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1、我們是龍的傳人,祖國(guó)綠化有我份。
2、綠色校園鳥語(yǔ)花香環(huán)保成果你我共享。
3、我們是新時(shí)代的兒童。
4、手邊留情,腳下留凈。
5、亂扔的最高境界就是不扔!——天下無(wú)臟。
6、地球地球我愛你,我們是你的好兒女,保護(hù)你是我責(zé)任,細(xì)心照料我最行!
7、盡心才能干凈,干凈才能靜心。
8、關(guān)愛環(huán)境靠大家,清新空氣每一天。
9、人類只有一個(gè)地球,我們要保護(hù)環(huán)境。
10、請(qǐng)把迷路的垃圾帶回家,別再讓它哭泣了!
11、同在藍(lán)天下,共愛一個(gè)家。
12、與新生活同行,與大自然同居。
13、樓道整潔,當(dāng)然有你一份功勞!
14、讓垃圾回到自己家,讓白色污染和你說再見。
15、保護(hù)環(huán)境凈化心靈。
16、保護(hù)環(huán)境我們有責(zé)任,讓世界充滿綠色。
17、看到綠色,我們才會(huì)有好心情!
18、有限的資源,無(wú)限的循環(huán)。
19、盡一份呵護(hù),凈一方土地。
20、跨越新時(shí)空,享受新生命。
21、保護(hù)環(huán)境,從你我開始。
22、保護(hù)環(huán)境,從我做起。
23、百年校園,靜凈盡顯。
24、明凈之道,何忍污之。
25、只留下您的足跡,請(qǐng)帶走您的“云彩”。
26、愛護(hù)身邊的環(huán)境,等于愛護(hù)自己的生命!
27、小草也有生命,愛惜身邊的每一個(gè)生命!
28、水是有限資源,點(diǎn)點(diǎn)滴滴都是情!
29、人人播撒綠色美,處處享受環(huán)綠美。
30、我是環(huán)保小衛(wèi)士,保護(hù)環(huán)境,是你我的責(zé)任!
31、輕輕地走,正如你輕輕地來,不留下一片紙屑。
32、伸出你的雙手,呵護(hù)美好校園。
33、我們進(jìn)步的階梯,不需要絆腳石。
34、“我”是美麗的,“臉”上有“斑”就不漂亮了。
35、讓地球遠(yuǎn)離污染,讓綠色走進(jìn)家園。
36、愛護(hù)一草一木,建設(shè)美麗校園。
37、大榕樹下陽(yáng)明院愛護(hù)環(huán)境敬先賢。
38、保護(hù)環(huán)境,靠你,靠我,靠大家!
39、讓我們的身邊充滿綠色,讓我們的心情飛揚(yáng)!
40、請(qǐng)用清潔回饋榕樹母親般的蔭蔽。
41、讓世界充滿色彩,讓生命充滿精彩!
42、積攢綠色,儲(chǔ)蓄生命。
43、保護(hù)生態(tài)環(huán)境是我們的責(zé)任,我們是一球媽媽的兒女,是祖國(guó)的接班人。
44、環(huán)境是一杯水,要你去珍惜;環(huán)境是一根草,要你去愛護(hù);環(huán)境是你,要大家去親手培養(yǎng)。
45、讓環(huán)保在我們一中成為一種時(shí)尚。
46、愿這方凈土,與您的心靈一樣純凈。
47、少一些紙片,多一分清潔。
48、勿讓垃圾在窗外自由落體。
49、國(guó)旗伴我成長(zhǎng),環(huán)保潔我心靈。
50、科技的階梯,環(huán)保的樓梯。
51、心動(dòng)不如行動(dòng),去怨不如去干。
52、請(qǐng)高抬貴手,還我一片凈土。
53、保護(hù)環(huán)境,從我做起!愛惜綠色,從我做起!清潔衛(wèi)生,從我做起。
54、塑料包裝用一天,白色污染害幾世。
55、綠色就如同我們的生命!愛護(hù)綠色吧,就像珍惜我們的生命一樣!
保護(hù)校園環(huán)境的標(biāo)語(yǔ)牌
綠化環(huán)境,美化家園,凈化心靈。
文明始于心,環(huán)保踐于行。
大手小手齊動(dòng)手,共創(chuàng)環(huán)保模范城。
創(chuàng)建綠色學(xué)校,美化學(xué)習(xí)環(huán)境。
既要金山銀山,更要青山綠水。
讓我們和地球一起健康成長(zhǎng)。
保護(hù)藍(lán)天碧水。
小草也有生命,請(qǐng)勿踐踏。
環(huán)境保護(hù),從我做起,從小事做起!
舉手之勞,你也能做!
藍(lán)天白云,水清岸綠,保護(hù)環(huán)境,從我做起。 多一份綠色,多一份健康。
綠色,是自然之美,是心靈之聲,是人類的依靠。
綠色是生命之色,生命呼喚著綠色。 保護(hù)環(huán)境,從我做起。
綠色明亮了我們的眼睛,是為了讓我們看清足下綠的生命。
綠色環(huán)境像自家,保護(hù)環(huán)境靠大家。 天更藍(lán),水更綠,讓我們的家園更美麗。
環(huán)境問題,關(guān)系人人;環(huán)境保護(hù),人人有責(zé)。 生命和綠色擁抱 人類與生態(tài)共存
讓環(huán)保扎根現(xiàn)在,用綠色昭示未來。 把藍(lán)天留給你我,讓綠水環(huán)繞人間。
實(shí)行清潔生產(chǎn) 綜合利用資源 打造綠色競(jìng)爭(zhēng)力 綠色貴在保持,環(huán)保重在行動(dòng)。
保護(hù)環(huán)境,造福人民。
保護(hù)環(huán)境就是保護(hù)我們自己。
保護(hù)水環(huán)境,節(jié)約水資源。
樹立大環(huán)境意識(shí),保護(hù)生態(tài)環(huán)境。
欣賞荒野、回歸自然
青山清我目、流水靜我耳
山中何所有?岑上多白云
水光山色與人親,說不盡,無(wú)窮好
自然不可改良、生活可以選擇選擇綠色生活、健康適度消費(fèi)
人人關(guān)心環(huán)境質(zhì)量人人參與環(huán)境保護(hù)
藍(lán)天白云,水清岸綠,保護(hù)環(huán)境,從我做起。 多一份綠色,多一份健康。
綠色,是自然之美,是心靈之聲,是人類的依靠。
綠色是生命之色,生命呼喚著綠色。 保護(hù)環(huán)境,從我做起。
綠色明亮了我們的眼睛,是為了讓我們看清足下綠的生命。
構(gòu)建和諧社會(huì)大環(huán)境,倡導(dǎo)文明環(huán)保新氣象。 與綠色相約,與環(huán)保同行。
讓綠色走進(jìn)家園,使生命遠(yuǎn)離污染。 千方百計(jì)治理污染,齊心協(xié)力保護(hù)環(huán)境。
人人為環(huán)保、環(huán)保為人人
保護(hù)藍(lán)天碧水。
2、保護(hù)環(huán)境,人人有責(zé)
3、累積點(diǎn)滴改進(jìn),邁向完美品質(zhì)
4、減少浪費(fèi),降低成本;氣氛融洽,工作規(guī)范;提升品質(zhì),安全保證
5、預(yù)防保養(yǎng)按時(shí)做,生產(chǎn)流暢不會(huì)錯(cuò)
6、全員參與、強(qiáng)化管理;精益求精、鑄造品質(zhì)
7、貫徹環(huán)保教育,宣導(dǎo)環(huán)保資訊
8、環(huán)境與人類共存,開發(fā)與保護(hù)同步
9、21世紀(jì)拒絕含鉛汽油
10、廢舊電池隨處丟棄的危害
11、落實(shí)環(huán)保責(zé)任,完善環(huán)保制度
12、老毛病、要根治,小問題、要重視
13、講求實(shí)效、完善管理;提升品質(zhì),增創(chuàng)效益
14、我們的母親河
15、推動(dòng)全員品質(zhì)活動(dòng),提高全員工作士氣
16、全員參與改善,持續(xù)環(huán)保社區(qū)
17、農(nóng)村面源污染的危害
18、請(qǐng)選用無(wú)磷洗衣粉
19、拒食野生動(dòng)物
20、提布袋購(gòu)物是一種時(shí)尚
21、廢塑料的用途
22、有品質(zhì)才有市場(chǎng),有改善才有進(jìn)步
