金威消石湯治療結(jié)石小鼠泌尿系統(tǒng)

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泌尿系統(tǒng)結(jié)石是臨床的常見病及多發(fā)病，目前在臨床上主要依靠手術(shù)及藥物進(jìn)行治療，部分患者或選擇保守治療及體外碎石進(jìn)行治療。隨著醫(yī)學(xué)研究的迅猛發(fā)展，越來越多的先進(jìn)醫(yī)療設(shè)備及手術(shù)方法被應(yīng)用于臨床。需要注意的是，先進(jìn)醫(yī)療設(shè)備及手術(shù)治療方法在應(yīng)用于臨床取得良好治療效果的同時(shí)，存在著一定的局限性，如手術(shù)適應(yīng)證、治療后殘余結(jié)石等，尤其是在降低泌尿系統(tǒng)結(jié)石復(fù)發(fā)方面。在祖國醫(yī)學(xué)傳統(tǒng)理論中，結(jié)石屬于“石淋”范疇，是由于體內(nèi)濕熱釀火，灼燒津液所致，需化濕降火，滋陰排石。利用傳統(tǒng)中藥治療結(jié)石，具有安全性能好、針對性強(qiáng)、患者痛苦少、治療效果好、副作用少等優(yōu)點(diǎn)，受到臨床醫(yī)護(hù)工作者及患者的歡迎。在泌尿系統(tǒng)疾病的醫(yī)學(xué)研究中，通過泌尿系統(tǒng)結(jié)石動(dòng)物模型進(jìn)行試驗(yàn)是普遍而有效的做法。通過動(dòng)物試驗(yàn)，不僅能夠更加深入地了解中藥治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的應(yīng)用價(jià)值，還能明確其中藥理，印證關(guān)于泌尿系統(tǒng)結(jié)石病因及病程的理論。本次研究選擇健康昆明種小鼠90只，均為6周齡，雌雄各半，通過三氯氰胺建立泌尿系統(tǒng)結(jié)石造模成功后，選用金威排石湯(JWT)進(jìn)行治療，取得了不錯(cuò)的治療效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與研究方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本次研究選擇健康昆明種小鼠90只，雌雄各半，體重18～25g，均為6周齡，將其隨機(jī)分為4組，分別為空白對照組、結(jié)石模型對照組、結(jié)石模型+PSHC(枸櫞酸氫鉀鈉顆粒)組、結(jié)石模型+JWT組，其中后兩組再分成低劑量及高劑量2個(gè)亞組?？瞻讓φ战M10只，給予蒸餾水灌胃，0.2mL/10g/次，1次/d，持續(xù)30d;結(jié)石模型對照組16只，給予三聚氰胺溶液灌胃，0.2mL/10g/次，1次/d，持續(xù)30d;結(jié)石模型+PSHC組中高劑量及低劑量亞組均為16只，在結(jié)石模型組基礎(chǔ)上加入PSHC灌胃，PSHC含量分別為1.25g/mL及0.5g/mL，0.2mL/10g/次，1次/d，持續(xù)30d;結(jié)石模型+JWT組在結(jié)石模型組基礎(chǔ)上加入金威消石湯粉劑及湯劑進(jìn)行小白鼠灌胃，高劑量亞組及低劑量亞組均為16只，JWT濃度分別為0.625g/10g與2.50g/mL，0.3125g/10g與1.23g/mL，灌胃量均為0.2mL/10g/次，1次/d，持續(xù)30d。其中，先期進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，使用三聚氰胺溶液含量分別為每kg溶液含三聚氰胺500mg、1000mg、1500mg及2000mg，同時(shí)設(shè)立空白對照組，每組均為5只小鼠，連續(xù)灌胃30d后，將小鼠常規(guī)處死，并將其雙側(cè)腎臟制成病理切片觀察以確定三聚氰胺建立泌尿系統(tǒng)結(jié)石小鼠模型應(yīng)用劑量。本次研究中應(yīng)用三聚氰胺劑量為2000mg/kg，泌尿系統(tǒng)結(jié)石為草酸鈣晶體結(jié)石。

1.2研究方法

本次試驗(yàn)研究方法主要包括采集樣本與觀察指標(biāo)。其中，本次試驗(yàn)采集樣本及觀察指標(biāo)包括以下幾點(diǎn):

(1)試驗(yàn)期間觀察各組小鼠每日活動(dòng)狀態(tài)，以及毛色變化情況，小鼠在試驗(yàn)期間每周均需稱重1次;

(2)觀察泌尿系統(tǒng)組織成石情況，灌胃30d對所有小鼠進(jìn)行稱重后處死，并立即進(jìn)行解剖，采集膀胱內(nèi)尿液，通過pH試紙檢測pH值，并應(yīng)用尿液常規(guī)鏡檢查找結(jié)晶體，同時(shí)對解剖后的小鼠泌尿系統(tǒng)組織內(nèi)成石情況通過肉眼進(jìn)行觀察，確定結(jié)晶體顆粒形成情況;

(3)腎功能檢測，試驗(yàn)開始15d及30d后，分別采集試驗(yàn)小白鼠尾部靜脈血標(biāo)本各1mL，送實(shí)驗(yàn)室，檢測血液中血清肌酐、尿素氮及尿酸水平;

