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三峽庫區(qū)消落帶濕地治理一直是國內(nèi)外關(guān)注的焦點，三峽庫區(qū)正常運行后，在海拔145米到175米的庫區(qū)兩岸，形成水位漲落幅度高達30米、面積400多平方公里的水庫消落帶濕地。消落帶內(nèi)種植的植物，由于受到三峽發(fā)電站儲水發(fā)電的控制，在每年的六月水位才回落到145米，九月就要開始淹水沒頂，上漲到175米高程，因此植物生長的時間有限，只有短短的2到3個月的時間，因此消落帶生態(tài)治理的成敗不僅在于選擇科學的防護治理模式，更在于選擇合適的耐水淹植物。
耐水淹植物選擇原則
根據(jù)庫區(qū)水位漲落規(guī)律，要求植物在短期內(nèi)生長迅速旺盛，能迎接每年8月底就開始漲水淹沒，要求植物在短期內(nèi)能生長成熟迎接沒頂淹水考驗。
要求根系發(fā)達，莖葉強勁，在淹水缺氧的條件下能承受高達30米的水壓。
自我修復(fù)能力強，一旦路出水面能迅速發(fā)芽返青。
分蘗繁殖能力強，覆蓋迅速，在短期內(nèi)能有效的對消落帶進行生態(tài)防護。
試驗植物的選擇
三峽庫區(qū)為發(fā)揮其應(yīng)有的實際功能，庫區(qū)內(nèi)水位在一年中變化多次，同時又具有一定的水位規(guī)律，由此形成了在庫區(qū)兩岸及多條支流的水位消落變化帶。該區(qū)域的防護直接影響到庫區(qū)內(nèi)兩岸的水土保持影響，為研究該區(qū)域有效的防護方式，并達到生態(tài)防護目的，特在秭歸縣香溪馬槽嶺消落帶區(qū)域進行科研試驗，開展消落帶生態(tài)防護工程研究。
試驗區(qū)施工范圍為長江消落水位145~175m河岸邊坡，消落帶垂直落差30m，涉及長江水位變化范圍的全過程，生態(tài)治理面積達3.4萬平方米。試驗選擇了多個品種的耐水淹植物進行消落帶邊坡生態(tài)防護試驗研究，這次較大規(guī)模的試驗研究，其技術(shù)特點就是以生態(tài)防護為主，改變了傳統(tǒng)的以工程防護手段治理的特點，力爭在耐水淹植物應(yīng)用及生態(tài)防護形式的研究方面有新的突破。
主要品種的確定
香根草、狗牙根、百喜草、耐水淹灌木疏花水柏枝等品種，為主要選擇品種，輔以其他品種高洋茅作為先鋒防護品種，達到快速防護與長期防護效果結(jié)合的目地。
香根草在水下淹沒長達3個多月后可恢復(fù)生長，具有優(yōu)異的耐水淹性能。百喜草具有較強的耐寒性與耐水性能，耐陰性也較強強；狗牙根匍匐莖發(fā)達，生命力極強；疏花水柏枝等品種本生就是水生植物品種，耐水性能也較強。本次試驗項目所選植物品種均具有較強的耐水淹性能。
2、鄉(xiāng)土植物的選擇
為擴大耐水淹植物的篩選范圍，為消落帶生態(tài)治理提供簡便易得、適合當?shù)赝临|(zhì)、氣候條件的植物品種，消落帶綜合治理小組在長江沿線及長江支流香溪河沿線查尋了當?shù)氐乃参锓植寂c生長情況，在原有綜合治理方案的基礎(chǔ)上有選擇性的增加了當?shù)刂参锕?jié)節(jié)草、水草、龍須草，并選取了三峽地區(qū)十分豐富的植物品種巴王草進行耐水淹種植試驗，一旦獲得成功，將為庫區(qū)消落帶的治理提供十分豐富的植物支持。
四、植物生長特性(1)
香根草
（1）優(yōu)異的耐水淹性能
香根草在水下淹沒長達3個多月后可恢復(fù)生長，具有優(yōu)異的耐水淹性能。
（2）適應(yīng)溫度范圍廣，氣溫-10°C~45°C均能正常生長。
（3）香根草耐瘠性極強，根草耐酸耐堿耐鹽，可適應(yīng)pH3.5~11的土壤環(huán)境。
（4）巨大的水土保持功能
香根草分蘗性強，一般每叢分蘗30~50株，最多達117株。而且其根頸位于表土下，分蘗后從地面就十分密集；葉片又十分堅韌挺拔，不易被水沖倒。
（5）優(yōu)異的生物錨固功能
香根草根系十分發(fā)達，以須根狀深扎于土中，根長一般2~3米，最長可達到5.2米。
（6）生長迅速是香根草又一特點，可以及時發(fā)揮其保持水土作用。
