表觀遺傳學(xué)的研究意義精選(九篇)

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第1篇：表觀遺傳學(xué)的研究意義范文

    1 DNA甲基化和組蛋白乙?；?/p>

    1.1 DNA甲基化 DNA甲基化是指在DNA復(fù)制以后,在DNA甲基化酶的作用下,將S-腺苷甲硫氨酸分子上的甲基轉(zhuǎn)移到DNA分子中胞嘧啶殘基的第5位碳原子上,隨著甲基向DNA分子的引入,改變了DNA分子的構(gòu)象,直接或通過(guò)序列特異性甲基化蛋白、甲基化結(jié)合蛋白間接影響轉(zhuǎn)錄因子與基因調(diào)控區(qū)的結(jié)合。目前發(fā)現(xiàn)的DNA甲基化酶有兩種:一種是維持甲基轉(zhuǎn)移酶;另一種是重新甲基轉(zhuǎn)移酶。

    1.2 組蛋白乙?；?染色質(zhì)的基本單位為核小體,核小體是由組蛋白八聚體和DNA纏繞而成。組蛋白乙酰化是表觀遺傳學(xué)修飾的另一主要方式,它屬于一種可逆的動(dòng)態(tài)過(guò)程。

    1.3 DNA甲基化與組蛋白乙酰化的關(guān)系 由于組蛋白去乙?；虳NA甲基化一樣,可以導(dǎo)致基因沉默,學(xué)者們認(rèn)為兩者之間存在串?dāng)_現(xiàn)象。

    2 表觀遺傳學(xué)修飾與惡性腫瘤耐藥

    2.1 基因下調(diào)導(dǎo)致耐藥 在惡性腫瘤中有一些抑癌基因和凋亡信號(hào)通路的基因通過(guò)表觀遺傳學(xué)修飾的機(jī)制下調(diào),并與化療耐藥有關(guān)。其中研究比較確切的一個(gè)基因是hMLH1,它編碼DNA錯(cuò)配修復(fù)酶。此外,由于表觀遺傳學(xué)修飾造成下調(diào)的基因,均可導(dǎo)致惡性腫瘤耐藥。

    2.2 基因上調(diào)導(dǎo)致耐藥 在惡性腫瘤中,表觀遺傳學(xué)修飾的改變也可導(dǎo)致一些基因的上調(diào),包括與細(xì)胞增殖和存活相關(guān)的基因。上調(diào)基因FANCF編碼一種相對(duì)分子質(zhì)量為42000的蛋白質(zhì),與腫瘤的易感性相關(guān)。2003年,Taniguchi等證實(shí)在卵巢惡性腫瘤獲得耐藥的過(guò)程中,FANCF基因發(fā)生DNA去甲基化和重新表達(dá)。另一個(gè)上調(diào)基因Synuclein-γ與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。同樣,由表觀遺傳學(xué)修飾導(dǎo)致的MDR-1基因的上調(diào)也參與卵巢惡性腫瘤耐藥的形成。

    3 表觀遺傳學(xué)修飾機(jī)制在腫瘤治療中的應(yīng)用

    3.1 DNA甲基化抑制劑 目前了解最深入的甲基化抑制劑是5-氮雜脫氧胞苷(5-aza-dc)。較5-氮雜胞苷(5-aza-C)相比,5-aza-dc首先插入DNA,細(xì)胞毒性比較低,并且能夠逆轉(zhuǎn)組蛋白八聚體中H3的第9位賴(lài)氨酸的甲基化。有關(guān)5-aza-dc治療卵巢惡性腫瘤的體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,它能夠恢復(fù)一些沉默基因的表達(dá),并且可以恢復(fù)對(duì)順柏的敏感性,其中最引人注目的是hMLH1基因。有關(guān)地西他濱(DAC)治療的臨床試驗(yàn),研究結(jié)果顯示,結(jié)果顯示:DAC是一種有效的治療耐藥性復(fù)發(fā)性惡性腫瘤的藥物。 3.2 HDAC抑制劑 由于組蛋白去乙?；腔虺聊牧硪粰C(jī)制,使用HDAC抑制劑(HDACI)是使表觀遺傳學(xué)修飾的基因重新表達(dá)的又一策略。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu),可將HDACI分為短鏈脂肪酸類(lèi)、氯肟酸類(lèi)、環(huán)形肽類(lèi)、苯酸胺類(lèi)等4類(lèi)。丁酸苯酯(PB)和丙戊酸(VPA)屬短鏈脂肪酸類(lèi)。PB是臨床前研究最深入的一種HDACI,在包括卵巢惡性腫瘤在內(nèi)的實(shí)體腫瘤(21例)Ⅰ期臨床試驗(yàn)中有3例患者分別有4~7個(gè)月的腫瘤無(wú)進(jìn)展期,其不良反應(yīng)是短期記憶缺失、意識(shí)障礙、眩暈、嘔吐。因此,其臨床有效性仍有待于進(jìn)一步在Ⅰ、Ⅱ期臨床試驗(yàn)中確定。在VPA的臨床試驗(yàn)中,Kuendgen等在對(duì)不同類(lèi)型血液系統(tǒng)腫瘤中使用VPA進(jìn)行了Ⅱ期臨床試驗(yàn),結(jié)果顯示,不同的患者有效率差異甚遠(yuǎn)。辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)是氯肟酸類(lèi)中研究較深入的一種HDACI。其研究表明,體內(nèi)使用安全劑量SAHA時(shí),可有效抑制生物靶點(diǎn),發(fā)揮抗腫瘤活性。大量體外研究結(jié)果顯示,聯(lián)合使用DNA甲基化抑制劑和HDACI會(huì)起到更明顯的協(xié)同作用。

