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1.干擾素:包括普通干擾素a和長效干擾素(聚乙二醇干擾素),只能用于轉(zhuǎn)氨酶升高的慢性乙肝和丙肝患者,不能用于高黃疸和嚴重肝硬化(失代償期)的乙肝或丙肝患者。2.核苷類抗病毒藥物:包括拉米夫定、阿德福韋和恩替卡韋,只能用于成年乙肝患者,不能用于兒童。這類藥物適應癥是用于治療乙肝病毒處于復制狀態(tài)的慢性乙肝患者,不能用于非活動性的病毒復制指標陰性的乙肝患者。這類藥物基本療程需1年以上時間,用藥期間決不能擅自停藥,否則有可能導致病情突然加劇。3.胸腺肽制劑:包括胸腺五肽、日達仙、邁普新等,這些藥物具有增強機體免疫功能的作用,但不能用于兒童乙肝患者。胸腺肽制劑極有可能影響和干擾兒童胸腺的正常發(fā)育,使其發(fā)生萎縮,日后帶來嚴重的免疫障礙。4.人血白蛋白:靜脈滴注速度不要超過每分鐘2毫升,尤其是剛開始的10分鐘內(nèi),應該特別注意緩慢滴注,逐漸加至每分鐘2毫升,以防過敏反應發(fā)生。5.各種丹參制劑:包括香丹注射液、丹參注射液、復方丹參注射液等,使用時必須使用5%~10%的葡萄糖注射液稀釋,不能用生理鹽水稀釋。該類制劑不宜與其它藥物在同一容器內(nèi)混合使用。6.還原型谷胱甘肽:老年患者使用時需要減少劑量。7.各種甘草酸制劑:包括甘利欣、美能、復方甘草酸苷等等,低血鉀、高血壓、心衰和腎衰患者禁用這類藥物。這類藥物與利尿劑同時使用時,容易造成低血鉀,應特別注意。
8.含硫類保肝藥物:包括甲硫氨酸、蛋氨酸、胱氨酸等,不能用于血氨升高的肝硬化患者或肝昏迷患者。 9.復合氨基酸制劑:富含芳香族氨基酸(酪氨酸、苯丙氨酸等)的復合氨基酸制劑,不能用于血氨升高的肝硬化患者或肝昏迷患者,否則可以導致或加重肝昏迷。血氨升高的肝硬化患者或肝昏迷患者,只能選用富含支鏈氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸等)的六合氨基酸制劑。
10.多烯磷脂膽堿注射液:嚴禁用電解質(zhì)溶液(生理鹽水、林格氏液等)稀釋,只能用5%~10%的葡萄糖注射液稀釋。
11.雙環(huán)醇:商品名百賽諾,用于治療各種慢性肝炎所致的轉(zhuǎn)氨酶升高,但是嚴重的肝病,如肝硬化腹水、重癥肝炎等慎用。
12.丁二磺酸腺苷蛋氨酸:商品名思美泰,用于肝硬化前和肝硬化所致的肝內(nèi)膽汁郁積。只有膽汁郁積情況存在,才能使用該藥。思美泰并非降黃的通用藥物。血氨升高或肝昏迷的肝硬化患者禁用該藥。
13.以下肝病常用藥物在輸液時需要緩慢點滴,控制滴速:氨基酸、甘草酸、多烯磷脂膽堿注射液、丁二磺酸腺苷蛋氨酸、復方丹參注射液、門冬氨酸鉀鎂、甘樂等。
14.注射用促肝細胞生長素:可用于各種重型肝炎的輔助治療,但是不適合用于輕度或中度的慢性肝炎。
15.茵梔黃和苦黃注射液:需要用5%~10%的葡萄糖注射液稀釋,不能用生理鹽水稀釋,否則會降低藥物有效的降黃成分。
16.注射用門冬氨酸尿氨酸:適合于治療各類肝病引起的高血氨癥及肝昏迷,但是腎功衰竭者禁用。該藥每天用量不能超過40克。
17.如果肝病患者同時患糖尿病,以下藥物禁用或慎用:亮菌口服液、注射用核糖核酸。
小兒發(fā)熱首選對乙酰氨基酚,對乙酰氨基酚解熱作用強,鎮(zhèn)痛作用較弱,作用緩和而持久,對腸胃刺激小。用法是1次10~15 mg/kg,一日分4~6次服用;或用阿司匹林,按兒童體表面積1.5 mg/m2,分4~6次服用,或1次5~10 mg/kg。阿司匹林吸收迅速而安全,解熱作用強,降低發(fā)熱者體溫,對正常體溫無影響;布洛芬具解熱鎮(zhèn)痛作用,抗炎作用,是此類藥物中對腸胃刺激最小的,用法是每次5~10 mg/kg,3次/d;5歲以下小兒高熱時可用20%安乃近溶液滴鼻,嬰兒每側(cè)鼻孔1~2滴,2歲以上兒童每側(cè)鼻孔2~3滴。使用退熱藥物需注意的是:退熱藥治標不治本,可能掩蓋病情,應密切觀察。發(fā)熱是人體一種保護性反應,體內(nèi)抗體增多有利于炎癥修復,但發(fā)熱消耗體力,體溫驟降容易引起虛脫,應嚴格掌握用量。注意兩次用藥間隔時間(4~6 h),多飲水,為避免胃腸刺激,宜在飯后服用。不能同時服用兩種以上藥物,避免對肝、腎刺激。用藥時間不超過3 d,發(fā)熱時控制飲食,多喝水、果汁,高熱患兒用冰袋或涼毛巾冷敷,或用50%酒精擦拭四肢、胸背、頭頸部,注意休息,保證睡眠,室內(nèi)空氣保持通暢。
小兒感冒初始階段,如流涕、咽痛、聲音嘶啞,服用美撲偽麻、酚麻偽敏、氨酚偽麻等制劑。伴有咳嗽服用美酚偽麻、雙酚偽麻、美息偽麻等。流感一般高熱,服用退熱藥外,還要服用金剛烷胺制劑抗病毒藥物,如復方氨酚烷胺咖敏膠囊、復方氨酚烷胺膠囊。緩解鼻塞癥狀,用奈甲唑啉滴鼻劑。服用感冒藥注意事項:抗生素對感冒和流感病毒無作用,但感冒時,病毒在咽部繁殖引起咽炎,在肺部繁殖引起肺炎,并發(fā)細菌感染時服用抗生素,如氨芐西林、頭孢氨芐、紅霉素、阿奇霉素等。感冒病程多在1周左右,無嚴重癥狀者可不用或少用藥物,多喝水,注意休息。感冒藥物連服不得超過7 d,服用劑量不得超過推薦量,一周后未緩解,應去看醫(yī)生。