23、使用農(nóng)藥、化肥、農(nóng)膜的環(huán)境安全準(zhǔn)則
24、清掃清潔堅(jiān)持做,亮麗環(huán)境真不錯(cuò)
25、工資你高我也高,環(huán)保意識(shí)要提高
26、生產(chǎn)綠色產(chǎn)品,節(jié)約地球資源
27、綠水青山是我家,大家不要破壞他
28、團(tuán)隊(duì)精神,是企業(yè)文化的核心
29、養(yǎng)殖業(yè)的環(huán)境安全準(zhǔn)則
30、多乘公交車,少用私家車
31、推展減廢運(yùn)動(dòng),做好廢棄管理
32、時(shí)時(shí)尋求效率進(jìn)步,事事講究方法技術(shù)
33、技術(shù)是基礎(chǔ),管理是動(dòng)力
34、垃圾是放錯(cuò)位置的資源
35、行動(dòng)是成功的開始,等待是失敗的源頭
36、珍惜資源永續(xù)利用,綠化環(huán)境凈化心靈
37、索取資源力求簡(jiǎn)單,利用資源轉(zhuǎn)換完全
38、團(tuán)結(jié)一條心,石頭變成金
39、地球資源有限,盡量不用一次性消耗品
40、完善環(huán)保制度,落實(shí)環(huán)保責(zé)任
41、保護(hù)生物多樣性
42、無(wú)污染旅游——除了腳印什么都不要留下;除了記憶,什么都不要帶走
43、人人提案創(chuàng)新,成本自然降低
環(huán)境保護(hù)的公益廣告詞
1. 關(guān)注環(huán)境,就是關(guān)注未來。
2. 用心保護(hù),因?yàn)槟鞘俏覀兩畹母尽?/p>
3. 植物青青,水也清清。路房園新,家也溫馨。環(huán)境保護(hù)你我他,藍(lán)天碧水伴大家。
4. 伸出你的手,伸出我的手,擦亮藍(lán)天,播撒綠色。建綠色家園,創(chuàng)美好生活。
5. 您愛自然多一點(diǎn),自然愛您久一點(diǎn)。
6. 金山銀山,不如綠水青山。
7. 保護(hù)藍(lán)天碧水,愛護(hù)生態(tài)家園。
8. 植樹造林,美化家園;展現(xiàn)綠色浦東,維護(hù)生態(tài)環(huán)境。花朵香又美,勸君不要采,留著大家看,美景常存在。綠色環(huán)境像自家,保護(hù)環(huán)境靠大家。
9. 垃圾筒笑口常開,請(qǐng)你不忘送一點(diǎn)。
10. 學(xué)校是個(gè)大花園,師生共同來關(guān)愛。
11. 天更藍(lán),水更綠,讓我們的家園更美麗。
12. 保護(hù)生態(tài)環(huán)境,就是保護(hù)我們?nèi)祟愖约旱募覉@!藍(lán)天白云,水清岸綠,保護(hù)環(huán)境,從我做起。
13. 綠色環(huán)境,生態(tài)家園,關(guān)愛動(dòng)物,保護(hù)資源,愛護(hù)綠化,珍惜生命。
14. 多一份綠色,多一份健康。
15. 生命是樹,綠色是根。
16. 保護(hù)環(huán)境,愛我家園。
17. 綠色是生命之色,生命呼喚著綠色。
環(huán)境保護(hù)的公益廣告詞推薦
1. 我為你美麗的心靈綻放
2. 帶走的花兒生命短暫,留下的美麗才是永遠(yuǎn)
3. 愿君莫伸折枝手,鮮花亦自有淚滴
4. 森林是氧氣的制造工廠
5. 草木綠,花兒笑,空氣清新環(huán)境好
6. 來時(shí)給你一陣芳香,走時(shí)還我一身潔凈
7. 種一棵樹,種一枝花,世界會(huì)更美好
8. 草兒可愛,大家愛
9. 距離產(chǎn)生美,謝絕親密接觸
10. 繞行三五步,留得芳草綠。
11. 讓地球生機(jī)勃勃,讓家園綠意融融。
12. 生命來源自然,健康來自環(huán)保。
13. 還老人一個(gè)純凈的夢(mèng),給孩子一片蔚藍(lán)的天。
14. 一滴雨露,挽救一個(gè)生命;一片藍(lán)天,拯救一個(gè)地球。同享一片藍(lán)天,共創(chuàng)無(wú)限和諧。
15. 打造一方凈土,共享一片藍(lán)天。
16. 青山綠水藍(lán)天白云這才是我們的家。讓環(huán)保扎根現(xiàn)在,用綠色昭示未來。
17. 護(hù)天護(hù)地護(hù)花護(hù)草護(hù)環(huán)境愛山愛水愛林愛鳥愛株洲同心描綠色,眾手繪藍(lán)天。
環(huán)境保護(hù)的公益廣告詞精選
1. 紅花綠草滿園栽,風(fēng)送花香碟時(shí)來
2. 花開堪賞直須賞,莫要折花空賞枝
3. 花草叢中笑,園外賞其貌
4. 樹木擁有綠色,地球才有脈搏。
5. 除了相片,什么都不要帶走;除了腳印,什么都不要留下。
6. 地球是我家,綠化靠大家。
7. 一花一草皆生命,一枝一葉總關(guān)情。
8. 來時(shí)給你一陣芳香,走時(shí)還我一身潔凈。
9. 小草有生命,足下多留“青”。
10. 小草對(duì)您微微笑,請(qǐng)您把路繞一繞。
11. 欲攬春色入自家,無(wú)可奈何成落花。
12. 我是一只小小小鳥,總是飛呀飛不高。
13. 綠色是地球的本色
14. 地球是我家,綠化靠大家
15. 保護(hù)樹木,就是保護(hù)自己
關(guān)鍵詞:電子黃綠標(biāo) 環(huán)保汽車 汽車識(shí)別系統(tǒng)
中圖分類號(hào):TQ630.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1672-3791(2012)12(c)-0024-02
為了進(jìn)行節(jié)能減排檢查、汽車定期環(huán)保檢查、緩解市區(qū)交通擁堵和空氣污染,國(guó)家發(fā)放了機(jī)動(dòng)車排放標(biāo)準(zhǔn)的分級(jí)標(biāo)志——汽車環(huán)保標(biāo)志。汽車環(huán)保標(biāo)志有黃色標(biāo)和綠色標(biāo)兩類統(tǒng)一簡(jiǎn)稱為黃綠標(biāo),黃綠標(biāo)依照車型和排放標(biāo)準(zhǔn)審核后由環(huán)保部門發(fā)放。進(jìn)出汽車尾氣排放達(dá)到歐洲一號(hào)標(biāo)準(zhǔn)即為綠標(biāo),未到達(dá)即為黃標(biāo),當(dāng)環(huán)保標(biāo)志有效期滿后,按照規(guī)定重新進(jìn)行排氣檢測(cè),根據(jù)情況換發(fā)新標(biāo)志。環(huán)保標(biāo)志可用于識(shí)別車輛的排放控制水平和環(huán)保達(dá)標(biāo)狀況,有利于車輛的差別化管理和環(huán)保達(dá)標(biāo)管理。
1 電子標(biāo)簽技術(shù)
1.1 電子標(biāo)簽概念
電子標(biāo)簽即射頻識(shí)別(RFID:Radio Frequency IDentification)技術(shù),是一種無(wú)線射頻識(shí)別技術(shù),屬于通信技術(shù),可通過無(wú)線電訊號(hào)識(shí)別特定目標(biāo)和讀寫相關(guān)數(shù)據(jù),則識(shí)別系統(tǒng)與特定目標(biāo)之間不需建立機(jī)械或光學(xué)接觸。常用的有低頻(125~134.2 k)、高頻(13.56 MHz)、超高頻,無(wú)源等技術(shù)。電子標(biāo)簽使用專用的RFID讀寫器與專門的可附著于目標(biāo)物的RFID標(biāo)簽,利用頻率信號(hào)將信息由電子標(biāo)簽傳送到讀寫器。在基于汽車環(huán)保電子黃綠標(biāo)的汽車識(shí)別系統(tǒng)中將電子標(biāo)簽設(shè)計(jì)為一張固化在金屬車牌上的名片大小的智能卡片,以其為用戶數(shù)據(jù)信息的載體。