    3.3 逆轉(zhuǎn)耐藥的治療 Balch等使用甲基化抑制劑—5-aza-dc或zebularine處理卵巢惡性腫瘤順柏耐藥細(xì)胞后給予順柏治療,發(fā)現(xiàn)此細(xì)胞對(duì)順柏的敏感性分別增加5、16倍。在臨床試驗(yàn)中,Oki等將DAC和伊馬替尼(imatinib)聯(lián)合使用治療白血病耐藥患者,結(jié)果說(shuō)明,應(yīng)用表觀遺傳學(xué)機(jī)制治療惡性腫瘤確實(shí)可以對(duì)化療藥物起到增敏作用,并且在一定范圍內(nèi)其療效與體內(nèi)表觀遺傳學(xué)的改變呈正比。Kuendgen和Pilatrino等對(duì)HDACI和化療藥物的給藥順序進(jìn)行研究,結(jié)果顯示,在使用VPA達(dá)到一定血清濃度時(shí)加用全反式維甲酸可增加復(fù)發(fā)性髓性白血病和骨髓增生異常綜合征患者的臨床緩解率,這可能與VPA引起的表觀遺傳學(xué)改變?cè)黾踊颊邔?duì)藥物的敏感性有關(guān)。

    4 展望

    總的來(lái)說(shuō),應(yīng)用表觀遺傳學(xué)修飾機(jī)制治療腫瘤具有良好的應(yīng)用前景,與傳統(tǒng)化療藥物聯(lián)合來(lái)逆轉(zhuǎn)耐藥,將給攻克惡性腫瘤等疾病帶來(lái)新的希望。

    參 考 文 獻(xiàn)

第2篇：表觀遺傳學(xué)的研究意義范文

表觀遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，基因及其表達(dá)的遺傳性改變不僅僅是指基因突變或基因多樣性等DNA序列的變化。已知的三種可調(diào)節(jié)基因表達(dá)的表觀遺傳學(xué)改變主要是：基因組DNA的甲基化，組蛋白修飾，非編碼RNA的調(diào)節(jié)（如microRNA）。上述機(jī)制均涉及外在因素在蛋白質(zhì)編碼序列不變的情況下仍可調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄[4]。表觀遺傳學(xué)調(diào)節(jié)機(jī)制存在個(gè)體及組織差異性，并且可以隨年齡增長(zhǎng)、環(huán)境及疾病狀態(tài)的改變而變化。表觀基因組在基因組表達(dá)過(guò)程中起關(guān)鍵作用，個(gè)體間基因表達(dá)的不同造成藥物不同的反應(yīng)性，這可能是通過(guò)表觀遺傳學(xué)改變進(jìn)行調(diào)節(jié)的。因此，目前認(rèn)為表觀遺傳學(xué)改變可以幫助解釋基因突變?cè)谒幬锓磻?yīng)中的作用，繼而在臨床醫(yī)學(xué)中發(fā)揮作用，這一迅速崛起的新學(xué)科稱(chēng)為表觀遺傳藥理學(xué)。個(gè)體間藥物的反應(yīng)性不同，該學(xué)科不僅研究表觀遺傳因子在這一過(guò)程中的作用，而且旨在開(kāi)發(fā)新的藥物靶點(diǎn)[5]。筆者認(rèn)為表觀遺傳藥理學(xué)與遺傳藥理學(xué)將共同在藥理學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)中發(fā)揮重要作用。目前為止，表觀遺傳藥理學(xué)的大多數(shù)研究集中于腫瘤學(xué)領(lǐng)域，例如，研究細(xì)胞色素p450在個(gè)體間表達(dá)的差異。幸運(yùn)的是，表觀遺傳學(xué)修飾的作用已被應(yīng)用于解釋其他復(fù)雜并且多源的現(xiàn)象，應(yīng)用的范圍越來(lái)越廣。在這里，筆者總結(jié)了表觀遺傳修飾在心衰及心血管疾病治療方面最新的研究。