腹瀉是小兒常見病,痢疾、大腸埃希菌感染的急性腹瀉,癥狀是膿血便,里急后重,腹痛,首選黃連素。1歲以下1次0.05 g,1~3歲1次0.05~0.1 g,4~6歲1次0.1~0.15 g,7~9歲1次0.15~0.2 g,10~12歲1次0.2~0.5 g,3次/d。由于外界刺激引起激惹性腹瀉,癥狀多為水便,伴有糞便顆粒,下瀉急促,伴有腸鳴音,腹痛劇烈,選用思密達、蒙脫石,1歲以下每日1袋,2~3歲每日2~3袋,3歲以上每日3袋,分3次服用。消化不良引起的腹瀉證見黃綠色,嬰兒糞便混有奶瓣,服用胰酶制劑。服用腹瀉藥物注意事項:腹瀉可致鉀離子丟失,注意補充鉀鹽、水、電解質(zhì);藥用炭(思密達、蒙脫石)可影響兒童營養(yǎng)吸收,3歲以下兒童長期腹瀉或腹脹禁用,藥用炭不易與維生素、抗生素、生物堿、乳酶生及各種消化酶同時服用。
便秘也是小兒常見病,低張力性便秘(腸肌、腹壁、膈肌張力無力,通常是軟便,大便時間較長),用開塞露1次5~10 ml,注入,深度距口3~6 cm。急性便秘,用硫酸鎂,可單獨使用,或配伍山梨酸和甘油,1次每周歲 1 g,同時大量飲水。便秘用藥注意事項:兒童不易用緩瀉藥,可造成緩瀉藥依賴性便秘,一旦緩解,應停用,一般用藥不超過7日。硫酸鎂應在清晨空腹服用,需大量飲水,排便反射減弱引起腹脹時,應停止使用。
小兒生長發(fā)育階段,用藥遵循以下幾點:
①用藥及時,用量宜輕。小兒得病急,變化快,因此用藥要及時,由于小兒臟腑嬌嫩,用量宜輕;
②宜用清輕之品。對大辛、大寒、大熱及攻伐藥物、猛烈藥物要慎用,如必須使用,量要少,中病即止;
③小兒脾氣不足,消化能力差,宜用健脾和胃藥物;
【關鍵詞】 細胞株
Effect of Aminopeptidase Inhibitor on Differentiation Induction Activity of All-trans Retinoic Acid in Human Acute Promyelocytic Leukemia NB4 Cells and Its Mechanism
Abstract
This study was purposed to investigate whether aminopeptidase inhibitor,bestatin,can potentiate all-trans retinoic acid (ATRA)-inducing differentiation in NB4 cells,and to explore its mechanism. The NB4 cells were exposed to either bestatin and ATRA alone or in combination,the morphological changes of NB4 cells were observed by optical microscopy,the CD11b expression was measured by flow cytometry,the function of defferentiation cells was analyzed by nitroblue-tetrazolium (NBT) reduction assay,the mRNA expressions of c-myc and c-EBPε in NB4 cells were detected by RT-PCR,the c-Myc protein expression was determined by Western blot. The results showed that treatment with bestatin alone induced no significant changes in morphology,NBT reduction activity and CD11b expression in NB4 cells. NB4 cells incubated with 10 nmol/L ATRA plus 100 μg/ml bestatin showed more morphologic feature of metamyelocyte and band neutrophil than ATRA alone treated cells. 100 μg/ml bestatin enhanced the NBT reduction activity in NB4 cells induced by various concentrations of ATRA (10,20,40 nmol/L). The effects of various concentrations of ATRA in combination with 100μg/ml bestatin were statistically different from the effect of ATRA alone (P
Key words bestatin; ATRA; cell line,NB4; differentiation
氨肽酶抑制劑烏苯美司(bestatin)能抑制氨肽酶N/CD13和亮氨酸氨基肽酶活性,通過增強宿主免疫功能及誘導腫瘤細胞凋亡等發(fā)揮抗腫瘤作用[1,2]。有研究提示,bestatin能夠誘導U937細胞的分化[1],國內(nèi)未見報道。我們以NB4細胞為研究對象,通過形態(tài)、功能和表面分化抗原等多層次實驗研究,了解bestatin是否能誘導NB4細胞分化及(或)對ATRA的誘導分化作用的增強效應,并初步探討其可能的機理。