（7）適用于高陡邊坡，45~60°的陡坡和大于40m的長坡的花崗巖侵蝕裸地，種植香根草籬16個月就已郁郁蔥蔥，可使侵蝕穩(wěn)定下來。
百喜草
形態(tài)特征：多年生草本植物，自然高度30～60cm，修剪高度4～8cm。質(zhì)感粗，生長速度中。
生長習性：生性粗放，對土壤選擇性不嚴，分蘗旺盛，地下莖粗壯，根系發(fā)達。種子表面有蠟質(zhì)，播種前宜先浸水一夜再播種，以提高發(fā)芽率。密度疏，耐旱性、耐暑性極強，耐寒性尚可，耐陰性強，耐踏性強
狗牙根
狗牙根具發(fā)達的根狀莖和細長的匍匐莖，匍匐莖擴展能力極強，長可達1-2m，每莖節(jié)著地生根，可繁殖成新株;葉披針形或線形，長2-1Ocm，寬1-7mm，葉短；穗狀花序，長2-5cm，生長速度、密度均中等，耐蔭性很差，耐踐踏。
狗牙根較耐淹，水淹下生長變慢；耐鹽性也較好。要求土壤PH值為5.5-7.5。
疏花水柏枝
疏花水柏枝，落葉灌木，高1.5m，葉小，無柄，花粉紅色，落葉灌木，高1.5m。葉小，無柄。花粉紅色。 僅分布于湖北巴東、秭歸和四川巫山，生于低山河岸邊及路旁。山峽庫區(qū)特有植物，現(xiàn)已瀕危滅絕，但經(jīng)過科學家的搶救與移栽，現(xiàn)已在旱地培育成功。
其他品種：節(jié)節(jié)草、水草、龍須草，巴王草等品種為當?shù)剜l(xiāng)土植物，適宜當?shù)貧夂?，生長迅速，但耐水淹性能有待試驗來驗證。
項目實施情況
項目于2012年4月開工實施，2012年6月初長江水位降至145米高程，2012年6月底完成了全部生態(tài)防護項目， 2012年8月底三峽水庫開始儲水，在這有限又十分寶貴的兩個月時間范圍內(nèi)加強了植物的養(yǎng)護管理，特別是水肥管理，使植物生長健康迅速，根系發(fā)達，以增強植物的耐水淹能力。8月底水位由146米高程連續(xù)上漲，到十月下旬水位上漲到174—175米高程，上漲水位高度落差為30米。植物處于長江175水位、最大水壓為達30米的消落環(huán)境中考驗。
五、植物培育
香根草的培育：香根草部分采取預(yù)先培育的方法種植，在現(xiàn)場建立培育苗床，培育香根草的容器苗，以提高植物成活率，加速植物生長，為后續(xù)出來的消落區(qū)提前準備好生長健康的香根草容器苗，提高植物耐水淹的能力。
這一技術(shù)的應(yīng)用解決了植物生長所需較長時間與消落區(qū)水位消落晚路出的坡面提供給植物生長時間短的矛盾，為植物生長提供了有力保障，使植物根系及早生長與發(fā)育，在有限的時間內(nèi)盡可能地提高植物的耐水淹能力。
養(yǎng)護與觀察
現(xiàn)場施工完畢，進入養(yǎng)護管理與科研觀察階段，安排專人在現(xiàn)場養(yǎng)護與觀察記錄，注意溫度、濕度、風力以及浪力對消落帶的影響，特別是水位漲落次數(shù)對植被的影響，觀察植物生長與周圍環(huán)境的關(guān)系。
試驗效果與結(jié)論
2013年4月水位下降到160米，隨著4月份溫度上升、水位下降，消落區(qū)逐步露出水面，植物開始復(fù)蘇成活。水位163米以上植物成活的較好的是香根草與狗牙根，163水位以下為狗牙根復(fù)活的較好，在水下浸泡半年之久的香根草與狗牙根依然有著旺盛的生命力，其它物種耐水淹性能差，成活率不高，防沖刷能力也不強。
消落帶生態(tài)防護試驗區(qū)內(nèi)香根草雙層加筋復(fù)合植被柔性板塊中的香根草、狗牙根植物，在經(jīng)受近半年多江水淹沒后又萌發(fā)新芽，成活率較高，顯示其優(yōu)異的耐淹性與防護整體性，通過試驗發(fā)現(xiàn)：香根草、狗牙根為消落帶防護的優(yōu)秀品種。
通過耐水淹植物的應(yīng)用研究，課題組篩選出了適宜三峽庫區(qū)生態(tài)防護的部分植物品種，如何充分用好耐水淹植物、發(fā)現(xiàn)更多更好的品種，采取更適宜更靈活的生態(tài)防護形式，充分發(fā)揮耐水淹植物的特性，降低工程造價，破解消落帶治理的世界性難題,還有待工程建設(shè)者去做進一步的研究與探索.