1表觀遺傳修飾與心力衰竭

1.1組蛋白的修飾

龐大的真核生物基因組在高度保守的組蛋白的作用下得到了緊密的壓縮。在核小體中，基因組DNA圍繞核心組蛋白（核心組蛋白H2A、H2B、H3、H4各兩組）折疊、壓縮，形成了染色體的基本單位?；蚪MDNA與染色體蛋白的相互作用有助于轉(zhuǎn)錄因子向靶基因片段聚集，從而調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活性[6]。通過(guò)這種機(jī)制，核小體利用其核心組蛋白的共價(jià)修飾傳遞表觀遺傳學(xué)信息。這些修飾包括組蛋白乙?；⒓谆⒘姿峄?、泛素化及SUMO化修飾。核心組蛋白的氨基末端從染色質(zhì)絲上伸出來(lái)，與DNA或其他組蛋白、蛋白質(zhì)等相互作用。該末端上的賴(lài)氨酸、精氨酸殘基是組蛋白修飾的主要靶點(diǎn)。多數(shù)研究旨在了解賴(lài)氨酸乙?；⒓谆淖饔?。事實(shí)證明，賴(lài)氨酸的乙?；饔弥饕c染色質(zhì)親和力及轉(zhuǎn)錄相關(guān)，而賴(lài)氨酸的甲基化作用取決于何種殘基被修飾。有趣的是，正如Mano所總結(jié)的那樣，組蛋白乙酰化的調(diào)控與心肌肥厚相關(guān)。去氧腎上腺素可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大，這一過(guò)程需要乙酰基轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的組蛋白乙?；?。與此結(jié)果相一致的研究是針對(duì)Ⅱ類(lèi)組蛋白去乙?；福℉DACs）5、9的研究，其通過(guò)抑制心肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2（MEF2）的活性進(jìn)一步阻礙致肥厚基因（pro-hypertrophicgenes）的表達(dá)來(lái)發(fā)揮抗肥厚的作用。與此相反，Ⅰ類(lèi)HDACs具有相當(dāng)強(qiáng)的致肥厚作用，其通過(guò)調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇三磷酸酰胺磷酸酯酶的表達(dá)發(fā)揮作用。這意味著，HDACs在多水平上控制肌肉細(xì)胞的體積。

1.2DNA甲基化

在真核生物中，DNA甲基化是通過(guò)將甲基團(tuán)轉(zhuǎn)移到核苷酸胞嘧啶環(huán)的5''''位碳原子上完成的。在哺乳動(dòng)物體內(nèi)，DNA甲基化主要發(fā)生在基因的5''''-CG-3''''序列，也指的是CpG雙核苷酸；人體內(nèi)，大約70%的CpGs發(fā)生甲基化。另一方面，未甲基化的CpGs存在于許多基因的5''''端調(diào)控區(qū)域，以CpG島的形式出現(xiàn)。與其他DNA區(qū)域相比，CpG雙核苷酸在CpG島出現(xiàn)的概率較高。人體內(nèi)CpG島甲基化的不同是表觀遺傳學(xué)改變的組成部分。DNA胞嘧啶甲基化有助于局部轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物的結(jié)合，其與組蛋白修飾共同在局部及整個(gè)基因組中影響染色體的結(jié)構(gòu)。因此，DNA甲基化的一個(gè)重要作用是調(diào)控基因的表達(dá)。在這方面，CpG島超甲基化可以使基因沉默，而低甲基化使基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄。有人認(rèn)為，甲基化是一種穩(wěn)定遺傳的修飾，但同時(shí)它也受到環(huán)境因素的影響。如小鼠野鼠色基因位點(diǎn)，可以受到其上游轉(zhuǎn)座子甲基化狀態(tài)的影響。從遺傳角度來(lái)講，完全相同的親代其野鼠色基因不同的甲基化狀態(tài)可使得后代出現(xiàn)不同的毛色[7]。最近，Kao等[8]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DNA甲基化在心衰特定的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮作用。他們發(fā)現(xiàn)促炎癥基因TNF-α可下調(diào)肌漿網(wǎng)Ca2+-ATPase（SERCA2A）的表達(dá)，這是通過(guò)增強(qiáng)SERCA2A啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)完成的。Movassagh等[9]發(fā)現(xiàn)，在心肌病及人類(lèi)心肌組織形成時(shí)甲基化的狀態(tài)是不同的。而且，他們鑒別出三個(gè)基因位點(diǎn)（IECAM1、PECAM1、AMOTL2），在不同的心臟樣本中，位點(diǎn)甲基化狀態(tài)與基因表達(dá)的調(diào)控密切相關(guān)。