(4)觀察試驗(yàn)小鼠體內(nèi)腎臟形態(tài)學(xué)變化，并對其腎臟進(jìn)行稱重，沿腎門區(qū)輸尿管將腎臟剪斷后，對半切開，通過福爾馬林緩沖固定、脫水機(jī)石蠟包埋后，常規(guī)進(jìn)行切片及HE染色，在顯微鏡下對腎臟內(nèi)病理方面變化、結(jié)晶體形成情況進(jìn)行觀察及記錄，按照腎臟損害程度及炎癥反應(yīng)表現(xiàn)將其分成三級(jí)，并通過免疫組化法檢測小白鼠腎臟組織內(nèi)TNF－Ar表達(dá)相關(guān)情況。

1.3試驗(yàn)藥物

本次試驗(yàn)應(yīng)用金威消石湯配方包括:

(1)湯劑，金錢草(80g)、黃芪(60g)、王不留行(30g)、牛膝(30g)、益母草(30g)及雞內(nèi)金(20g)，按照常規(guī)方法將其制成濃縮液(生藥質(zhì)量濃度設(shè)定為2.50g/mL及1.23g/mL);

(2)粉劑，包括元明粉(10g)、琥珀(5g)及黑木耳粉(10g)，按照常規(guī)方法將藥材研磨成粉末，制成粉劑。本次試驗(yàn)選用PSHC，即枸櫞酸氫鉀鈉顆粒，將其加入蒸餾水中，制成高、低劑量溶液，含量分別為1.25g/mL及0.5g/mL。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0軟件對本次試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，分別采用χ2檢驗(yàn)及t檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05，數(shù)據(jù)差異比較明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1結(jié)石小鼠體重及毛色變化

30d內(nèi)，4組試驗(yàn)小鼠體重變化均不明顯。其中，空白對照組小鼠毛色無變化，其余小鼠毛色逐漸黯淡無光，但組間比較差異不顯著，P均＞0.05。

2.2結(jié)石小鼠泌尿系統(tǒng)成石情況比較

4組小鼠體內(nèi)泌尿系統(tǒng)成石情況按照腎臟損傷程度及炎癥反應(yīng)分成3個(gè)等級(jí)進(jìn)行比較，差異比較明顯，P＜0.05。

2.3結(jié)石小鼠中血清肌酐、尿素氮及尿酸水平比較

4組小鼠在試驗(yàn)開始后15d及30d，分別抽取尾靜脈血進(jìn)行靜脈檢測血清肌酐、尿素氮及尿酸。其中，結(jié)石模型藥物治療組共兩組，血清中尿素水平治療后同結(jié)石模型組小鼠相比較，下降均比較明顯，以結(jié)石模型+JWT組中高劑量亞組下降幅度最明顯，P＜0.05，

2.4小鼠腎臟重量及TNF－Ar表達(dá)情況

由于金威消石湯及PSHC均對小鼠具有一定的利尿作用，故試驗(yàn)結(jié)束后將小鼠腎臟稱重，結(jié)石模型組小鼠腎臟重量相對較高，而結(jié)石模型+JWT組高劑量亞組小鼠TNF－Ar表達(dá)情況相對最好。

3討論

泌尿系統(tǒng)結(jié)石，在臨床又稱為尿石癥，或石淋，是指在腎或膀胱等泌尿系統(tǒng)組織中形成的晶體物質(zhì)，在某種或某幾種原因作用下逐漸下移，引起機(jī)體出現(xiàn)的一系列臨床表現(xiàn)，在泌尿系統(tǒng)疾病發(fā)病率中位居第三位，是急診泌尿科中的常見病，多發(fā)于30～50歲年齡人群。臨床常見的幾種治療方法中，手術(shù)或體外沖擊波碎石屬于西醫(yī)治療措施，具有創(chuàng)傷大、后遺癥多等缺點(diǎn)，但保守治療措施臨床療效不佳。而應(yīng)用中藥治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石則可得到較好的臨床效果，廣泛應(yīng)用于結(jié)石直徑不足1cm的尿石癥治療中，臨床上常聯(lián)合如體外碎石等措施治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石。據(jù)臨床研究顯示，中藥治療尿石癥方劑較多，如八珍湯等，治療尿石癥，有效率最高可達(dá)73%～98%。而且結(jié)石中主要成分多為草酸鈣或磷酸鈣，在所有結(jié)石中約占82%左右，其中，腎結(jié)石中草酸鈣發(fā)病率多于磷酸鈣。本研究所用金威消石湯為我院校合作自制排石中藥驗(yàn)方，具有化堅(jiān)消石、活血補(bǔ)腎止痛的作用，在所有受試小鼠分組中，排石效果最好，對草酸鈣晶體關(guān)于其生長及聚集方面的抑制作用最強(qiáng)。此外，還可通過在中藥方劑中加入豬苓等藥材抑制腎臟中的腎小管向外擴(kuò)張，降低腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)的變形、腫脹等異常，而且能夠明顯降低尿液和腎臟組織內(nèi)鈣離子含量，同樣對尿草酸鈣結(jié)石的排除也具有一定的作用及經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)證實(shí)與豬苓麥角甾醇關(guān)系比較密切。由此可推測，金威消石湯能夠減緩草酸鈣晶體聚集速度，促進(jìn)小鼠排尿，增加排尿量，本次研究中以用藥后3h內(nèi)最為明顯。綜上所述，金威消石湯能夠有效治療小鼠泌尿系統(tǒng)結(jié)石，促進(jìn)小鼠提高尿量，若聯(lián)合其他藥物可得到更好療效。

作者：趙燕芬 邵少慰 肖劍 單位：肇慶醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 肇慶市第二人民醫(yī)院