上游水質(zhì)總體良好
記者：三峽大壩上游水質(zhì)情況如何？三峽庫區(qū)蓄水后水環(huán)境情況怎樣？
曹廣晶：三峽工程完工后，水庫將蓄水至正常蓄水位175米。隨著水庫內(nèi)的水深增加，水面加寬，流速減緩，是否會影響污染物的稀釋?這是公眾關(guān)心的話題。
從上個世紀70年代起，長江水資源保護局就開始著手研究三峽工程對生態(tài)和環(huán)境的影響。三峽庫區(qū)蓄水后，庫區(qū)換水速度比較高，很難形成富營養(yǎng)化。但是在三峽庫區(qū)局部地區(qū)，如三峽庫灣地區(qū)、開縣的小江、萬州的龍寶河等支流易發(fā)生富營養(yǎng)化。
為了保證未來的三峽庫區(qū)是一庫清水，2001年11月，國務(wù)院批準了國家環(huán)?？偩纸M織編制的《三峽庫區(qū)及其上游水污染防治規(guī)劃》，三峽庫區(qū)及其上游的經(jīng)濟建設(shè)活動必須符合《規(guī)劃》的要求。
按照《規(guī)劃》要求，到2010年，庫區(qū)將建成城市污水處理廠151座，建成沿江城鎮(zhèn)污水處理設(shè)施113座，使庫區(qū)、影響區(qū)和上游區(qū)的生活污水處理率分別達到95%、85%和70%。在工業(yè)污染防治方面，要通過關(guān)閉重污染企業(yè)、實施清潔生產(chǎn)等措施，到2005年庫區(qū)已削減工業(yè)污染負荷30%，影響區(qū)削減工業(yè)污染負荷20%。生態(tài)環(huán)境保護的重點是控制水土流失，減少泥沙入庫量。庫區(qū)和影響區(qū)內(nèi)25度以上的坡耕地全部還林還草，建立岸邊生態(tài)保護帶，嚴禁在該區(qū)域進行任何有礙生態(tài)保護的活動。
三峽工程蓄水兩年多來，三峽水庫水質(zhì)總體良好，以三類水質(zhì)為主。這說明三峽工程蓄水以來，長江上游水質(zhì)沒有明顯變化。
“蓄清排渾”解決泥沙問題
記者：三峽大壩建成后，泥沙會對水庫形成淤積嗎？
曹廣晶：泥沙問題一直是三峽工程論證過程中最主要的問題之一。從上世紀50年代開始，我國專家就開始了針對三峽工程泥沙問題的研究。隨后，長江水利委員會組織專家，對全國范圍內(nèi)的水庫泥沙問題進行調(diào)查，并于70年代在武漢建立了三峽壩區(qū)泥沙模型。另外，上個世紀60年代對三門峽工程泥沙處理問題的研究，以及隨后對葛洲壩樞紐工程泥沙問題的研究和處理，都為三峽泥沙問題的研究和解決提供了實踐經(jīng)驗。1983年后，全國泥沙專家對三峽工程的泥沙問題展開了全面研究。
專家們總結(jié)出用“蓄清排渾”的科學方法來解決三峽水庫的泥沙問題，就是通過對水庫的合理調(diào)度，盡可能地把大量的泥沙排放出去，等到每年11月份枯水期后，泥沙量也減少了，再把清水蓄在水庫里。三峽水庫采取“蓄清排渾”的措施，在泥沙多的汛期一般不蓄水，在泥沙少的季節(jié)蓄水用于發(fā)電和航運。但三峽工程的主要目的是防洪，一旦碰上大洪水，就要攔截洪峰，這樣就會把一些泥沙留在水庫內(nèi)?？茖W試驗證明，三峽水庫運行100年后，水庫防洪庫容還會保留86%，水庫達到新的平衡。所以，三峽水庫可長期運用。
最近10年多的監(jiān)測成果表明，長江泥沙含量已呈逐年下降之勢，三峽庫區(qū)的水土流失近年也有減少趨勢。三峽壩址的輸沙量，近年也有減少的趨勢。
200個垃圾處理場緩解“清漂”壓力
記者：長江汛期出現(xiàn)過大量的“漂浮物”。三峽大壩建成后，怎么解決這個問題？
曹廣晶：三峽庫區(qū)分布著縣級以上城市20多個，居住著城鄉(xiāng)人口3000多萬。按照國家總體規(guī)劃，三峽庫區(qū)將建設(shè)近200個垃圾處理場，這能夠在一定程度上緩解未來的“清漂”工作壓力。
但由于沒有相應(yīng)的垃圾處理站點，降大雨時垃圾難免順流入庫。
按照《三峽經(jīng)濟社會發(fā)展規(guī)劃》和《三峽庫區(qū)庫岸綠化帶規(guī)劃》，在三峽庫區(qū)生態(tài)建設(shè)項目投入資金數(shù)百億元。