1.3MicroRNAs

MicroRNAs是短的雙鏈RNA分子，來(lái)源于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中較大的RNA前體，其可以在基因轉(zhuǎn)錄后對(duì)基因表達(dá)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。miRNAs可以對(duì)30%～50%的蛋白質(zhì)編碼基因進(jìn)行調(diào)控，這一過(guò)程主要是通過(guò)與mRNA3''''端未轉(zhuǎn)錄區(qū)域的堿基對(duì)進(jìn)行互補(bǔ)結(jié)合，繼而干擾轉(zhuǎn)錄，靶mRNAs可降解或暫時(shí)沉默[10]。miRNAs調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)是非常復(fù)雜的，多種miR-NAs可以作用于同一基因，不同基因也可受到同一種miR-NAs的調(diào)節(jié)。miRNAs的表達(dá)具有組織、疾病特異性。近年來(lái)，多種病理狀態(tài)下的miRNA分子標(biāo)記已被檢測(cè)出來(lái)，如各種類(lèi)型的腫瘤以及多種心血管疾病[11]。越來(lái)越多的證據(jù)表明，miRNAs與基本的細(xì)胞功能密切相關(guān)。目前，miRNAs與心衰的關(guān)系已得到明確，在過(guò)去的幾年中，該領(lǐng)域的報(bào)道層出不窮。對(duì)心血管疾病的研究主要集中于兩種心臟組織特異表達(dá)的miRNA家族（miRNA-1/miR-NA-133、miRNA-208）。多項(xiàng)研究顯示，miRNA在健康、高血壓以及不同病因所導(dǎo)致的人、小鼠、大鼠衰竭的心臟中均有表達(dá)，Divakaran等[12]發(fā)現(xiàn)心臟特異性的miRNA-208不僅可調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞肥大、纖維化同時(shí)可在應(yīng)激、甲退時(shí)調(diào)節(jié)β-肌球蛋白重鏈（β-MHC）的表達(dá)。這種miRNA由α-MHC基因的內(nèi)含子編碼。該基因編碼α-MHC及一種主要的心肌收縮蛋白，使心臟變大，在應(yīng)激以及激素信號(hào)作用下通過(guò)miR-NA-208及其作用位點(diǎn)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。再者，定向刪除心肌特異性的miRNA，miRNA-1-2，揭示了它們?cè)谛呐K中的多種功能，包括調(diào)節(jié)心臟的形態(tài)發(fā)生、電信號(hào)傳導(dǎo)及細(xì)胞周期的調(diào)控。Thum等[13]發(fā)現(xiàn)，受損心肌中miRNA標(biāo)記與胚胎心中miRNA表達(dá)的類(lèi)型極為相似，這說(shuō)明受損心肌中重啟了胚胎基因的表達(dá)程序。Thum等[13]另一個(gè)發(fā)現(xiàn)是miRNA-21可以調(diào)控ERK-MAP激酶途徑，這種調(diào)控在心臟成纖維細(xì)胞中尤為明顯，心肌細(xì)胞中卻沒(méi)有這種表現(xiàn)，這可以影響到心臟的結(jié)構(gòu)及功能。在成纖維細(xì)胞中，miRNA-21水平的增高可通過(guò)抑制特定基因來(lái)激活ERK激酶，經(jīng)由這種機(jī)制，miRNA-21調(diào)節(jié)了間質(zhì)纖維化、心肌肥厚。上述研究揭示了在心臟成纖維細(xì)胞中，基因調(diào)節(jié)的另一種方式是在miRNA介導(dǎo)的旁分泌水平上進(jìn)行的。miRNA在心臟肥厚反應(yīng)中的意義得到了進(jìn)一步的研究，miRNA成為基因調(diào)控的主要調(diào)節(jié)因子。到目前為止，miRNA已被證實(shí)不僅可以影響心肌，還可以影響心臟電信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)節(jié)血管再生[14]。