1.2 電子標(biāo)簽技術(shù)的工作原理
電子標(biāo)簽進(jìn)入磁場(chǎng)后,接收解讀器發(fā)出的射頻信號(hào),憑借感應(yīng)電流所獲得的能量發(fā)送出存儲(chǔ)在芯片中的產(chǎn)品信息(Passive Tag,無(wú)源標(biāo)簽或被動(dòng)標(biāo)簽),或者由標(biāo)簽主動(dòng)發(fā)送某一頻率的信號(hào)(Active Tag,有源標(biāo)簽或主動(dòng)標(biāo)簽),解讀器讀取信息并解碼后,送至中央信息系統(tǒng)進(jìn)行有關(guān)數(shù)據(jù)處理,基于汽車環(huán)保電子黃綠標(biāo)的汽車識(shí)別系統(tǒng)將電子標(biāo)簽技術(shù)與黃綠標(biāo)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合設(shè)計(jì)為電子黃綠標(biāo),并將其設(shè)計(jì)為一張固化在金屬車牌上的名片大小的智能卡片,采用標(biāo)簽主動(dòng)發(fā)送信號(hào)的方式進(jìn)行工作的,由閱讀器發(fā)射一特定頻率的無(wú)線電波能量給Transponder,用以驅(qū)動(dòng)Transponder電路將內(nèi)部的數(shù)據(jù)送出,此時(shí)閱讀器便依序接收并解讀數(shù)據(jù),送給應(yīng)用程序做相應(yīng)的處理。
2 基于汽車環(huán)保電子黃綠標(biāo)的汽車識(shí)別系統(tǒng)設(shè)計(jì)
在基于環(huán)保電子黃綠標(biāo)的汽車識(shí)別系統(tǒng)中,將電子標(biāo)簽技術(shù)與黃綠標(biāo)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合設(shè)計(jì)為電子黃綠標(biāo),并將其設(shè)計(jì)為一張固化在金屬車牌上的名片大小的智能卡片,汽車識(shí)別系統(tǒng)則是以電子標(biāo)簽為用戶數(shù)據(jù)信息的載體,以射頻識(shí)別技術(shù)為基礎(chǔ),以公共通信網(wǎng)絡(luò)和專業(yè)通信網(wǎng)絡(luò)為通信平臺(tái),那么計(jì)算機(jī)就可以通過遠(yuǎn)距離查詢用戶的數(shù)據(jù)、對(duì)車輛進(jìn)行識(shí)別,實(shí)現(xiàn)車輛管理的現(xiàn)代化。
2.1 工作原理
基于汽車環(huán)保電子黃綠標(biāo)的汽車識(shí)別系統(tǒng)由閱讀器、電子黃綠標(biāo)簽及應(yīng)用軟件系統(tǒng)三個(gè)部份所組成。工作原理如圖1所示。
當(dāng)安裝有電子標(biāo)簽的車輛駛?cè)耸召M(fèi)站車道前的抓拍線圈時(shí),微波天線被激活,由休眠狀態(tài)轉(zhuǎn)為蘇醒狀態(tài),讀取電子標(biāo)簽的ID號(hào)(該ID號(hào)已與車輛的車牌號(hào)進(jìn)行綁定),并將ID號(hào)傳輸給車道計(jì)算機(jī);車道計(jì)算機(jī)依據(jù)該ID號(hào)在車輛信息數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢,確認(rèn)該ID號(hào)所對(duì)應(yīng)的車輛的環(huán)保標(biāo)志類別和有效期。特別是在對(duì)黃標(biāo)車限行的路段,若車輛為綠標(biāo)車且在有效期內(nèi),車道自動(dòng)欄桿抬起,車輛通過收費(fèi)站的落桿線圈后,車道自動(dòng)欄桿落下,完成自動(dòng)識(shí)別過程;若車輛為車輛為黃標(biāo)車,車道自動(dòng)欄桿緊閉限行;若車輛的黃標(biāo)或綠標(biāo)已經(jīng)超過有效期,車道自動(dòng)欄桿緊閉限行,并提示車標(biāo)過期,請(qǐng)車主及時(shí)更換新的汽車環(huán)保標(biāo)志。
電子標(biāo)簽是識(shí)別系統(tǒng)的信息載體,是一種固定在車身或粘貼于車窗玻璃的無(wú)源卡,由定制的基于射頻的芯片和以陶瓷為基片的微帶天線組成。本系統(tǒng)采用的電子標(biāo)簽電子標(biāo)簽以陶瓷材料為基片,并在基片上設(shè)計(jì)“破碎記憶線”這一特殊裝置,保證車卡在安裝之后不可拆卸。閱讀器根據(jù)使用的結(jié)構(gòu)和技術(shù)不同可以是讀或讀/寫裝置,是汽車識(shí)別系統(tǒng)信息控制和處理中心。閱讀器通常由耦合模塊、收發(fā)模塊、控制模塊和接口單元組成。電子標(biāo)簽和閱讀器之間一般采用半雙工通信方式進(jìn)行信息交換,同時(shí)閱讀器通過耦合給無(wú)源電子標(biāo)簽提供能量和時(shí)序。
2.2 識(shí)別系統(tǒng)設(shè)計(jì)
操作系統(tǒng)采用WindowsXP作為汽車識(shí)別系統(tǒng)的開發(fā)環(huán)境、采用SQL Server 2005設(shè)計(jì)數(shù)據(jù)庫(kù)并建立數(shù)據(jù)庫(kù)表、以VisualC++6.0為開發(fā)工具,采用ADO技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)的數(shù)據(jù)訪問。本系統(tǒng)可以直接在本地計(jì)算機(jī)上運(yùn)行,以此檢測(cè)汽車的環(huán)保類別,方便對(duì)車輛的定期環(huán)保檢查以及限行管理等。
2.3 功能模塊設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)
電子標(biāo)簽黃綠標(biāo)汽車識(shí)別系統(tǒng)包括系統(tǒng)管理、發(fā)卡、數(shù)據(jù)采集、記錄查詢、黃綠標(biāo)識(shí)別管理等。
(1)系統(tǒng)管理。
本模塊主要實(shí)現(xiàn)對(duì)系統(tǒng)的管理與維護(hù)。系統(tǒng)授權(quán)管理可進(jìn)行分時(shí)段、分級(jí)別管理,能夠?qū)囕v進(jìn)行時(shí)區(qū)限制管理,每個(gè)時(shí)間區(qū)可以單獨(dú)靈活設(shè)置,每輛車可以同時(shí)選擇多個(gè)時(shí)間區(qū)。而且不同級(jí)別的管理員有不同的操作權(quán)限,便于對(duì)系統(tǒng)數(shù)據(jù)的安全管理。
(2)車輛發(fā)卡信息管理。
在系統(tǒng)運(yùn)行之前,須按規(guī)定進(jìn)行排氣檢測(cè),根據(jù)情況確定車輛的黃綠標(biāo)志,同時(shí)要將車輛用戶的基本信息錄入數(shù)據(jù)庫(kù)中,并分配卡號(hào),之后才會(huì)將制作好的電子黃綠標(biāo)標(biāo)簽發(fā)放給用戶。應(yīng)用在環(huán)保汽車黃綠標(biāo)中的電子標(biāo)簽的基本信息包括:標(biāo)簽使用者名稱、卡號(hào)、黃綠標(biāo)志(黃標(biāo)車或綠標(biāo)車)、發(fā)卡時(shí)間、發(fā)放次數(shù)(記載該用戶是否已發(fā)卡,如果有丟失情況,則記載已發(fā)放過的次數(shù))、標(biāo)簽ID號(hào)。將車輛的電子標(biāo)簽卡ID信息通過讀寫器自動(dòng)讀入,與對(duì)應(yīng)的車牌號(hào)碼,車主姓名等相關(guān)信息添加錄入數(shù)據(jù)庫(kù)中。