為了及時清理壩前漂浮物，近兩年來，三峽總公司在大壩前投入的清漂投資已經(jīng)達到1300萬元。2005年，三峽總公司投巨資購買了一條可稱得上當前世界上最大的清漂船(300m3)，已于5月份投入使用。根據(jù)有關(guān)文件精神，干流清漂由總公司負責，支流由各省市負責。干流清漂三峽總公司已分別委托重慶和湖北的有關(guān)單位進行沿途打撈。
三千余萬元用于中華鱘研究
記者：三峽大壩對長江水生生物有什么影響？對中華鱘采取了什么保護措施？
曹廣晶：三峽大壩的修建影響到6種國家珍稀瀕危水生生物。它們是：白鰭豚、白鱘、中華鱘、長江鱘、江豚和胭脂魚。近年來，三峽建委組織農(nóng)業(yè)部和中國科學院對影響區(qū)的水生生物進行了嚴密監(jiān)測。
為了保護中華鱘，國家明令禁止商業(yè)性捕撈，并在宜昌建立了中華鱘人工繁殖研究所。自1984年以來，共向長江放流幼體中華鱘已近453萬尾。
二十幾年來，中華鱘研究所在沒有可借鑒資料的情況下，從零起步，積極探索。從最初的網(wǎng)捕中華鱘過壩自然繁殖、葛洲壩壩下中華鱘性腺發(fā)育調(diào)查到人工繁殖試驗性研究，僅用兩年時間就成功繁殖出中華鱘幼苗，并于1984年首次向長江放流中華鱘6000尾。1988年，向長江放流中華鱘幼鱘12萬尾、9至12厘米大規(guī)格中華鱘5000尾。1995年，中華鱘研究所攻克幼鱘培育技術(shù)難關(guān)，形成穩(wěn)定的大規(guī)格中華鱘放流能力；1999年，中華鱘研究所達到年度向長江放流大規(guī)格幼鱘5萬尾以上的能力。截至2004年，中華鱘研究所共向長江、珠江放流多種規(guī)格中華鱘4537309尾，為保護并繁殖中華鱘做出了巨大的貢獻。2005年4月，中華鱘研究所再向長江放流幼鱘10萬尾及胭脂魚科3000尾。中國三峽總公司對中華鱘研究所累計投資3734萬元。
蓄水不會造成物種滅絕
記者：三峽大壩對陸生植物有何影響？有哪些保護措施？
[關(guān)鍵詞] 膝骨性關(guān)節(jié)炎；基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-9；基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-12；基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-13
[中圖分類號] R684；R285.5 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2017）06-0116-03
[Abstract] Objective To investigate the changes of serum levels of matrix metalloproteinases （MMPs） -9， 12 and 13 in patients with knee osteoarthritis （KOA） before and after treatment. Methods 45 cases of KOA （case group） were treated with diclofenac sodium enteric-coated capsules 75 mg， once/d for 14 d. The changes of serum MMP-9， 12 and 13 levels were observed and compared before and after 14 days of treatment. 30 healthy subjects in the same period were taken as health group. Results Before treatment， the levels of serum MMP-9， 12 and 13 in the case group were significantly higher than those in the control group（P