材料和方法
主要試劑
Bestatin、ATRA均購于Sigma公司。bestatin以無菌去離子水溶解為1 mg/ml,分裝之后-20℃保存;ATRA以無水乙醇溶解成10-5 mol/L的儲存液,4℃避光保存,使用時用RPMI 1640細胞培養(yǎng)液將其稀釋為相應工作濃度。NBT為BBI公司產(chǎn)品,以PBS配成0.1%溶液,過濾除菌后4℃避光保存,使用前1周內(nèi)配制。RPMI 1640為Gibco公司產(chǎn)品。胎牛血清為JRH公司產(chǎn)品。CD11b-FITC標記單克隆抗體為Teotech公司產(chǎn)品。CD13-PE標記單克隆抗體為Becton Dickinson公司產(chǎn)品。TRIzoL試劑為Gibco公司產(chǎn)品,M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq DNA合成酶為Promega公司產(chǎn)品。鼠抗人c-Myc單克隆抗體(c-33)及羊抗人β-Actin多克隆抗體(I-19)均為Santa Cruz公司產(chǎn)品,使用時以TBST液分別按1∶500和1∶1 000稀釋。ECL顯色液為Santa Cruz公司產(chǎn)品。
細胞培養(yǎng)及藥物處理
人APL細胞株NB4細胞(浙江大學腫瘤研究所惠贈)及人髓細胞白血病細胞株HL-60細胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI 1640細胞培養(yǎng)液中,置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),2-3天傳代1次。實驗時取對數(shù)生長期的細胞,調(diào)整細胞密度為7×104/ml,以不同濃度ATRA和bestatin單獨或聯(lián)合處理,于不同時間收集細胞進行實驗。
細胞形態(tài)學觀察
取空白對照組及藥物處理各組細胞懸液,離心,制備涂片,瑞氏-姬姆薩染色,用光學顯微鏡(Leica,40×10)觀察細胞形態(tài)。
四氮唑藍(nitroblue-tetrazolium,NBT)還原實驗
按文獻[3]報道的方法進行??瞻讓φ战M及藥物處理各組細胞與NBT共孵育后,制備涂片,瑞氏-姬姆薩染色,光學顯微鏡下(100×10)觀察,胞漿內(nèi)含有藍黑色顆粒者為陽性細胞,隨機計數(shù)200個細胞,計算陽性細胞百分率。
細胞表面分化抗原CD11b和CD13的檢測
取對數(shù)生長期HL-60細胞和NB4細胞或藥物處理后各組NB4細胞離心,用PBS(pH 7.4)洗滌,調(diào)整細胞數(shù)為2×105/50 μl,加CD13-PE標記單克隆抗體8 μl或CD11b-FITC標記單克隆抗體5 μl,避光孵育30分鐘,用PBS洗滌,上流式細胞儀檢測。以Cellquest 1.2軟件進行分析。
細胞總RNA提取和RT-PCR反應
總RNA提取 用TRIzoL一步法抽提細胞總RNA,按試劑說明書操作。甲醛變性凝膠電泳證實為完整RNA,紫外分光光度儀定量,A260 nm/280 nm比值均在1.8-2.0之間。
逆轉(zhuǎn)錄反應
樣品總RNA 4 μg及隨機引物0.5 μg,70℃ 5分鐘,立即冰浴,離心。依次加5×逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液5 μl、10 mmol/L dNTP 1.25 μl、M-MLV 200 U,RNase抑制劑0.6 μl,DEPC水補至反應體積為25 μl,于27℃10分鐘,37℃ 60分鐘,72℃ 10分鐘滅活逆轉(zhuǎn)錄酶,冰浴1分鐘,結束反應。
PCR反應
PCR引物為上海Sangon公司合成。引物序列、反應條件及產(chǎn)物大小見表1。反應體系包括逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2 μl、10×PCR緩沖液2.5 μl、25 mmol/L MgCl2 1.5 μl、10 mmol/L dNTP 0.5 μl、25 μmol/L(c-myc與c-EBPε)或2.5 μmol/L(β-actin)上游及下游引物各0.5 μl、Taq DNA聚合酶1U,用滅菌去離子水補至終體積為25 μl。預實驗確定產(chǎn)物與循環(huán)之間呈線性關系范圍。取5 μl反應產(chǎn)物在15 g/L瓊脂糖凝膠(含0.5 μg/ml溴化乙錠)電泳,電場強度5 V/cm,紫外燈下觀察電泳結果,用凝膠成像系統(tǒng)(BIO-RAD公司)掃描分析條帶灰度,以目的基因與β-actin的灰度比做半定量分析。Table 1. Sequences of primers,condition of PCR and sizes of PCR products(略)
Western blot