(3)車輛出入數(shù)據(jù)監(jiān)控。
識(shí)別系統(tǒng)處于自動(dòng)監(jiān)控、信號(hào)采集狀態(tài),當(dāng)持卡車輛進(jìn)出系統(tǒng)大門設(shè)置的識(shí)別區(qū)域時(shí),其隨身攜帶的射頻卡被應(yīng)用系統(tǒng)快速識(shí)別,數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)自動(dòng)采集電子車牌內(nèi)數(shù)據(jù),進(jìn)入系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢并判斷該車輛的環(huán)保標(biāo)志類別和是否在有效期內(nèi)。
(4)記錄查詢。
系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫(kù)中存儲(chǔ)有車輛用戶基本信息、發(fā)卡信息以及車輛出入記錄,操作日志記錄等各種數(shù)據(jù)庫(kù)表。系統(tǒng)管理員可以根據(jù)時(shí)間段,出入狀態(tài),車輛卡信息等多種組合條件,查詢車輛通行的所有出入記錄,并可以報(bào)表的形式打印,滿足管理上的需求。
2.4 數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)計(jì)
數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)計(jì)是建立數(shù)據(jù)庫(kù)表及其應(yīng)用系統(tǒng)相關(guān)聯(lián)的技術(shù),把系統(tǒng)中的大量的數(shù)據(jù)按一定的模型組織起來,提供存儲(chǔ)、維護(hù)、檢索的功能,使得系統(tǒng)可以方便、準(zhǔn)確地從數(shù)據(jù)庫(kù)表中查找到所需的信息。本系統(tǒng)在Windows環(huán)境下,建立Microsoft SQL Server2005數(shù)據(jù)庫(kù)表,主要設(shè)計(jì)了3種基本表格存放信息:(1)車輛基本信息表:車卡ID號(hào)、車牌號(hào)碼、車卡明碼、車型、車品牌、車輛環(huán)保標(biāo)志、環(huán)保標(biāo)志有效期等。(2)車輛通行記錄表(時(shí)空信息):車卡ID號(hào),通過日期時(shí)間,基站及車道編碼。(3)車輛運(yùn)行情況記錄表:故障編碼、故障時(shí)間。
3 結(jié)論
基于汽車環(huán)保電子黃綠標(biāo)的汽車識(shí)別系統(tǒng)的設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)了車輛定期環(huán)保檢查和限行管理的電子化、數(shù)據(jù)化,本系統(tǒng)在門禁、停車場(chǎng)及專門的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)地做了大量測(cè)試。結(jié)果表明,該系統(tǒng)在正常運(yùn)行時(shí),能夠準(zhǔn)確的識(shí)別出車輛的黃綠標(biāo)志和車輛身份并采集相關(guān)信息,對(duì)車輛及交通管理具有一定的實(shí)用價(jià)值和重要的研究意義。隨著技術(shù)的不斷完善,汽車識(shí)別系統(tǒng)采集的信息也可以發(fā)揮更大的作用。
參考文獻(xiàn)
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資料與方法
一般資料:所有研究對(duì)象均為女性,選擇60例肥胖乳腺癌患者,60例正常體重乳腺癌患者,術(shù)前均未化療,根據(jù)國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)建議以T(原發(fā)癌)、N(局部淋巴結(jié))、M(遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移)對(duì)乳腺癌進(jìn)行分期,所有病例術(shù)前未行任何治療,術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實(shí)診斷,全部病例均經(jīng)細(xì)胞學(xué)或組織病理學(xué)證實(shí)。肥胖癥的診斷符合WHO為亞洲成年人制定的標(biāo)準(zhǔn),即體重指數(shù)≥25kg/m2。各組每例乳腺癌組織標(biāo)本取材后4%多聚甲醛固定。
身高、體重測(cè)量:固定專人,測(cè)量身高(m)和體重(kg)。測(cè)得身高和體重?cái)?shù)據(jù)精確至01cm和01kg,體重指數(shù)(BMI)=體重(kg)/身高(m2)。
試劑與儀器:兔抗Caspase-8和Caspase-3單克隆抗體、生物素標(biāo)記二抗和TUNEL凋亡試劑盒均購(gòu)于北京中杉生物公司。
TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡:采用細(xì)胞凋亡試劑盒(北京中杉生物工程有限公司的產(chǎn)品),按照試劑盒說明書操作,免疫組化ABC染色法,DAB顯色,蘇木素輕度復(fù)染、脫水、透明、封片。細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為原位末端標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞,即凋亡細(xì)胞。采用顯微鏡計(jì)數(shù)法(10目鏡×40物鏡),觀察每個(gè)高倍視野的凋亡細(xì)胞數(shù),每只動(dòng)物隨機(jī)取3張切片,每張切片隨機(jī)觀察6個(gè)視野。細(xì)胞凋亡指數(shù)的測(cè)定(apoptotic index AⅠ):每張切片選擇5個(gè)陽(yáng)性染色最明顯高倍視野(×400)計(jì)數(shù)500個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比。
免疫組化結(jié)果的判斷:陽(yáng)性結(jié)果呈棕黃色或棕褐色,Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞分別為細(xì)胞質(zhì)顯色,Caspase-3蛋白表達(dá)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)如下。用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)半定量監(jiān)測(cè)其蛋白表達(dá)的強(qiáng)弱,應(yīng)用Image-Pro Plus 50彩色病理圖文分析系統(tǒng)隨機(jī)選取5個(gè)視野,測(cè)定乳腺癌組織Caspase-3免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物平均光密度值,以平均光密度值來進(jìn)行量化后的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:使用SPSS130軟件包。所得數(shù)據(jù)以X±S表示,采用方差分析;P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果