[Key words] Knee osteoarthritis； Matrix metalloproteinase（MMP）-9； Matrix metalloproteinase（MMP）-11； matrix metalloproteinase（MMP）-13
膝骨性P節(jié)炎（knee osteoarthritis，KOA）是一種發(fā)生于中老年膝關(guān)節(jié)的退行性關(guān)節(jié)疾病，常以膝關(guān)節(jié)腫痛及功能受限為主要表現(xiàn)，嚴重者可引起關(guān)節(jié)畸形[1，2]。KOA的發(fā)病機制十分復(fù)雜，近年來研究發(fā)現(xiàn)細胞外基質(zhì)的合成與降解平衡失調(diào)是引起KOA的重要原因，而基質(zhì)金屬蛋白酶家族（matrix metalloproteinase，MMPs），尤其是MMP-9、12和13參與細胞外基質(zhì)的合成與降解過程中，在KOA的發(fā)生、發(fā)展和病情判斷中扮演重要作用[3-5]。本研究觀察了血清MMP-9、12和13水平在KOA患者治療前后的變化，現(xiàn)報道如下。
1 資料與方法
1.1一般資料
選取2015年1月～2016年6月在我院門診就診的KOA患者45例（病例組）。納入標準：均符合《骨關(guān)節(jié)炎診斷及治療指南（2010版）》中的診斷及分度標準[6]，且具有典型的KOA關(guān)節(jié)腫痛及功能受限等癥狀；排除標準：（1）結(jié)核性、化膿性和風濕性膝關(guān)節(jié)炎；（2）內(nèi)分泌風濕疾病、惡性腫瘤和免疫性疾病等。其中男17例，女28例；年齡45～84歲，平均（68.4±7.1）歲；左側(cè)24例，右側(cè)19例，兩側(cè)3例；病程12個月～10年，平均（4.8±0.9）年。另取同期我院體檢的健康者30例作為健康組，其中男12例，女18例；年齡41～80歲，平均（67.5±6.4）歲。兩組性別和年齡等比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。
1.2 治療方法
病例組予以雙氯芬酸鈉腸溶膠囊75 mg，1次/d，連用14 d。觀察治療前后血清MMP-9、12和13水平的變化。而健康組僅在納入前測定血清MMP-9、12和13水平1次。
1.3 觀察指標
1.3.1 標本采集 分別取治療前和治療14 d后患者的空腹肘靜脈血約3～5 mL，于非抗凝試管中室溫放置15～20 min待其逐漸自行凝固，常規(guī)2500 r/mim低溫離心分離出并提取出血清，將血清進行分裝置于-80℃恒溫冰箱保存待檢。
1.3.2 血清MMP-9、12和13水平的測定 均采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定，試劑盒由上海富眾生物科技公司提供。
1.4 統(tǒng)計學處理
應(yīng)用SPSS18.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，比較采用t檢驗，檢驗水準α定為0.05，P
2 結(jié)果
2.1兩組患者血清MMP-9、12和13水平的比較
病例組患者血清MMP-9、12和13水平較對照組更高（P
2.2 病例組患者治療前后血清MMP-9、12和13水平的比較
治療14 d后，病例組患者血清MMP-9、12和13水平明顯下降，低于治療前水平（P
3 討論
