教學體系主要體現(xiàn)在要以科研的理念教育學生，即在教學中首先提出問題，然后引導(dǎo)學生可以用哪些方法和實驗技術(shù)來解決問題，而不是在學生學會了實驗技術(shù)后，往往會迷惑這些技術(shù)可以解決什么問題?；谏鲜鰡栴}，我們教學改革的出發(fā)點為注意結(jié)合研究生教學以及分子生物學技術(shù)的特點，優(yōu)化原來較為分散的教學內(nèi)容，以實驗體系要求完整性、系統(tǒng)化、實用性為原則，在原有分子生物學實驗教學工作基礎(chǔ)上，針對我校研究生科研工作的特點，對分子生物學實驗教學體系與教學方法進行了改革的初步探索。在充分調(diào)研的基礎(chǔ)上，我們把改革后的分子生物學實驗課程重點放在主要圍繞“綠色熒光蛋白（GFP）基因”展開，整個實驗內(nèi)容包括原核生物細胞轉(zhuǎn)化、質(zhì)粒DNA的分離純化、限制性內(nèi)切酶對質(zhì)粒DNA的酶切與瓊脂糖凝膠電泳鑒定、重組技術(shù)、PCR基因擴增、蛋白質(zhì)電泳分離表達蛋白、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移技術(shù)、蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)等。這些實驗的內(nèi)容不僅涵蓋了之前所開設(shè)的所有基礎(chǔ)驗證性實驗，而且其連貫性和綜合性大大提升。實驗方案初步確定后，老師和相關(guān)實驗室的研究生開始預(yù)作實驗，發(fā)現(xiàn)不適合的地方及時修改，經(jīng)過反復(fù)實驗、討論，我們完成了綜合實驗方案。通過綜合設(shè)計性實驗的開設(shè)，不僅可以使學生強化課堂所學分子生物學的相關(guān)知識，在此基礎(chǔ)上，牢固掌握相關(guān)的實驗技能和實驗手段，在注重提高了學生的實踐動手能力的同時，更要注重提高研究生對所學實驗技術(shù)的應(yīng)用能力和分析實驗問題的能力?，F(xiàn)在的整個實驗內(nèi)容涵蓋了分子生物學的基本實驗技術(shù)，每個實驗之間都有著非常緊密的聯(lián)系，改變了以前分子生物學實驗之間割裂無聯(lián)系的狀況。各項實驗相對獨立，但無論在邏輯上還是在時間上，前后都是緊密關(guān)聯(lián)的。

2.教學方式的改革。在教學方式上，我們做了如下工作：①在每次實驗前，老師都要應(yīng)集中講解實驗原理，把基礎(chǔ)知識和實驗中要遇到的問題講解透徹，帶領(lǐng)學生仔細分析實驗步驟，并針對關(guān)鍵操作、技術(shù)難點或容易誤解之處進行詳解，有必要時進行演示，使學生能更好地掌握實驗原理和技術(shù)，并要求學生重視實驗課程的預(yù)習。②為了保證實驗的連續(xù)性，實驗課集中在二周內(nèi)完成；實驗課全天安排。由于有的分子實驗需要等待的時間較長，為了有效利用研究生的時間，實驗前我們合理安排實驗內(nèi)容和時間，在開課前把實驗安排和進度告訴學生，使研究生可有效的利用時間。這種安排可使學生在操作時目標明確，也因其與科研的節(jié)奏和氣氛相符，而使學生體驗到科研的樂趣而對未來的科研工作產(chǎn)生了向往。③我系的研究生從入學開始就參加了課題組相關(guān)實驗技能的培訓(xùn)。在實驗技能上優(yōu)于其他專業(yè)選課的學生。根據(jù)這一優(yōu)勢條件，我們每年都要安排2~3名學生參加到實驗教學中來，研究生參與實驗教學的好處為：一是學生之間更便于交流；二是同時提高了我專業(yè)學生的實驗基本理論和實驗技能，提高了研究生的綜合素質(zhì)，起到了一舉兩得的作用。④由于其獨特的優(yōu)勢，多媒體教學在理論教學中已經(jīng)成為不可缺少的教學工具，而在實驗教學中的優(yōu)勢卻因條件所限制。自2005年起，生物科學與技術(shù)學院的實驗中心開始為各個實驗室安裝多媒體系統(tǒng)。經(jīng)過幾年的實踐證明，實驗課程采用多媒體網(wǎng)絡(luò)教學與實驗教學相結(jié)合，利用了教學課時，拓寬了實驗教學的知識面，提高了實驗教學效果，得到了師生的一致認可。使用多媒體實驗課件后，我們可以將復(fù)雜的實驗原理以生動的圖像加以簡練的文字表達出來，可以很便捷地控制實驗過程和時間，便于與學生課堂交流，取得了很好的實驗效果。在課堂上，我們經(jīng)常引導(dǎo)學生到網(wǎng)上檢索實驗中的問題，進一步引申在科研中如何利用網(wǎng)站尋找解決實驗問題的方法，幫助研究生提高在科研中檢索文獻的能力，增加他們的學習興趣。這種實驗方式可以提高研究生解決科研中出現(xiàn)問題的能力，為進入實驗室進行科研研究做好技術(shù)上和心理上的準備。在授課過程中，老師要經(jīng)常有針對性地提出一個問題，引導(dǎo)學生尋找解決這個問題的方式方法。

雖然在分子生物學實驗改革中，我們經(jīng)過摸索探討取得了一定的成績，但對于大幅度提高學生的綜合能力的目標仍存在很大差距，這就要求我們實驗課教師要在教學過程中不斷進行總結(jié)和思考，本著作為教師培養(yǎng)學生的高度責任感，把培養(yǎng)學生作為我們首要的任務(wù)，就能將分子生物學實驗教學不斷得以完善。

參考文獻：

[1]劉靜，胡維新，羅志勇.開設(shè)碩士研究生分子生物學實驗技術(shù)課程的幾點體會[J].山西醫(yī)科大學學報：基礎(chǔ)醫(yī)學教育版，2006，8（4）：419-420.

[2]彭緒蘭.改革實驗教學培養(yǎng)創(chuàng)新人才[J].高等理科教育，2002，（6）：17-19.

[3]魯保富，鄭春龍.實驗體系與創(chuàng)新能力培養(yǎng)的探索與實踐[J].高等理科教育，2005，（6）：107-109.

[4]王玲，秦永燕.分子生物學課程教學改革探索[J].當代教育論壇（學科教育研究），2008，（4）：101-102.

[5]張艷，何鳳田.開放式實驗教學在七年制分子生物學實驗課中的應(yīng)用[J].山西醫(yī)科大學學報（基礎(chǔ)醫(yī)學教育版），2003，5（3）：283-284.

[6]柏素花.分子生物學實驗教學改革的實踐與探討[J].科技信息（學術(shù)研究），2008，（8）：110-111.

[7]張棟，閆峻，王惠珍，等.分子生物學實驗教學的改革與探索[J].實驗室科學，2006，（6）：28-29.

[8]楊清玲，陳昌杰，連超群，等.本科生分子生物學實驗教學改革的實踐和體會[J].山西醫(yī)科大學學報（基礎(chǔ)醫(yī)學教育版），2007，9（1）：44-46.