兩組患者一般情況比較:肥胖組患者平均年齡5135±775歲,正常體重組為4964±617歲,兩組相比差異無(wú)顯著性(P>005)。肥胖組(2851±555)和正常體重組(1945±479)體重比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005)。
TUNEL法檢測(cè)各組乳腺癌細(xì)胞凋亡:光學(xué)顯微鏡下觀察,細(xì)胞核濃縮,染色質(zhì)凝集,呈圓形或新月形,體積變小,核被標(biāo)記成棕黃色的細(xì)胞即為凋亡細(xì)胞。正常體重組中腫瘤細(xì)胞有凋亡現(xiàn)象,凋亡率為038±007。肥胖組凋亡率為013±002,較正常體重組降低,表明肥胖組細(xì)胞凋亡作用明顯低于正常體重組(P<001)。
各組乳腺組織中Caspase-3蛋白表達(dá)及與細(xì)胞凋亡二者的相關(guān)性:肥胖組乳腺組織Caspase-3蛋白表達(dá)的平均光密度值為017±005,正常體重組為056±014,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005)。肥胖患者乳腺癌細(xì)胞凋亡與Caspase-3蛋白表達(dá)的相關(guān)系數(shù)(r=086,P<005);正常體重組乳腺癌細(xì)胞凋亡與Caspase-3蛋白表達(dá)的相關(guān)系數(shù)(r=038,P<005)。Caspase-3蛋白表達(dá)與5年復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系:60例正常體重乳腺癌Caspase-3陽(yáng)性患者17例中,有13例(765%)發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移;而43例Caspase-3陰性患者中,37例(814%)發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,經(jīng)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。60例肥胖乳腺癌39陽(yáng)性患者中,15例(385%)發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移;而21例Caspase-3陰性患者中,有16例(762%)發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,有顯著性差異。見表1。
討論
乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一,在許多國(guó)家和地區(qū)居女性惡性腫瘤的首位。引起乳腺癌的發(fā)病因素很多如遺傳因素、內(nèi)分泌因素、物理因素等,其中肥胖為其發(fā)病的高危因素之一,日益受到人們的重視。體重過重和肥胖增加了患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)[1]。
細(xì)胞凋亡是基因控制的細(xì)胞自主性死亡。Caspase為含半胱氨酸的天冬氨酸特異水解酶,是凋亡的主要執(zhí)行者,Caspase分啟動(dòng)型、效應(yīng)型和炎癥型3型[2]。Caspase-3是哺乳類動(dòng)物細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵蛋白酶,在Caspase家族中屬于效應(yīng)型,在引起細(xì)胞凋亡蛋白酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)中處于核心;在正常情況下,胞質(zhì)中的Caspase-3以無(wú)活性的酶原形式存在只有當(dāng)細(xì)胞凋亡時(shí),才被激活為有活性的Caspase-3[3~4]。近年來發(fā)現(xiàn)Caspase-3參與了腫瘤發(fā)生過程中細(xì)胞凋亡異常的病理過程[5]。
本組研究表明,肥胖乳腺癌組織中,Caspase-3的陽(yáng)性表達(dá)率低于對(duì)照組正常體重乳腺癌組織(P<005),肥胖患者乳腺癌組織中,Caspase-3的陽(yáng)性表達(dá)低于正常體重患者乳腺癌組織(P<005),肥胖乳腺癌組織中Caspase-3蛋白表達(dá)與細(xì)胞凋亡無(wú)明顯相關(guān),且本研究結(jié)果提示,與正常體重乳腺癌患者比較,肥胖乳腺癌患者乳腺癌組織Caspase-3蛋白陽(yáng)性的表達(dá)肥胖乳腺癌患者5年復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中起重要作用。因此推測(cè)Caspase-3參與了乳腺癌組織的發(fā)育及轉(zhuǎn)化細(xì)胞凋亡過程的調(diào)節(jié),Caspase-3表達(dá)促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),在肥胖相關(guān)性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起重要的作用[6]。
綜上所述,肥胖乳腺癌患者組織中的Caspase-3表達(dá)減少是促進(jìn)乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的高危因素,并且使乳腺癌的惡化和影響預(yù)后。預(yù)防肥胖對(duì)降低患乳腺癌的發(fā)病率有積極的意義。
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方法:54例Ⅳ非小細(xì)胞肺癌患者,隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組并進(jìn)行為期10天的治療。對(duì)照組給予紫杉醇聯(lián)合順鉑化療,試驗(yàn)組除了給予上述藥物化療外加用ω-3魚油脂肪乳治療。觀察治療前后血清C反應(yīng)蛋白(CRP)和白介素-6(IL-6)水平的變化。
結(jié)果:經(jīng)過10天的治療后兩組CRP水平均無(wú)明顯變化,試驗(yàn)組IL-6水平明顯下降。
關(guān)鍵詞:肺癌 ω-3魚油脂肪乳 C反應(yīng)蛋白 白介素-6
Doi:10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.035
【中圖分類號(hào)】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1671-8801(2013)08-0036-01
有研究表明全身炎癥反應(yīng)與包括肺癌在內(nèi)的許多實(shí)體瘤的預(yù)后不良存在關(guān)聯(lián)[1,2],此外血清炎性介質(zhì)水平亦與腫瘤患者營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的惡化有關(guān)[3]。ω-3魚油脂肪乳含有二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),對(duì)腫瘤有抑制作用,并可改善患者的免疫功能、減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng),在肺癌治療中日益受到重視。這是一項(xiàng)對(duì)54例Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者進(jìn)行的隨機(jī)對(duì)照研究,旨在探討ω-3魚油脂肪乳對(duì)其血清炎性標(biāo)記物水平的影響。