收集藥物處理各組細胞(細胞數(shù)為2×106/ml),預冷的PBS漂洗2次,重懸于100 μl Lammiulis上樣緩沖液(0.125 mmol/L Tris-HCl,pH 6.8,4%SDS,5%甘油)中,超聲波裂解,于4℃離心13 000×g)15分鐘,收集上清,蛋白樣品保存于-80℃。按蛋白定量試劑盒(Bio-Rad公司)操作說明書進行蛋白定量,在10%聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)移后的硝酸纖維素膜以5%脫脂奶粉封閉1小時,分別與抗人c-Myc和抗人β-actin抗體及辣根過氧化酶標記的二抗孵育。ECL顯色,顯影于膠片。圖像分析處理系統(tǒng)(Image Station 2000R)掃描,測定條帶的面積和灰度,以二者之乘積進行半定量比較分析。
統(tǒng)計學分析處理
各項實驗重復3次以上,以X±D表示,多組間比較F檢驗后采用方差分析及Tukey檢驗。相關分析采用Pearson相關。應用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
結果
NB4細胞表面有CD13的表達
NB4細胞CD13陽性表達率為94.79%(平均熒光強度為1739.59),對照組HL-60細胞CD13陽性表達率為95.49%(平均熒光強度為3107.49)。兩者的CD13平均熒光強度有一定的差異,但陽性百分率差異不明顯。
Bestatin與ATRA聯(lián)合處理后NB4細胞形態(tài)改變明顯
100 μg/ml bestatin單獨作用72小時后,NB4細胞形態(tài)無明顯改變。10 nmol/L ATRA單獨作用72小時后,NB4細胞呈現(xiàn)部分分化的形態(tài),細胞核/漿比例減小,核變小有凹陷。100 μg/ml bestatin與10 nmol/L ATRA聯(lián)合處理72小時后,NB4細胞形態(tài)分化更加明顯,細胞漿內(nèi)空泡增多,核凹陷、扭曲更加明顯,形態(tài)似晚幼粒及桿狀核粒細胞的細胞增多(圖1)。
Bestatin與ATRA聯(lián)合應用后NB4細胞NBT還原能力明顯增加
以一定濃度(50、75和100 μg/ml)bestatin單獨處理72小時后,NB4細胞的NBT還原能力無明顯改變(與空白對照組相比較,P>0.05);不同濃度(10、20和40 nmol/L)ATRA作用72小時后,NB4細胞的NBT還原能力呈濃度依賴性增加,與空白對照組相比,差異明顯。100 μg/ml bestatin與不同濃度ATRA聯(lián)合處理72小時后,NB4細胞的NBT陽性率明顯地提高,與單用相應濃度ATRA組相比,差異顯著(表2)。Table 2. Effect of bestatin on the NBT reduction activity of NB4 cells induced by ATRA. (略)
100 μg/ml bestatin單獨處理細胞不同時間(48小時-96小時),NB4細胞的NBT還原能力改變不明顯(與相應時間點空白對照組相比,P>0.05);10 nmol/L ATRA處理細胞至72小時,開始出現(xiàn)NB4細胞NBT還原能力的增強,并呈時間依賴性,與相應時間點對照組相比,有明顯差異;而10 nmol/L ATRA與100 μg/ml bestatin聯(lián)合處理48小時,就出現(xiàn)NB4細胞NBT還原能力的明顯增強,且此作用隨時間延長而明顯增強,與相應時間點單用10 nmol/L ATRA組相比,差異顯著(圖2)。
Bestatin與ATRA聯(lián)合處理后NB4細胞CD11b表達明顯增強
100 μg/ml bestatin單獨處理72小時后,NB4細胞CD11b陽性表達率(MFI為13.4±0.6)稍有增加,但與對照組(MFI為12.3±0.9)相比,差異不顯著(P>0.05)。10 nmol/L ATRA單獨處理72小時之后,NB4細胞CD11b陽性表達率(MFI為19.2±4.2)明顯提高,與對照組相比,差異顯著(P
Bestatin和ATRA單獨及聯(lián)合處理后NB4細胞c-EBPε mRNA表達的變化
NB4細胞低表達c-EBPε mRNA。10 nmol/L ATRA處理12小時之后,NB4細胞c-EBPε mRNA表達水平明顯提高,與對照組相比較,差異顯著(P
Bestatin和ATRA單獨及聯(lián)合處理后NB4細胞c-myc表達的變化
NB4細胞c-myc mRNA呈高水平表達。10 nmol/L ATRA單獨處理4小時后,NB4細胞c-myc mRNA表達下降,與空白對照組相比較,差異明顯(P
Figure 4. Effect of bestatin and ATRA on the expression of c-myc mRNA of NB4 cells after treatment for 4 hours. M: marker; Lane 1: control. Lane 2: bestatin (100 μg/ml). Lane 3: ATRA (10 nmol/L). Lane 4: bestatin (100 μg/ml) +ATRA (10 nmol/L).
NB4細胞c-Myc蛋白呈高表達。10 nmol/L ATRA單獨處理8小時后,NB4細胞c-Myc蛋白表達水平明顯下降(P