2表觀遺傳篩選方法

表觀基因組學(xué)示意圖不是固定的，它因細(xì)胞類(lèi)型、時(shí)間的不同而不同，并且可在生理學(xué)、病理學(xué)、藥物作用情況下發(fā)生改變。因此，作為人類(lèi)基因組計(jì)劃的后續(xù)工程，表觀基因組測(cè)序是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)。雖然判斷基因組序列的表觀遺傳學(xué)狀態(tài)是比較容易完成的，描繪整個(gè)表觀基因組需要對(duì)數(shù)十個(gè)基因組進(jìn)行測(cè)序，覆蓋一個(gè)有機(jī)體在生命不同階段的所有細(xì)胞類(lèi)型。亞硫酸氫鹽測(cè)序法是標(biāo)測(cè)DNA甲基化類(lèi)型最為準(zhǔn)確的方法?；蚪MDNA與亞硫酸氫鈉相作用，導(dǎo)致未甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變。為觀察特定基因的甲基化狀態(tài)，用特異性引物對(duì)目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，隨后對(duì)產(chǎn)物測(cè)序。在序列中，甲基化的胞嘧啶被標(biāo)記為Cs，未甲基化的胞嘧啶為T(mén)s。近來(lái)出現(xiàn)了多個(gè)對(duì)甲基化進(jìn)行定位的全基因組研究方法，它們都是以甲基化和未甲基化的CpGs對(duì)限制性?xún)?nèi)切酶的敏感性不同為基本原理的。限制長(zhǎng)度的基因組掃描利用兩種酶雙酶切DNA，一種是頻繁切割的甲基化非敏感性限制內(nèi)切酶，另一種是罕見(jiàn)的甲基化敏感性的酶如Not1，這種酶只有在非甲基化狀態(tài)時(shí)才可以酶切所識(shí)別的位點(diǎn)。還有一種完全不同全基因組研究方法是利用DNA芯片技術(shù)，它可以一次性標(biāo)測(cè)成千上萬(wàn)的CpG島的甲基化狀態(tài)。這種方法可以用來(lái)識(shí)別CpG島，相對(duì)于正常的調(diào)控過(guò)程來(lái)說(shuō)，CpG島在腫瘤組織中發(fā)生甲基化。亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的替代方法是ChIP-seq方法（一種與測(cè)序相結(jié)合的染色質(zhì)免疫沉淀方法）。通過(guò)免疫共沉淀技術(shù)使得目的蛋白與DNA發(fā)生交聯(lián)，然后對(duì)DN段進(jìn)行基因組測(cè)序。這一方法可以幫助識(shí)別任何DNA相關(guān)蛋白的DNA結(jié)合位點(diǎn)。該技術(shù)還可以提供組蛋白修飾的信息，如乙?；⒓谆?、磷酸化、泛素化、SUMO化修飾。對(duì)ChIP技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)得到的DCS方法，是將ChIP與消減式PCR進(jìn)行偶聯(lián)。該方法旨在避免基因組片段與芯片雜交后產(chǎn)生非特異性信號(hào)。以同樣的方式可以檢測(cè)人體病理狀態(tài)下miRNA的作用，大多數(shù)研究是利用高通量的方法分析臨床病例中總miRNA的表達(dá)情況。高通量技術(shù)是以miRNA基因芯片和real-timeRCP為代表的。盡管分子間的差別給這些技術(shù)帶來(lái)了巨大的挑戰(zhàn)，但miRNA芯片最大的優(yōu)點(diǎn)是具有很高的特異性，而缺陷是其敏感性較低。

3藥物可以改變表觀遺傳狀態(tài)

表觀遺傳學(xué)改變正常及疾病狀態(tài)下的表型，這可能意味著充分理解和調(diào)控表觀基因組對(duì)于人類(lèi)常見(jiàn)疾病的防治具有重要意義。表觀遺傳學(xué)為我們提供了一個(gè)重要的窗口，來(lái)認(rèn)識(shí)環(huán)境與基因在疾病發(fā)生過(guò)程中的相互作用以如何調(diào)節(jié)這些作用達(dá)到改善人類(lèi)健康的目的。miRNA派生的反義寡核苷酸是單鏈RNA分子，對(duì)其進(jìn)行化學(xué)修飾可能是針對(duì)致病miRNA新的方法。但是這種方法困難重重，miRNA屬于密切相關(guān)的家族，且很難合成針對(duì)每一種miRNA的反義寡核苷酸。再者，一個(gè)單獨(dú)的miRNA可針對(duì)多種基因發(fā)揮作用，它們之中可能含有對(duì)心肌有益的分子。在這方面，寡核苷酸的化學(xué)修飾可能會(huì)特異性破壞miRNA與單個(gè)mRNA的作用，這可能是疾病治療良好的備選方案。每一種miRNA可以以不同的強(qiáng)度針對(duì)成百上千的基因發(fā)揮作用，所以在體內(nèi)miRNA修飾的最終作用尚不明了。最終，將miRNA拮抗劑應(yīng)用于臨床領(lǐng)域?qū)⒚媾R很多困難，這與我們?cè)诨蛑委煼矫嫠龅降臉O為相似，如導(dǎo)入方式、載體、特異性以及毒性等問(wèn)題[15]。至少在理論上，針對(duì)特異性miRNA的方法將來(lái)可能是治療缺血性心臟病、心肌肥厚、心衰、血管再生、離子通道病的有效手段，可控制心衰的發(fā)展。另一種方法可能是將靶DNA甲基化。一些影響基因組DNA甲基化的化學(xué)合成劑已經(jīng)應(yīng)用于臨床，例如5-氮胞嘧啶、抑制甲基轉(zhuǎn)移酶的氮胞嘧啶可以使DN段脫氨基。其它藥物是通過(guò)阻礙甲基化酶的活性而發(fā)揮抑制甲基化作用。更多信息可參照Gomez等[16]的文章。除了要開(kāi)發(fā)可以調(diào)節(jié)DNA甲基化的藥物外，還需要設(shè)計(jì)可以影響組蛋白修飾的藥物。在抗腫瘤藥物的發(fā)展過(guò)程中，組蛋白去乙?；福℉DAC）抑制劑占據(jù)著重要地位，它可以通過(guò)逆轉(zhuǎn)與腫瘤相關(guān)的異常表觀遺傳改變，繼而發(fā)揮作用。已有證據(jù)表明，在心肌肥厚時(shí)，HDAC抑制劑可修復(fù)基因表達(dá)程序。Gallo等證明體外試驗(yàn)中，曲古霉素A、丁酸鈉可延緩心臟肥厚。