1 資料與方法
1.1 臨床資料:選擇2011年1月至2013年1月在我科住院治療的肺癌患者54例,其中男性37例,女性17例,平均年齡56±7.2歲。均為經(jīng)組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)證實(shí)的Ⅳ期NSCLC,體能狀況評(píng)分(KPS評(píng)分)≥80。如果既往接受過抗腫瘤治療(手術(shù)、放療和/或化療),合并急性感染、心力衰竭或肝腎功能不全等重要臟器損害者則被排除于研究之外?;颊弑浑S機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,每組各27例,兩組在性別及年齡方面均無(wú)顯著性差異。
1.2 研究方法:兩組患者均接受紫杉醇(175mg/m2)聯(lián)合順鉑(80mg/m2)方案化療,其預(yù)處理和水化方法完全相同?;熼_始前1天留取血液標(biāo)本,檢查并記錄患者的血清CRP及IL-6水平。對(duì)照組在充分預(yù)處理后給予紫杉醇聯(lián)合順鉑(TP方案)化療,并進(jìn)行水化。試驗(yàn)組在對(duì)照組治療方案基礎(chǔ)上加用ω-3魚油脂肪乳100ml,連續(xù)靜點(diǎn)10天。在10天治療之后再次留取血液標(biāo)本,復(fù)查CRP及IL-6水平。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所有數(shù)據(jù)以X±S表示,兩因素水平比較采用方差分析,P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
兩組治療前后CRP水平的變化見表1,IL-6水平的變化見表2。
在接受治療之前試驗(yàn)組和對(duì)照組的CRP和IL-6水平均不存在顯著性差異,經(jīng)過10天的治療后兩組CRP水平均無(wú)明顯變化(P>0.05),對(duì)照組IL-6水平同樣如此。但試驗(yàn)組的IL-6出現(xiàn)明顯下降(P=0.01)且組間比較有顯著性差異(P=0.006)。
3 討論
腫瘤患者全身炎癥反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制尚不清楚,可能與腫瘤的缺氧壞死、急性期蛋白生成等有關(guān)[4]。全身炎癥反應(yīng)對(duì)于患者存在諸多不利影響,如誘發(fā)惡液質(zhì)[5]、導(dǎo)致白蛋白合成減少[6],與患者營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的惡化密切相關(guān)?;熆梢越档湍[瘤負(fù)荷、減輕其所誘發(fā)的炎癥反應(yīng),除此之外ω-3魚油脂肪乳的炎癥調(diào)節(jié)作用也日益受到重視。
ω-3魚油脂肪乳提煉于深海魚油,其調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的機(jī)制為:①直接與花生四烯酸(AA)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合細(xì)胞膜磷脂,從而增加免疫細(xì)胞膜磷脂EPA和DHA含量。并通過下調(diào)內(nèi)毒素和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的環(huán)氧化酶2(COX-2)表達(dá)和抑制磷脂酶PLA2的活性,減少來源于AA的二十烷酸,有助于抑制炎癥。②融入到T淋巴細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的脂質(zhì)雙分子層中,改變其細(xì)胞膜的組成、影響膜的流動(dòng)性和膜上受體的空間構(gòu)象,進(jìn)而影響細(xì)胞功能分子的合成和細(xì)胞功能[7]。
在本研究中我們發(fā)現(xiàn)接受治療前兩組患者的CRP及IL-6水平均高于正常值上限。給予治療后的第10天兩組CRP水平均無(wú)明顯的下降。單純化療組的IL-6水平無(wú)明顯變化,但加用ω-3魚油脂肪乳治療的患者則有明顯下降。由于化療藥物的抗腫瘤作用往往起效緩慢,故治療10天后也許尚不足以見到其對(duì)于CRP和IL-6水平產(chǎn)生的影響。加用ω-3魚油脂肪乳治療10天雖未見CRP水平的明顯變化卻有效降低了IL-6水平,提示其對(duì)于Ⅳ期NSCLC患者具有一定的抗炎活性。ω-3魚油脂肪乳在肺癌患者中的應(yīng)用仍有許多工作要做,如確定合理的劑量及療程以保證取得最佳的療效。相信隨著研究的深入將會(huì)有更多的患者從治療中獲益。
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【中圖分類號(hào)】R711.74【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B文章編號(hào):1004-7484(2012)-05-0786-02宮頸癌發(fā)病與很多因素有關(guān)。筆者對(duì)宮頸癌患者進(jìn)行輔助檢查,以研究TRAIL、Survivin兩項(xiàng)指標(biāo)在宮頸病變患者疾病中的表達(dá)和其與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系,并進(jìn)行分析,現(xiàn)總結(jié)如下:1.對(duì)象與方法
1.1對(duì)象:收集2007年-2010年北京市順義區(qū)醫(yī)院74例患者的標(biāo)本,都為進(jìn)行陰道鏡室活檢及手術(shù)切除的標(biāo)本。輔助病理檢查均明確診斷,27例患者為宮頸浸潤(rùn)癌設(shè)為宮頸癌組。22例患者為CINII-III級(jí)設(shè)為CIN II-III級(jí)組;25例患者為CIN I級(jí)設(shè)為CIN I級(jí)組。并設(shè)立對(duì)照組進(jìn)行研究,對(duì)照組15例患者為筆者所在醫(yī)院宮頸正常的患者,其標(biāo)本為子宮肌瘤手術(shù)切除標(biāo)本。所有宮頸癌患者在手術(shù)之前都沒有進(jìn)行化療、放療的治療。RT-PCR方法檢測(cè)Survivin、TRAIL的表達(dá),采用SPSSll.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。
1.2結(jié)果:宮頸癌組的Survivin基因的表達(dá)指標(biāo)l.293±0.438,CIN II-III級(jí)組為1.010±0.367,CIN I級(jí)組為0.718±0.205,正常宮頸組為0.596±0.229。結(jié)果顯示正常宮頸組明顯低于CIN組,CIN組明顯低于宮頸癌組。CIN I級(jí)組指標(biāo)明顯低于CINII-III級(jí)組,差異明顯有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。CINI級(jí)組和正常宮頸組比較無(wú)明顯差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