討 論
ATRA對APL的有效治療是白血病誘導分化治療的成功典范。但單用ATRA治療易復發(fā)及產(chǎn)生耐藥,與其他化療藥物聯(lián)用時療效有一定的提高,但毒副反應增加。因此,尋找能夠增強ATRA誘導分化作用而毒副反應輕的藥物,成為臨床治療中的關注問題之一[7,8]。最近,Hirano等[7]根據(jù)NBT還原實驗結果提出,bestatin可能增強ATRA對NB4細胞的誘導分化作用,但未做進一步的研究。本研究通過對細胞形態(tài)、功能和表面分化抗原等多層次的檢測及分析對比,表明一定濃度范圍的bestatin本身不能誘導NB4細胞分化,但確能增強ATRA對NB4細胞的誘導分化作用。
Hirano等[7]認為,bestatin增強ATRA誘導分化作用可能與其抑制細胞表面CD13活性有關。本研究結果顯示,與HL-60細胞相似,NB4細胞表面CD13陽性表達率高達94.79%,該藥是否通過抑制CD13表達從而增強ATRA誘導NB4細胞分化的作用,尚待進一步研究證實。髓系祖細胞定向分化受轉(zhuǎn)錄因子活性的調(diào)節(jié)。ATRA調(diào)節(jié)與髓細胞定向分化有關轉(zhuǎn)錄因子的表達誘導APL細胞向中性粒細胞分化。氨基肽酶N/CD13為Ⅱ型跨膜蛋白,胞內(nèi)端只有8-10個氨基酸,但最近研究報道,CD13分子能夠直接參與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導的過程[9]。因此,本研究從藥物對轉(zhuǎn)錄因子影響的角度對氨肽酶、抑制劑bestatin增強ATRA誘導分化作用的可能機制進行了初步探索。c-EBPε為C-EBP家族轉(zhuǎn)錄因子之一,ATRA誘導NB4細胞向中性粒細胞方向分化時,藥物作用2小時,c-EBPε mRNA表達水平即開始增高,并持續(xù)增高至細胞終末分化[10]。而酪氨酸激酶抑制劑STI571增強ATRA誘導NB4細胞向中性粒細胞分化時,c-EBPε基因及蛋白的表達水平均未進一步增高[8]。本研究結果顯示,10 nmol/L ATRA處理12小時后,NB4細胞c-EBPε mRNA表達水平明顯上升,而100 μg/ml bestatin與ATRA聯(lián)合處理NB4細胞時,c-EBPε mRNA表達卻未進一步增強。這提示bestatin可能與STI571相似,其增強ATRA對NB4細胞的誘導分化作用可能不是通過調(diào)節(jié)c-EBPε表達。
原癌基因c-myc表達異常與髓細胞性白血病的發(fā)生有關,抑制c-myc表達可以促使白血病細胞分化及誘導細胞終末分化后的凋亡。本研究結果顯示,10 nmol/L ATRA單獨作用能夠使NB4細胞c-myc的表達下調(diào),這與文獻報道相似[11]。同時,bestatin與ATRA聯(lián)合應用時c-myc表達水平的下調(diào)作用較單用ATRA時更加明顯,且藥物聯(lián)合應用各組細胞的c-myc蛋白表達水平與藥物誘導的NBT還原能力之間呈明顯的負相關。這提示bestatin可能通過與ATRA協(xié)同下調(diào)c-myc表達,從而增強ATRA誘導NB4細胞分化的作用。1,25-(OH)2 D3在誘導HL-60細胞分化時,激活蛋白激酶C,引起c-myc表達下調(diào)[12]。bestatin是否也通過激活蛋白激酶C增強ATRA下調(diào)c-myc的表達,這有待進一步研究證實。
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中圖分類號:R969.3 文獻標識碼:B 文章編號:1005-0515(2011)4-242-02
胰島素是治療糖尿病的主要藥物之一,正確應用胰島素對糖尿病病人病情治療的轉(zhuǎn)歸非常關鍵,護理人員應指導患者正規(guī)使用胰島素?,F(xiàn)將使用胰島素的注意事項介紹如下:
1 胰島素的貯存
1.1 未開始使用的胰島素應放在2℃-8℃冰箱冷藏,可保存2年半。
1.2 已開始使用的可在室溫≤25℃最長保存4周。諾和銳可在30℃保存4周。建議胰島素開始使用后放在清潔,干燥2℃-8℃的冰箱避光保存。
1.3. 胰島素開啟使用至4周不能使用。
2 胰島素注射注意事項
2.1 抽吸胰島素應先抽吸短效,再抽長效,然后輕輕搖勻,不可反向操作。
2.2 注射時應接近室溫,以免過低溫度造成注射時的不適感。
2.3 用酒精消毒注射部位,應等完全揮發(fā)后注射,否則會引起注射部位疼痛。
2.4 應用正確方法注射,用左拇指和示指捏起皮膚,右手持注射器與皮膚45°~60°角方向,迅速刺入,抽無回血后注射。
2.5 使用胰島素筆完成注射時,應等待15秒后再將針頭拔出,以免漏液。
2.6 注射完成后應立即將針頭從注射筆上取下,以免空氣進入藥液造成細菌進入筆芯污染藥物。
2.7 注射完胰島素的部位應避免激烈運動,防止胰島素過快吸收至低血糖。
2.8 針頭每次更換,以減輕疼痛,防止折斷。避免皮下組織增生,硬塊形成。
2.9 每次注射時,應先評估注射部位,如果感覺有腫塊或表皮凹陷,應避免注射。
2.10 注射完畢,用棉簽輕壓穿刺點,切勿按摩局部。
3 胰島素的不良反應及處理