4表觀遺傳學(xué)和環(huán)境

眾所周知，環(huán)境因素如毒素、飲食可以影響DNA甲基化和染色質(zhì)修飾，并且可遺傳給下一代。雌激素、抗雄激素類(lèi)物質(zhì)可改變DNA甲基化狀態(tài)降低男性的生育能力，這也是可遺傳的。該假說(shuō)認(rèn)為，環(huán)境因素可以改變表觀遺傳學(xué)標(biāo)記和基因表達(dá)形式，這可能在人類(lèi)疾病研究中具有重要意義。常見(jiàn)疾病大多受到基因和環(huán)境因素的雙重影響，環(huán)境可誘導(dǎo)表觀遺傳結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，進(jìn)而將基因和環(huán)境因素聯(lián)系起來(lái)[17]。年齡在基因與環(huán)境相互作用中發(fā)揮重要作用。常見(jiàn)病的發(fā)病率隨著年齡的增加不斷增高，這與在人的一生中表觀遺傳學(xué)改變不斷累積有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于年輕者而言，年長(zhǎng)的同卵雙胞胎體內(nèi)總DNA甲基化及組蛋白H3K9乙酰化的水平較高，但該研究沒(méi)有檢測(cè)同一個(gè)體中表觀遺傳學(xué)改變隨時(shí)間變化的情況。

第3篇：表觀遺傳學(xué)的研究意義范文

【摘要】

目的RAS相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白1A基因（RASassociateddomainfamily1Agene，RASSF1A）啟動(dòng)子區(qū)超甲基化介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄失活在卵巢癌中頻見(jiàn)，可作為卵巢癌診治過(guò)程中有意義的分子生物學(xué)指標(biāo)，RAS相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白2A基因（RASassociateddomainfamily2Agene，RASSF2A）與RASSF1A同源，其基因異常甲基化在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究探討上皮性卵巢癌組織RASSF2A甲基化水平，并分析其臨床意義及高甲基化與mRNA表達(dá)情況的相關(guān)性。方法選擇2013－10－01－2014－12－31聊城市人民醫(yī)院手術(shù)治療的50例上皮性卵巢癌、27例交界性上皮性卵巢腫瘤和20例良性上皮性卵巢腫瘤患者，應(yīng)用甲基化特異性PCR（MSP）檢測(cè)卵巢腫瘤組織中RASSF2A基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)，采用RT－PCR檢測(cè)其mRNA表達(dá)水平。采用5－氮雜2′－脫氧胞苷（5－aza－dC）對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3、3AO進(jìn)行去甲基化干預(yù)實(shí)驗(yàn)，并檢測(cè)藥物作用前后RASSF2A基因啟動(dòng)子甲基化及其mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果RASSF2A基因mRNA在良性上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)陽(yáng)性率為95．00％（19／20），交界性上皮性卵巢腫瘤為59．26％（16／27），上皮性卵巢癌組織為34．00％（17／50），表達(dá)強(qiáng)度依次下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2＝21．855，P＜0．001。RASSF2A基因啟動(dòng)子在良性上皮性卵巢腫瘤組織中的甲基化率為0（0／20），交界性上皮性卵巢腫瘤為22．22％（6／27），上皮性卵巢癌組織為46．00％（23／50），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2＝15．474，P＜0．001。RASSF2A甲基化水平與卵巢癌患者的年齡、病理類(lèi)型、臨床分期、組織分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性。RASSF2A基因甲基化與其mRNA的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，甲基化陽(yáng)性組織的mRNA表達(dá)水平明顯低于甲基化陰性組織。5－aza－dC藥物作用后，卵巢癌細(xì)胞株中RASSF2A基因甲基化被逆轉(zhuǎn)，而其基因表達(dá)明顯升高。結(jié)論RASSF2A啟動(dòng)子區(qū)高甲基化導(dǎo)致的基因表達(dá)沉默與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】

上皮性卵巢癌；甲基化；RAS相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白2A基因；基因檢測(cè)

上皮性卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)中惡性程度最高和預(yù)后最差的腫瘤，其病死率居?jì)D科惡性腫瘤首位［1］。大量研究已證實(shí)，RAS相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白1A基因（RASassociateddomainfamily1Agene，RASSF1A）啟動(dòng)子區(qū)超甲基化介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄失活是卵巢癌中的頻發(fā)事件，可作為卵巢癌診治過(guò)程中有意義的分子生物學(xué)指標(biāo)［2－4］。與RASSF1A具有高度同源性的RAS相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白1A基因（RASassociateddomainfamily2Agene，RASSF2A）異常甲基化在多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究通過(guò)RT－PCR和MSP方法檢測(cè)良性上皮性卵巢腫瘤、交界性上皮性卵巢腫瘤和上皮性卵巢癌組織及卵巢癌細(xì)胞株中RASSF2AmRNA的表達(dá)及其啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)，分析RASSF2A啟動(dòng)子甲基化與其mRNA的表達(dá)以及卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系，探討RASSF2A啟動(dòng)子區(qū)甲基化在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1材料與方法