宮頸癌組TRAIL基因的表達(dá)指標(biāo)為0.441±0.117,CIN II-III級(jí)組為0.536±0.150,CIN I級(jí)組為0.675±0.211,正常宮頸組為0.940±0.427。宮頸癌組和CIN II-III級(jí)組的指標(biāo)明顯高于正常宮頸組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:對(duì)宮頸癌組織中的各項(xiàng)表達(dá)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,應(yīng)用Spearman等級(jí)處理,其呈負(fù)相關(guān)關(guān)系表現(xiàn)。相關(guān)系數(shù)r=-0.541,P
在人體腫瘤的研究中,Survivin基因在此疾病的檢查中都有明顯表現(xiàn)。其高度表達(dá)可讓患者的細(xì)胞凋亡受到抑制,從而致使患者的細(xì)胞出現(xiàn)了增殖異常的表現(xiàn)。這表明此指標(biāo)和患者發(fā)生腫瘤疾病有著很大的關(guān)聯(lián)。筆者應(yīng)用RT-PCR的方法對(duì)患者的標(biāo)本進(jìn)行檢查,經(jīng)對(duì)比分析顯示此指標(biāo)在早期宮頸癌惡性轉(zhuǎn)化的時(shí)候可能會(huì)高表達(dá)。分析結(jié)果還顯示其和宮頸癌疾病地發(fā)生有很大的關(guān)系。
TRAIL指標(biāo)為腫瘤壞死因子,其本身在正?;颊唧w內(nèi)為高表達(dá)的表現(xiàn),其在腫瘤患者及胚胎中的表現(xiàn)為低表達(dá)或者為沒有表達(dá)。本組資料顯示其在宮頸癌組中的表達(dá)指標(biāo)為最少,這表明患者在發(fā)生腫瘤疾病時(shí)TRAIL表現(xiàn)為逐漸地丟失。這表明其和疾病的產(chǎn)生和法則有很大的關(guān)系。故對(duì)其進(jìn)行研究可能會(huì)有新的突破。
【摘要】
目的: 研究RF因子陽(yáng)性及陰性RA患者之間是否存在基因組學(xué)的差異, 探詢差異存在的基因表達(dá)基礎(chǔ)。方法: 應(yīng)用基因表達(dá)譜方法來檢測(cè)上述兩型患者CD4+淋巴細(xì)胞基因表達(dá)情況。結(jié)果: RF因子陽(yáng)性與陰性患者之間有55條基因表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論: RF因子陽(yáng)性與陰性RA患者之間存在差異表達(dá)基因, 這些差異基因多與免疫應(yīng)答相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 類風(fēng)濕因子 基因表達(dá)
類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)是以周圍關(guān)節(jié)對(duì)稱性炎癥為主、 伴反復(fù)發(fā)作的慢性全身性疾病, 患者中關(guān)節(jié)局部致殘率高達(dá)60%以上, 是一種嚴(yán)重危害人類健康的自身免疫性疾病, 其病因目前尚不十分明確, 主要與遺傳、 感染、 激素、 免疫因素等相關(guān)[1]。近期研究表明: RA的發(fā)生發(fā)展與CD4淋巴細(xì)胞改變關(guān)系密切, 關(guān)節(jié)滑膜中浸潤(rùn)的CD4+T淋巴細(xì)胞對(duì)自身抗原產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答, 促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞的活化核細(xì)胞毒性T細(xì)胞的分化, 導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子釋放, 形成炎性損傷。類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor, RF)是臨床診斷和治療RA過程中最常用的檢測(cè)項(xiàng)目之一, 它在RA中的陽(yáng)性率約為60%~80%, 但特異性低[2, 3]。為了探詢RA中RF陰性與陽(yáng)性患者之間是否存在基因表達(dá)差異, 我們利用基因芯片技術(shù)對(duì)RA患者外周血CD4+細(xì)胞進(jìn)行了檢測(cè)與研究。
1 對(duì)象和方法
1.1 對(duì)象 RA患者33例來自北京中日友好醫(yī)院風(fēng)濕病科及中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院風(fēng)濕病科, 均為女性患者, 年齡21~60歲, 平均(42.8±9.9)歲, 病程2~10年, 平均(3.8±4.9)年; 其中RF+患者22例, 年齡21~60歲, 平均(41.6±10.9)歲, 病程2~10年, 平均(5.05±1.81)年; RF-患者11例, 年齡34~60歲, 平均(45.1±7.4)歲, 病程2~8年, 平均(4.91±1.45)年。疾病診斷參照1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ARA)修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4], 病例排除標(biāo)準(zhǔn)包括: 合并嚴(yán)重關(guān)節(jié)外表現(xiàn), 如高熱不退、 多發(fā)類風(fēng)濕結(jié)節(jié)、 肺間質(zhì)纖維化、 腎臟淀粉樣變、 縮窄性心包炎、 血管炎等需要使用糖皮質(zhì)激素的患者; 雖為本病患者, 但長(zhǎng)期服用有關(guān)治療RA的慢作用藥物, 且在本研究前至少1周內(nèi)未停用甲氨喋呤、 氯喹、 柳氮磺胺吡啶、 環(huán)磷酰胺、 青霉胺和金制劑等免疫抑制類藥物的患者; 合并有循環(huán)、 呼吸、 消化、 泌尿生殖、 造血系統(tǒng)以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病的患者; 精神病患者; 孕婦或哺乳期女性的患者; 過往用藥記錄不明確者。另選中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院體檢中心12名體檢者作為對(duì)照, 對(duì)照組為正常體檢人群, 經(jīng)體檢后其心電圖、 血脂、 血糖及肝功能均無(wú)異常。所有納入者均采集晨起空腹靜脈血6~8 mL, 肝素抗凝備用。
1.2 方法
1.2.1 CD4+T淋巴細(xì)胞分離純化 采集的靜脈血, 以體積比為50 μL/1 mL血液的比例, 將CD4+ enrichment抗體加入血液中混勻, 室溫下放置20 min。含胎牛血清的PBS等量稀釋樣本, 輕輕混勻, 將混合液體小心加到Ficoll密度介質(zhì)上, 形成分界面, 室溫下1200 g速度離心20 min。用一次性吸量管在密度介質(zhì)層與血漿層之間收集淋巴細(xì)胞, PBS清洗, 冰氯化銨溶解殘存紅細(xì)胞, PBS清洗2遍, 即可得到純度90%以上的CD4+T淋巴細(xì)胞。
1.2.2 RNA提取及鑒定 按TRIzol說明書, 提取細(xì)胞總RNA, 并進(jìn)行RNA鑒定, 其A260/A280比值必須不低于1.7。aRNA制備: 根據(jù)MessageAmp aRNA試劑盒操作說明進(jìn)行。用T7 Oligo(dT)逆轉(zhuǎn)錄合成第1條cDNA鏈, 以第1條cDNA鏈為模板合成第2條cDNA鏈, cDNA鏈純化, 體外轉(zhuǎn)錄合成aRNA, aRNA純化, aRNA鑒定及含量測(cè)定。