隨著老齡化社會的到來，KOA的發(fā)病率也呈一定幅度的上升且患者年齡逐漸年輕，嚴重危害中老年患者身心健康，需積極予以干預(yù)治療[7-9]。KOA的發(fā)病機制較復(fù)雜，迄今國內(nèi)外尚未完全研究透徹，大多數(shù)學者認為其與外傷、運動磨損、脂質(zhì)過氧化、軟骨代謝異常、氧自由基紊亂、炎癥因子、免疫、鈣超載、遺傳和酶對軟骨基質(zhì)的破壞等多種因素密切有關(guān)，其中酶對軟骨基質(zhì)的破壞在其中扮演及其重要的角色[10-12]。MMPs是一類含鋅離子或鈣離子，且結(jié)構(gòu)相類似的多肽蛋白酶家族，目前國內(nèi)外的研究認為其是降解細胞外基質(zhì)的主要活性蛋白，主要通過抑制膠原及蛋白聚糖的合成，破壞軟骨細胞與軟骨基質(zhì)的正常的解剖結(jié)構(gòu)，拮抗并阻止軟骨基質(zhì)的修復(fù)，使得關(guān)節(jié)軟骨的抗應(yīng)能力明顯下調(diào)，破壞其正常的拱形結(jié)構(gòu)，使得關(guān)節(jié)軟骨彈性減弱結(jié)構(gòu)破壞，是 KOA整個發(fā)病過程中促進軟骨基質(zhì)降解和關(guān)節(jié)軟骨破壞的最重要的核心因子，與KOA的成因及發(fā)病機制關(guān)系密切[13-15]。
MMP-9、12和13均是MMPs家族中參與KOA的成因及發(fā)病機制的重要成員，可切斷組成關(guān)節(jié)軟骨的主要成分――Ⅱ型膠原和蛋白聚糖，使得細胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)無法正常形成而發(fā)生降解破壞，使軟骨細胞在炎癥因子及氧自由基的攻擊之下抗應(yīng)能力明顯下調(diào)，使得關(guān)節(jié)軟骨發(fā)生明顯破壞，破壞其正常的拱形結(jié)構(gòu)，導致受累關(guān)節(jié)腫痛，引起關(guān)節(jié)軟骨的退行性病變，參與KOA 發(fā)病過程[16-18]。因此，糾正膝關(guān)節(jié)OA患者MMP-9、12和13紊亂，保護關(guān)節(jié)軟骨的細胞外基質(zhì)成分避免發(fā)生降解是膝關(guān)節(jié)OA治療的新方向[19-22]。本研究示病例M血清MMP-9、12和13水平較健康組更高。表明KOA患者存在血清MMP-9、12和13水平的異常升高，提示KOA患者體內(nèi)存在MMPs水平紊亂，表現(xiàn)為MMP-9、12和13釋放增加，加劇了軟骨細胞和軟骨基質(zhì)的破壞，參與KOA的發(fā)病過程，MMP-9、12和13在KOA診斷和治療中起及其重要作用。同時本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療14 d后，血清MMP-9、12和13較前明顯下降。表明MMP-9、12和13水平的變化可作為KOA患者療效評價及預(yù)后評估的敏感血清學指標。
總之，KOA患者體內(nèi)存在MMP-9、12和13水平紊亂，在其診斷和治療中起重要作用。血清MMP-9、12和13水平的變化可作為KOA患者療效評價及預(yù)后評估的敏感血清學間接指標。但血液中MMP-9、12和13水平與關(guān)節(jié)液中MMP-9、12和13水平可能并不完全一致，有關(guān)KOA患者關(guān)節(jié)液中MMP-9、12和13水平是否存在異常的變化及變化特點有待進一步進行深入研究探討[23-25]。
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關(guān)鍵詞：糖尿病；非酒精性脂肪肝；黃芪注射液；脂肪分化相關(guān)蛋白
中圖分類號：R587.1 R256.2 文獻標識碼：A
doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2014.04.042
文章編號：1672-1349（2014）04-0464-02
非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一種以肝細胞脂肪變性為主，與酒精性肝病類似而無過量飲酒史的臨床病理綜合征。2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）患者由于肥胖、高脂血癥等因素，因而更易發(fā)生NAFLD[1]。黃芪為中藥益氣藥，有補益脾肺，益氣補陽之功效，已廣泛用于臨床。據(jù)報道，黃芪可使高脂血癥小鼠血清三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）水平降低，還具有抗脂質(zhì)過氧化、抗氧自由基等作用[2，3]。本研究旨在觀察黃芪注射液對糖尿病合并NAFLD大鼠血糖、血脂、肝臟形態(tài)學變化及脂肪分化相關(guān)蛋白的影響。