3.1 低血糖反應:(1)原因:注射后未及時進食或進食量不足;注射劑量過大;運動不規(guī)則。(2)癥狀:心慌,顫抖,出汗,饑餓,心率加快等。(3)處理:立即測血糖;補充碳水化合物:5-6塊硬糖,2湯勺蜜糖,1/3杯果汁,一片面包,一杯脫脂奶或其它含糖小食品;盡量避免低血糖發(fā)生。
3.2 胰島素過敏:局部表現(xiàn)為注射后半小時~1小時,出現(xiàn)局部腫脹,發(fā)熱發(fā)癢,硬結甚至水皰,一般24小時消退。處理:應用安爾典局部消毒,嚴禁熱敷。
全身過敏反應:多見于使用動物胰島素。處理:更換純度高制劑。
3.3 注射部位皮下脂肪萎縮或纖維組織增生:由于胰島素長期刺激皮下脂肪增生肥大或萎縮引起,影響胰島素的正常吸收和療效發(fā)揮。處理:注射部位輪換,同一部位2周內(nèi)不得注射2次,每個注射點相隔至少2厘米。注射后局部運動可促進吸收。
設備使用注意事項:1、烤箱使用完要及時清潔,以免設備產(chǎn)生異味,可以使用專用清潔劑操作,可以延長使用壽命。
2、烤箱工作時不要移動它,不要徒手拿出食物,以免燙傷,烤箱需要放置在平整的桌面上使用,以免影響設備使用體驗。
3、烤箱無法使用,可能是沒有通電,可以檢查電源連接狀態(tài);可能是設備硬件故障,建議斷電后請專業(yè)人員維修。
4、烤箱有不同的功率,可以根據(jù)使用需求選購。
【摘要】:通過對醫(yī)院血液化驗前的提取準備工作,化驗過程中的注意事項以及化驗完成后的化驗單管理進行探討,提出一些有效的辦法,希望能幫助血液化驗工作者解決一些問題。
【關鍵詞】:血液 化驗 問題 探討
1 前言
一些病人在診斷病情時往往要進行血液化驗。人體的各個部位都充滿著血液,血液流通與人體組織的各個器官,可以說,沒有血液的循環(huán),人的生命將停止。一些血液細胞的增殖或變異使得血液的循環(huán)不在正常,人體的某個器官會出現(xiàn)這樣那樣的癥狀。因此血液不僅反映人體系統(tǒng)本身的生理、病理變化,更能反映全身有關臟器的病理改變。隨著醫(yī)學技術的進步與發(fā)展,病人通過對自身血液化驗,不僅可以有效的診斷出血液是否正常,并且還可幫助診斷其他器官的一些疾病。血液化驗的范圍包括血細胞數(shù)量的檢驗和形態(tài)觀察、貧血化驗、出血性疾病化驗、血型及配血試驗等。我國的醫(yī)學化驗工作目前取得很大進步,血液檢驗逐步實現(xiàn)了自動化,各種檢驗儀器與電腦設備逐步替代了傳統(tǒng)的化驗手段。通過對醫(yī)院血液化驗前的提取準備工作,化驗過程中的注意事項以及化驗完成后的化驗單管理進行探討,提出一些有效的辦法,希望對醫(yī)學化驗工作者有所幫助。
2 血液樣本提取時注意的事項
血液化驗工作的前提是保證血樣標本的質(zhì)量。因此,在進行血樣采集前,應讓血樣檢驗者做好準備工作,要注意采血前空腹,穿寬松的衣服以避免采血后血管膨脹,采血前避免做劇烈的運動等。醫(yī)護人員要選擇恰當?shù)牟裳课唬话阍谌訒r都選取靜脈血,對于新生兒或燒傷患者可采取末梢毛細血管采取血樣。血樣采集完后加入的抗凝劑要嚴格科學的控制比例,降低環(huán)境因素對血樣質(zhì)量的影響。血樣存儲的時間不能太長,要注意采取科學的儲存措施。對于一些疾病患者,在采樣時要采取保護措施,防止病毒的傳播等。
3 化驗過程中注意事項
為了節(jié)省化驗時間,提高化驗的效率,我國大部分醫(yī)院已經(jīng)普及使用了血細胞分析儀,新儀器的使用固然大大提高了工作效率,但也會產(chǎn)生一些新的問題,下面將對新問題進行探討并提出解決方案。
3.1 保持化驗室環(huán)境衛(wèi)生
血液化驗工作要求十分嚴格,細菌等雜質(zhì)的滲入將嚴重影響化驗結果。因此化驗室應始終保持整潔衛(wèi)生;為了保證血樣不變質(zhì),還要保持充足的照明和恒定的室溫;各項檢驗區(qū)應劃分明確,并且應標有明確的標識,以區(qū)分各區(qū)的功能和化驗項目;水浴箱應保持恒定的實際溫度,同時還必須滿足血液化驗所需的反應溫度;試劑儲存冰箱、血液標本儲存冰箱的溫度計應為校準合格的記錄計,每天上午應檢查和記錄冰箱的溫度各一次;化驗用水必須使用符合標準要求的蒸餾水。
3.2 選擇符合規(guī)定的血液化驗試劑
進行血液化驗時所使用的試劑,必須符合相關規(guī)定的要求,還必須經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢定合格,貼有防偽標簽,按照正確的方式運輸和貯存,經(jīng)本單位質(zhì)量管理科檢驗合格,并在有效期之內(nèi)。從冰箱取出的檢驗試劑,必須放在室溫(25攝氏度)下充分平衡之后才能使用。不同試劑不能混用,同種試劑不同批號不能混用。酶聯(lián)免疫試劑的酶標板框架要規(guī)整,微孔條要平整,微孔內(nèi)不能有塑料屑、泡沫渣、干燥劑顆粒等固型異物。
3.3 對血細胞分析儀校準
血細胞分析儀的檢測結果是否準確對疾病的診斷和治療監(jiān)測有直接的影響。在儀器精密度良好的前提下,儀器校準是保證檢測結果準確的關鍵步驟,所以,進行血液化驗所使用的每臺儀器,均必須經(jīng)過校準后才能投入使用。若經(jīng)校準后發(fā)現(xiàn)達不到使用要求,則需請維修人員及時檢修并再次校準,待校準結果滿足使用要求后方可投入使用。一般在下列幾種情況下需對儀器進行校準:血細胞分析儀投入臨床使用前;更換部件或進行維修后;室內(nèi)質(zhì)量控制系統(tǒng)的檢測結果又漂移時;規(guī)定要求每6個月至少進行一次校準。