1．1標(biāo)本來(lái)源收集2013－10－01－2014－12－31聊城市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的上皮性卵巢癌患者50例，交界性上皮性卵巢腫瘤27例，良性上皮性卵巢腫瘤20例。所有組織標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)確診，所有患者術(shù)前均未接受任何放化療或激素治療。標(biāo)本采集在離體后10min內(nèi)進(jìn)行，并迅速放入液氮罐保存，后轉(zhuǎn)移至－80℃冰箱保存。上皮性卵巢癌病例中，依據(jù)2006年FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期31例；依據(jù)2003年WHO組織學(xué)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，漿液性腺癌24例，黏液性腺癌16例，子宮內(nèi)膜樣癌10例；高分化10例，中分化15例，低分化25例；有淋巴轉(zhuǎn)移27例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移23例；年齡＜50歲者19例，≥50歲者31例。

1．2細(xì)胞株卵巢癌細(xì)胞株SKOV3和3AO由聊城市人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1．3主要試劑Trizol試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，DNA甲基化試劑盒購(gòu)自德國(guó)Qiagen公司，引物均由上海生工設(shè)計(jì)合成。

1．4實(shí)驗(yàn)方法

1．4．1細(xì)胞培養(yǎng)及藥物處理在37℃、5％CO2及飽和濕度的孵育箱中靜置培養(yǎng)卵巢癌細(xì)胞株，用含10％胎牛血清的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基及時(shí)換液。用終濃度為10μmol／L的5－aza－dC處理卵巢癌細(xì)胞株，常規(guī)換液，保持上述藥物濃度。于藥物連續(xù)作用72h后收集細(xì)胞。

1．4．2RT－PCR檢測(cè)參照Trizol試劑說(shuō)明書(shū)提取組織及細(xì)胞總RNA。測(cè)得其濃度及純度符合實(shí)驗(yàn)要求后，取2μL總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。所得cDNA經(jīng)半定量PCR擴(kuò)增。RASSF2A基因上游序列為5′－GCG－CCTAGAACGTGTTTTTC－3′，下游序列為5′－ACT－AGGCGTCCTCACATTGC－3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為563bp。以GAPDH作為內(nèi)參基因，上游為5′－CAA－CGGATTTGGTCGTATT－3′，下游為5′－CACAGTC－TTCTGGGTGGC－3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為166bp。PCR反應(yīng)條件為95℃10min，95℃30s，58℃30s，72℃30s，30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。擴(kuò)增產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠電泳，紫外線(xiàn)下觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1．4．3DNA的提取及亞硫酸鹽修飾采用酚氯仿法提取組織及細(xì)胞總DNA，并對(duì)基因組DNA進(jìn)行亞硫酸鹽修飾，按照甲基化特異性PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。所得產(chǎn)物直接用于PCR擴(kuò)增或保持在－20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1．4．4甲基化特異性PCR使用2對(duì)引物檢測(cè)RASSF2A基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)。甲基化引物正義鏈為5′－GTTCGTCGTCGTTTTTTAGGCG－3′，反義鏈為5′－AAAAACCAACGACCCCCGCG－3′，非甲基化引物正義鏈為5′－AGTTTGTTGTTGTTTTTTA－GGTGG－3′，反義鏈為5′－AAAAAACCAACAACCC－CCACA－3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度均為108bp。反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性10min，95℃變性30s，58℃復(fù)性30s（甲基化）；54℃復(fù)性30s（非甲基化），72℃延伸30s，35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。所得產(chǎn)物電泳后攝像，分析結(jié)果。

1．4．5甲基化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)若僅甲基化引物擴(kuò)增出陽(yáng)性條帶，為完全甲基化；若僅非甲基化引物擴(kuò)增出陽(yáng)性條帶，為非甲基化；若兩者均擴(kuò)增出陽(yáng)性條帶，為部分甲基化。

1．5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13．0分析數(shù)據(jù)。RASSF2A甲基化、mRNA表達(dá)在卵巢腫瘤組織間的差異以及基因甲基化與臨床病理特征等計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或Fishier確切概率法。RASSF2A甲基化及其表達(dá)之間的關(guān)系采用Spearman相關(guān)性分析法。卵巢癌細(xì)胞系中RASSF2AmRNA表達(dá)量比較采用t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0．05。