1 材料與方法
1.1 動物模型制備 雄性清潔級Wistar大鼠48只，體質(zhì)量180 g～200 g，購自山西醫(yī)科大學實驗動物中心，實驗經(jīng)倫理委員會審查通過。將Wistar大鼠隨機選擇16只作為正常對照組，喂以普通飼料，其余30只用于制備糖尿病非酒精性脂肪肝模型，飼養(yǎng)環(huán)境控制在22 ℃～25 ℃。造模方法：高糖高脂飼料飼養(yǎng)（普通飼料66.5%、蔗糖20%、豬油10%、膽固醇2.5%、膽酸鹽1%）。飼養(yǎng)4周后以50 mg/kg的劑量一次性腹腔注射鏈脲佐菌素，繼續(xù)高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周。空腹尾靜脈采血測空腹血糖（FBG），以3次FBG>11.1 mmol/L作為成模標準。將32只造模成功大鼠隨機選擇16只作為干預(yù)組，余16只作為模型組。干預(yù)組大鼠每日給予黃芪注射液3 mL/kg腹腔注射，對照組及模型組給予同體積生理鹽水。
1.2 標本采集及檢測 于干預(yù)后4周、8周（實驗12周、16周）分批頸椎脫臼處死大鼠，心臟采血6 mL～8 mL，放于消毒干燥的EP管中，待血液凝固后1 000 r/min離心15 min，分離血清，-20 ℃保存待檢。取大鼠肝臟右葉中部標本，一份置于-80 ℃冰箱保存，一份置于10%甲醛溶液中固定。血糖測定采用葡萄糖氧化酶法。血TG、TC采用全自動生化分析儀檢測，試劑盒購自北京中杉試劑公司。
1.3 肝臟HE染色標本制備 梯度濃度的乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟，石蠟包埋，制成厚度為3 μm切片，行蘇木素-伊紅染色，中性樹膠封片。
1.4 免疫印跡檢測肝臟ADRP的表達水平 稱取肝臟組織各0.1 g，按1∶1比例加入組織裂解液，4 ℃離心機，10 000 r/min，離心10 min，取上清，紫外分光光度計上測OD值，計算蛋白含量。配制8%和5%SDS-聚丙烯酰胺分離膠和濃縮膠，電泳槽中加入Tris-甘氨酸電泳緩沖液，60 V預(yù)電泳40 min，100 V電泳1 h。濕轉(zhuǎn)膜法將蛋白轉(zhuǎn)至NC膜上，設(shè)定參數(shù)100 V、350 mA轉(zhuǎn)膜30 min。蛋白干粉封閉，按照1∶1 000濃度稀釋ADRP一抗（santa cruz，sc-32888），將膜置于其中，4 ℃冰箱過夜，TBST緩沖液洗膜3次后置于二抗中室溫輕搖反應(yīng)1 h，TBST洗膜3次，ECL發(fā)光液顯色，凝膠成像儀曝光顯色。Bandscan圖像分析軟件對顯影條帶進行灰度分析，以平均灰度值作為蛋白的相對表達水平。
1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計學處理。計量數(shù)資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，檢驗水準a=0.05。
2 結(jié) 果
2.1 各組大鼠血糖及血脂的變化 8周時，模型組及干預(yù)組大鼠血糖、血TG及TC水平顯著高于對照組（P0.05）；16周時，干預(yù)組大鼠血糖及TG水平明顯低于模型組（P
2.2 各組大鼠肝臟形態(tài)學變化 正常對照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細胞大小均勻一致，肝索及肝竇排列整齊。實驗12周、16周時，模型組大鼠肝臟發(fā)生不同程度的脂肪變性，光鏡下表現(xiàn)為肝細胞質(zhì)中出現(xiàn)大小不等的空泡（脂滴），細胞核偏向細胞的一側(cè)，中央靜脈，匯管區(qū)及肝竇可見大量炎細胞浸潤。干預(yù)組大鼠12周時肝臟脂肪變性程度與模型組大鼠基本相當，而炎細胞浸潤程度較模型組程度輕。至實驗16周時，干預(yù)組大鼠肝脂肪變性程度明顯減輕，炎細胞浸潤基本消失。