3.4 加強工作人員培訓工作
在使用血細胞分析儀進行血液化驗時,操作人員必須經(jīng)過規(guī)范地培訓,并且要了解儀器的工作原理;了解直方圖或二維散點圖的原理和特點;了解異常警報的含義,并能做出相應處理;了解儀器的檢測系統(tǒng)和溯源性,掌握校準的方法;了解儀器的保養(yǎng)要求;熟悉使用中的注意事項并能排除小故障。
3.5 認真檢查化驗標本
在血液樣本進行化驗前,要經(jīng)過認真的逐一檢查,一旦發(fā)現(xiàn)不合格的樣本,包括溶血、凝血等,不能送至化驗室化驗。要及時通知被檢驗人,重新對其按上述過程采取血樣標本,經(jīng)檢查合格后才可繼續(xù)化驗,這樣可以保證化驗結果的準確性。
4 血液化驗單的管理
4.1 化驗單的保管
檢驗科做好血液檢驗工作后,要及時把化驗報告單送至門診咨詢臺,門診咨詢臺護士負責保管與發(fā)放。由于化驗結果多種多樣,日期也參差不齊,因此管理人員可按照一定的管理方法進行管理,制作簡易的專用的化驗單保管夾子,對化驗的報告單按時間順序依次整理保管,便于查詢;另外,還可根據(jù)診斷病情的相似性進行分類管理,這將大大節(jié)約血液化驗單的查找時間,提高工作效率。
4.2 化驗單的發(fā)放
由于化驗單關系病人的隱私以及癥狀,發(fā)放錯誤很容易產(chǎn)生糾紛,因此在發(fā)放化驗單時,病人須出示原始病歷,值班醫(yī)護人員要進行認真的核對,一些原始化驗單的發(fā)放更為嚴格謹慎。發(fā)放完成后要做標記。
4.3 化驗單整理
對沒有領取的化驗單護士要進行定期的整理,一般三個月整理一次。整理時要做好分類工作,按照時間順利收藏好。
加強醫(yī)院化驗單的管理工作,對化驗工作的完成起著很重要的作用。化驗單的科學管理既保證了血標本的正確采集和按時送檢,根據(jù)診斷病情的相似性進行分類管理,這將大大節(jié)約血液化驗單的查找時間,提高工作效率。對一些特殊病例的化驗保護措施,可減少不必要的交叉感染。
5 結語
總之,醫(yī)院的化驗工作對病情的調(diào)查起著至關重要的作用,醫(yī)院的化驗工作著要擔負起自己肩負的責任,做好醫(yī)院血液的化驗工作,輔助其他醫(yī)學工作者正確判斷病人的癥狀,對病人的正確科學治療將起到很大的作用,最終可以提高醫(yī)院的信譽與效益。
參考文獻
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(1)不規(guī)范的操作:①無菌操作意識不強,接種人員操作中不戴口罩。②接種部位消毒不規(guī)范:消毒范圍小,掃把式的消毒,消毒區(qū)用手觸及,容易引起醫(yī)源性注射感染,發(fā)生不良后果,引發(fā)接種糾紛。③接種部位不正確和接種途徑不妥:每種疫苗的接種部位和途徑均有嚴格的要求,實施接種的護理人員,一般不得任意改變接種部位和接種途徑,否則易引發(fā)接種不良反應和接種事故,如皮下注射接近肘關節(jié)處會使局部紅腫反應加劇,注射部位過高,接近三角肌上方,或過于接近上臂內(nèi)側(cè),常可引起腋下淋巴結腫脹,乙肝疫苗注射于臀部,影響藥物的吸收,皮下注射于右三角肌,會引起1周內(nèi)疼痛。④疫苗劑量過大:可能引起機體發(fā)生較強烈的局部反應和全身反應,甚至造成接種事故,如2人份的麻疹疫苗當1人份來注射;或選用不恰當?shù)淖⑸淦鞒槿《嗳说囊呙纾斐梢呙鐒┝坎粶蚀_。⑤用錯疫苗:錯誤地將一種疫苗視為另一種疫苗而使用,以致造成嚴重后果。⑥疫苗使用前未充分搖勻:如含有吸附的百白破疫苗在使用前未充分搖勻,可能引起接種反應或加重反應。⑦對使用中的疫苗管理不當:未用完的疫苗存放超過規(guī)定的時間,暴露在空氣中容易被細菌污染,接種這種疫苗將會造成嚴重后果。⑧接種后未進行正確的指導:如服脊髓灰質(zhì)炎糖丸后半小時內(nèi)喂奶,致使疫苗無效;卡介苗接種后未告知家長出現(xiàn)膿皰是正常反應,致使家長認為消毒不嚴所致的化膿反應,將膿皰挑破。
(2)對接種兒童管理不到位:對接種兒童固定不當,有些兒童因害怕打針難以主動配合完成接種工作,在注射過程中亂動,針在體內(nèi)移動或脫出,容易造成損傷或重注;接種后沒按要求讓接種對象在接種現(xiàn)場觀察30分鐘,若發(fā)生不良反應不能及時處理。
(3)冰箱的管理情況:未按要求監(jiān)測冰箱溫度,不能及時了解冰箱是否在正常運作,疫苗能否在規(guī)定的溫度內(nèi)保存;冰箱中混雜存放私人物品;違反疫苗專柜放置的原則。
(4)無菌注射器的存放情況:一次性無菌注射器與非無菌物品混放,違反無菌物品的放置原則。
(5)搶救藥品管理情況:搶救藥品與非搶救物品混放;搶救藥品過期。
(6)對使用后的一次性注射器處理不當:手工分離使用后的注射器針頭與針管,容易發(fā)生針刺傷;使用后的注射器及醫(yī)療垃圾在室內(nèi)留時間過長,影響接種環(huán)境,也可能影響安全注射。
預防接種護理風險的防范措施