1.2.3 標(biāo)記的aRNA探針與基因表達(dá)芯片雜交及檢測(cè) 芯片由University of British Columbia、 Canada提供, 為全基因組序列, 共23232個(gè)點(diǎn), 設(shè)有空白對(duì)照、 陰性對(duì)照、 管家基因?qū)φ?。根?jù)PerkinElmer Micromax ASAP RNA labeling試劑盒操作說明進(jìn)行。所有芯片均以相同對(duì)照標(biāo)記為Cy3, 樣本標(biāo)記為Cy5。
1.2.4 基因芯片圖像掃描 用GenePix 4000B scanner進(jìn)行圖像掃描。
1.2.5 數(shù)據(jù)的分析 包括圖像的分析、 標(biāo)準(zhǔn)化處理、 ratio值分析、 基因的聚類分析。利用genepix 4100分析軟件, 對(duì)掃描的圖像進(jìn)行圖像數(shù)據(jù)的轉(zhuǎn)換。所得數(shù)據(jù), 根據(jù)芯片數(shù)據(jù)剔除的基本法則, 剔除一些不可靠基因點(diǎn)值, 包括剔除熒光值溢出點(diǎn), 熒光前景值低于1.5倍背景中位數(shù)值的基因點(diǎn), 然后根據(jù)轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)中的SNR(信噪比), 剔除SNR
2 結(jié)果
2.1 RF+與RF-患者基因表達(dá)差異 RF+與RF-患者之間有55條基因表達(dá)差異具有明顯性(部分差異表達(dá)基因見表1), 其中上調(diào)基因有40條, 下調(diào)基因有15條, 這些差異表達(dá)基因主要涉及免疫應(yīng)答基因, 如TNF受體超家族基因、 熱休克蛋白基因、 天冬氨酰tRNA合成酶、 干擾素γ、 T細(xì)胞受體介導(dǎo)分子、 STAT誘導(dǎo)的STAT抑制因子、 干擾素γ誘生蛋白等。
表1 RF+與RF-患者部分差異表達(dá)基因(略)
Tab 1 Defferential expression genes between RF+ and RF- patients
2.2 RF+、 RF-患者與對(duì)照組的表達(dá)差異 RF+、 RF-患者與對(duì)照組之間有42條基因差異表達(dá)(部分差異表達(dá)基因見表2), 這些差異表達(dá)基因主要與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子8、 鈣調(diào)熱穩(wěn)定蛋白、 鋅指蛋白264、 信號(hào)識(shí)別蛋白、 蛋白激酶NYDSP15等相關(guān)。
表2 RF+、 RF-患者與對(duì)照組之間部分差異表達(dá)基因(略)
Tab 2 Defferential expression genes among group
3 討論
RA是以對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的系統(tǒng)性自身免疫紊亂疾病, 病程呈慢性、 進(jìn)行性、 破壞性進(jìn)展。其發(fā)病機(jī)制目前尚不明確, 眾多研究表明RA的發(fā)生發(fā)展涉及多種基因的異常變化, 研究RA相關(guān)的基因和蛋白變化, 對(duì)于疾病的診斷、 分類、 治療都具有重要的意義。既往文獻(xiàn)研究表明: CD4+T淋巴細(xì)胞是自身免疫中的重要反應(yīng)細(xì)胞, 在RA發(fā)病中有重要作用[5, 6], RA患者T細(xì)胞亞群中CD4+T淋巴細(xì)胞比例及克隆擴(kuò)增能力均有所改變[7, 8]。因此選取RA患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞作為研究的對(duì)象進(jìn)行觀察?;蛐酒夹g(shù)經(jīng)過10余年的發(fā)展已日益成熟, 它能夠高通量、 高效率、 低能耗的對(duì)生物學(xué)信息進(jìn)行分析處理, 它能夠在1次實(shí)驗(yàn)中篩選出疾病的大量相關(guān)基因群, 檢出疾病發(fā)生發(fā)展的決定基因?;谌绱藘?yōu)點(diǎn)的考慮, 我們引入基因芯片技術(shù)對(duì)RA的發(fā)病機(jī)制從基因水平進(jìn)行研究和探討。
RF異常變化是RA免疫功能異常的重要表現(xiàn), 也是診斷和估計(jì)RA愈后的常用參考指標(biāo)。通常所說的RF是指采用乳膠凝集試驗(yàn)測(cè)得的IgMRF, 但其在RA患者陽(yáng)性率為60%~80%, 特異性較差[9, 10]。在芯片檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)RF+與RF-患者之間有55條基因表達(dá)具有顯著性差異, 提示RF+與RF-患者之間確實(shí)存在基因組水平的差異表達(dá)。這些差異的基因涉及核苷酸糖、 氨基糖、 天冬氨酸等物質(zhì)的代謝途徑, 以及細(xì)胞因子受體、 信號(hào)傳導(dǎo)等多種生物學(xué)途徑。對(duì)這些基因的功能檢索發(fā)現(xiàn)它們參與了細(xì)胞生長(zhǎng)、 生理過程、 分子結(jié)合、 催化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程。而由表2發(fā)現(xiàn): 與對(duì)照組健康人比較表達(dá)基因主要涉及有機(jī)酸代謝、 酶類活性調(diào)控、 生長(zhǎng)過程調(diào)節(jié)、 細(xì)胞增殖抑制、 跨膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)以及部分特定酶活性調(diào)節(jié)等。將表1與表2中差異基因進(jìn)行比對(duì), 發(fā)現(xiàn)只有4個(gè)差異基因表達(dá)是相同的, 這個(gè)結(jié)果反映了RA患者同正常對(duì)照之間及RA患者不同RF型之間的基因差異表達(dá), 存在各自的基因表達(dá)譜基礎(chǔ)。
利用基因芯片技術(shù)和生物信息學(xué)技術(shù)分析基因在全局、 系統(tǒng)水平的調(diào)控機(jī)制是當(dāng)前功能基因組學(xué)的重要研究手段, 它明顯優(yōu)于過去的單一基因研究模式, 可以在整體基因組的水平對(duì)基因的表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)機(jī)制, 進(jìn)行系統(tǒng)全面的分析[11]。臨床的RA患者中表現(xiàn)為不同RF型很常見, 但是相關(guān)的基礎(chǔ)研究卻不多見。此次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果從基因組學(xué)的角度反映出不同RF型RA患者之間存在基因表達(dá)譜的差異, 而差異基因主要與免疫應(yīng)答過程相關(guān), 今后可以圍繞具體的差異表達(dá)基因進(jìn)行分析, 找出兩型患者的特征基因, 從而提高RF對(duì)RA臨床診斷的特異性,
具有一定的臨床意義。
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級(jí)別:統(tǒng)計(jì)源期刊
榮譽(yù):Caj-cd規(guī)范獲獎(jiǎng)期刊
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