2.3 不同組別大鼠肝臟ADRP的表達水平 與對照組相比，模型組大鼠肝臟ADRP的表達水平顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義（P
3 討 論
糖尿病是目前威脅人類健康的主要慢性病之一。糖尿病患者由于長期的高血糖，會出現(xiàn)多種并發(fā)癥，其中非酒精性脂肪肝較為常見。就機制而言，由于胰島素抵抗促進外周脂肪分解和高胰島素血癥使肝細胞發(fā)生脂肪變性，另一方面，氧化應(yīng)激引起肝細胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，甚至發(fā)生壞死和纖維化[4]，目前臨床治療NAFLD主要以改善胰島素抵抗，降低肝臟非酯化脂肪酸水平，改善氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，糾正促纖維化、促炎因子與抗纖維化、抗炎因子之間的失衡為主。二甲雙胍、他汀類及貝特類藥物雖然可以從不同角度改善肝臟的病變程度[5-7]，但副反應(yīng)也較為明顯，例如：二甲雙胍具有一定的心臟毒性和骨折風險。黃芪是我國傳統(tǒng)中藥較常用的一種，且黃芪具有毒副反應(yīng)小的特點，有研究報道黃芪對預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和進展具有重要作用。
本研究首先采用高糖高脂飼料和鏈脲佐菌素建立糖尿病非酒精性脂肪肝大鼠模型，通過對模型組大鼠血糖、TG和TC的檢測發(fā)現(xiàn)，模型存在明顯的脂代謝紊亂，肝臟病理切片證實脂肪變性發(fā)生，表明糖尿病NAFLD模型構(gòu)建成功。經(jīng)過4周黃芪注射液的治療，至實驗12周時，干預(yù)組大鼠血清血糖、TG和TC水平均低于模型組，但差異無統(tǒng)計學意義。肝臟病理學切片檢查顯示，干預(yù)組大鼠12周時肝臟脂肪變性程度與模型組大鼠基本相當，而炎細胞浸潤程度較模型組程度輕。至16周時，干預(yù)組大鼠血清血糖及TG水平明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義，且干預(yù)組大鼠肝脂肪變性程度明顯減輕，炎細胞浸潤基本消失，提示黃芪注射液早期通過減輕炎癥反應(yīng)對NAFLD大鼠肝臟起到一定的保護作用，并且隨著治療的進行，可延緩肝臟的脂肪變性進程。
脂肪分化相關(guān)蛋白是一種脂滴表面蛋白，在幾乎所有類型的哺乳類培養(yǎng)細胞中均有表達；在機體內(nèi)ADRP表達于脂肪組織、肝臟、肌肉、乳腺、胰腺、小腸黏膜等，在高脂飲食誘導的脂肪肝、非酒精性脂肪肝以及酒精性脂肪肝內(nèi)ADRP蛋白亦顯著增加[8，9]，研究表明能夠誘導肝內(nèi)TG增加的刺激均可增加肝細胞內(nèi)ADRP蛋白的表達，且ADRP含量與肝細胞內(nèi)脂質(zhì)含量呈正相關(guān)，所以ADRP被認為是肝臟脂質(zhì)蓄積的標記物[10]。本研究通過Western-blot檢測了大鼠肝臟ADRP蛋白的表達水平，結(jié)果顯示，與對照組相比，NAFLD大鼠肝臟ADRP水平顯著增高，經(jīng)黃芪注射液治療后，NAFLD模型肝臟ADRP的表達水平下調(diào)，說明黃芪注射液可減少肝細胞脂質(zhì)蓄積，減輕脂肪變性程度。
綜上所述，黃芪注射液可改善NAFLD大鼠血糖血脂代謝紊亂，減輕肝臟的炎癥反應(yīng)和變性，具有一定的肝臟保護作用。而其發(fā)揮作用的具體機制以及對人NAFLD的療效尚待進一步研究。
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