①嚴格執(zhí)行消毒隔離制度:按要求嚴格消毒接種部位,用75%酒精由內(nèi)向外螺旋式對接種部位皮膚進行消毒,涂擦直徑≥5cm,待干后再接種,這樣可避免消毒劑殺死活疫苗。②掌握正確的接種方法,正確合理的使用疫苗:接種人員必須明確各種疫苗的性質(zhì)、接種對象、途徑、部位、劑量、禁忌證及注意事項,接種前詳細閱讀疫苗說明書,嚴格遵照規(guī)定注射,以免人為因素而發(fā)生異堂反應或造成接種事故。③嚴格執(zhí)行三查七對制度:接種前嚴格核對疫苗的名稱,并充分搖勻,認真核對接種兒童姓名、年齡、接種單與疫苗接種證內(nèi)容是否相符,接種后交代可能出現(xiàn)的不良反應及有關事項。④加強疫苗的管理:使用前認真檢查疫苗的質(zhì)量,檢查外觀質(zhì)量。凡過期、變色、內(nèi)有搖不散的凝塊,標簽不清、安瓶有裂縫的疫苗或凍結過的DPT、HepB,一律不得使用。對安瓶開啟后未用完的疫苗蓋上無菌棉球冷藏,并記錄開啟的時間,活疫苗超過半小時,滅活疫苗超過1小時,應將疫苗廢棄。⑤做好接種兒童的管理:接種前護理人員以和藹的語言引導兒童,減輕兒童恐懼心理和緊張情緒,以主動配合接種;對于不配合的兒童,指導家長固定兒童的正確方法,避免在注射過程中亂動,使接種順利完成。接種后應告知家長,受種者應留在接種現(xiàn)場觀察30分鐘。如出現(xiàn)異常反應,及時處理和報告。⑥做好健康教育,減少醫(yī)療糾紛:耐心講解預防接種目的和重要性,講解預防接種的程序、注意事項以及可能發(fā)生的不良反應及處理措施,避免糾紛的發(fā)生。如注射DPT的局部紅腫與發(fā)熱反應的程度隨著接種次數(shù)的增加而加重。個別兒童接種疫苗后,接種部位出現(xiàn)輕微紅腫、疼痛,低熱等。個別反應較重者應及時到防疫站門診或醫(yī)院就診。⑦加強冷鏈設備的管理:冷鏈設備專物專用,專人管理,并保持清潔,每日監(jiān)測冷鏈溫度2次,每季對冰箱進行1次全面保養(yǎng),每年對冰箱的性能進行1次全面檢驗和測試,建立冷鏈設備維修檔案和維修記錄。⑧規(guī)范搶救藥品和無菌注射器的管理:搶救藥品做到專柜放置,藥物針劑盒內(nèi)外要一致,藥品標簽要保持清楚,并實行專人管理,每月質(zhì)控,使搶救藥品在有效期內(nèi),以防偶有過敏反應發(fā)生時使用。無菌注射器存放在清潔干燥,距地20cm的柜里,專柜放置,并按日期先后順序排列,采用先領先用的原則,確保無菌注射器在有效期內(nèi)使用,保證安全接種。⑨嚴格執(zhí)行無菌操作,做好安全注射:預防接種應在清潔、通風、寬敞的環(huán)境進行,疫苗接種室應安裝空氣消毒機,每天消毒2次,每次1小時,不定期進行接種環(huán)境的消毒效果監(jiān)測。實行垃圾的分類管理,生活垃圾存放于黑色膠袋中,醫(yī)療垃圾存放于有標識的黃色膠袋中,使用后的銳利針頭、安瓶放在利器盒內(nèi)。不應手工分離使用后的注射器針頭和針管,避免被針頭誤傷,每天把醫(yī)療垃圾和利器盒回收,嚴格按照《醫(yī)療廢物處理條例》的規(guī)定處理。
討 論
冰箱檔位7檔比1檔涼。冰箱的七個檔位之中,檔位的數(shù)字越大,它對應的溫度就越低,反之則越高,而且這個數(shù)字指的并不是具體的溫度,而是一個溫度范圍。之所以會有這個溫度檔位的存在,是因為冰箱的溫度要根據(jù)季節(jié)變化來調(diào)節(jié),實質(zhì)上是冰箱的工作時長與耗電程度受環(huán)境溫度影響,所以需要根據(jù)環(huán)境的溫度來調(diào)節(jié)不同檔位。
一般來說,夏季冰箱的檔位要調(diào)到2-3這個檔位之間,而冬季則調(diào)整到5-7這個檔位之間,至于春秋這兩個季節(jié),保持在中檔位即可。這樣做的目的在于盡可能的減小空調(diào)內(nèi)部溫度與環(huán)境溫度之間的溫度差,這樣冰箱能更節(jié)省耗電,也不易損壞冰箱壓縮機,可以很好的延長使用壽命。
另外,冰箱的使用還有著許多注意事項,如:
1、不要與熱源擺放過近,影響冰箱散熱的發(fā)揮;
2、其次最好不要長時間斷電停用冰箱,這會損壞冰箱內(nèi)部管路;
2、懸掛保存:這是很古老的一種保存方法,小時候沒有冰箱;將腌好的咸肉用稻草或塑料繩穿起來,然后懸掛于通風的陽臺上,能夠保存一個冬天。此種方法的缺點:時間久了,咸肉的水分會大大減少,隨著溫度的變高,最好改為其它方式。
3、多抹鹽保存:將咸肉多抹些鹽,然后放于陶瓷的碗里,壓緊壓實,寒冷的冬季直接放于陰冷之處,天氣稍熱時,放于冰箱的冷藏室,能保存幾個月。此種方法的缺點是:肉會變得特別咸,在吃前需提前浸泡,去除一些咸味。
4、用密封壇保存:市場上有一種專門腌制咸菜的壇子,可以買來,在底部放置一些白酒,然后放上筷子或木棒,將咸肉架于上面,再蓋上蓋子,在蓋子周圍倒些水,壇里食物便被密封,能夠保存很久了。此種方法同樣適合于腌制的蘿卜干。注意事項:要保證水份不能干,否則空氣進入壇內(nèi),肉就容易壞了,在春季轉(zhuǎn)暖時,一定要將咸肉移至于冰箱內(nèi)。
5、壓干水份后再保存:咸肉保存時,水分要盡量地少,在腌制咸肉時,就得想辦法將水分壓出來,可用又大又重的石頭,壓在上面;腌制幾天后,再拿出來晾曬一下,這樣水分會變得非常少,這樣再采用一些保存方法,通常能保存很久了。