2結(jié)果

2．1卵巢腫瘤組織RASSF2AmRNA的表達(dá)表1和圖1所示，卵巢良性腫瘤、交界性腫瘤及卵巢癌組織中RASSF2AmRNA表達(dá)率依次降低，分別為95．00％（19／20）、59．26％（16／27）和34．00％（17／50），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2＝21．855，P＜0．001。兩兩比較結(jié)果顯示，卵巢癌組與交界性腫瘤組比較，χ2＝4．568，P＝0．033；卵巢癌組與良性腫瘤組比較，χ2＝21．280，P＜0．001；交界性腫瘤組與良性腫瘤組比較，χ2＝7．719，P＝0．005；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2．2卵巢腫瘤組織RASSF2A基因甲基化水平表1和圖2所示，97例卵巢組織標(biāo)本均成功進(jìn)行了MSP實(shí)驗(yàn)。50例卵巢癌組織標(biāo)本中有13例發(fā)生了部分甲基化，10例完全甲基化，甲基化頻率為46．00％（23／50）；27例交界性卵巢腫瘤中甲基化陽(yáng)性率為22．22％（6／27），其中2例為完全甲基化。而20例良性卵巢腫瘤組織均未擴(kuò)增出甲基化陽(yáng)性條帶，甲基化頻率為0，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2＝15．474，P＜0．001。

2．3RASSF2A基因甲基化與其表達(dá)的相關(guān)性表2所示，RASSF2A基因甲基化狀態(tài)與其mR－NA表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。在RASSF2A基因發(fā)生甲基化的組織中，RASSF2A基因表達(dá)明顯降低，提示RASSF2A基因高甲基化可能是該基因表達(dá)沉默的原因之一。

2．4甲基化狀態(tài)與卵巢癌臨床病理特征相關(guān)性表3所示，RASSF2A甲基化程度與卵巢癌患者的年齡、病理類(lèi)型、臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間無(wú)明顯的相關(guān)性。

2．55－aza－dC作用結(jié)果圖3所示，卵巢癌細(xì)胞株SKOV3和3AO中均檢測(cè)到RASSF2A基因甲基化，經(jīng)去甲基化藥物5－aza－dC作用后，SKOV3細(xì)胞由完全甲基化轉(zhuǎn)變?yōu)榉羌谆?AO細(xì)胞甲基化狀態(tài)被部分逆轉(zhuǎn)。SKOV3和3AO中RASSF2AmRNA表達(dá)水平較低，經(jīng)藥物干預(yù)后，SKOV3（t＝－5．258，P＝0．006）和3AO細(xì)胞株（t＝－3．060，P＝0．038）RASSF2AmRNA表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3討論

近年來(lái)，隨著腫瘤分子生物學(xué)及表觀遺傳學(xué)的發(fā)展，腫瘤抑制基因失活在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用越來(lái)越受到人們的重視。總的來(lái)說(shuō)，其機(jī)制可概括為遺傳學(xué)機(jī)制及表觀遺傳學(xué)機(jī)制，換言之，腫瘤抑制基因功能的失活既可以是不可逆的，即遺傳學(xué)機(jī)制，如基因的突變或染色體的缺失，也可以是可逆的，即表觀遺傳學(xué)機(jī)制，如基因甲基化或組蛋白修飾。與遺傳學(xué)不同，表觀遺傳學(xué)主要研究?jī)?nèi)容不涉及DNA序列的改變，且在細(xì)胞分裂過(guò)程中具有可遺傳的、可逆性的基因組修飾作用［5］。DNA甲基化是哺乳動(dòng)物基因組中最普遍的表觀遺傳學(xué)事件。相對(duì)于Knudson’s的二次打擊學(xué)說(shuō)，基因甲基化僅靠一次打擊就可導(dǎo)致基因失活，腫瘤易感性增加［6］。RASSF2是新近發(fā)現(xiàn)的RASSF家族成員之一，生物信息學(xué)分析顯示，RASSF2與其他成員一樣，也含有RAS相關(guān)域［7］。RASSF2位于人類(lèi)常染色體20p13，有329個(gè)氨基酸的開(kāi)放閱讀框，11個(gè)外顯子。根據(jù)不同的啟動(dòng)子和外顯子選擇剪接，可形成RASSF2A、RASSF2B和RASSF2C3個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄本，其中，RASSF2A是最長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄本，也是唯一一個(gè)含有5′CpG島的轉(zhuǎn)錄本。RASSF2A在卵巢癌組織中發(fā)揮抑癌基因的作用，如抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，阻滯細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡等，是一個(gè)腫瘤抑制基因。本研究分析了RASSF2A基因在上皮性卵巢癌組織中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)及其甲基化水平。RT－PC檢測(cè)結(jié)果顯示，RASSF2A基因表達(dá)水平在良性卵巢腫瘤、交界性腫瘤及卵巢癌組織中依次降低，提示RASSF2A的轉(zhuǎn)錄失活，可能參與了卵巢癌的惡性演進(jìn)過(guò)程，RASSF2A在上皮性卵巢癌中也起到抑癌基因的作用。張嫻等［8］研究結(jié)果顯示，RASSF2A基因甲基化可能參與了宮頸癌的發(fā)生，與宮頸癌的惡性進(jìn)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，良性卵巢腫瘤組織中未發(fā)生RASSF2A啟動(dòng)子區(qū)甲基化，而基因異常甲基化從交界性腫瘤到癌呈逐漸上升的趨勢(shì)，RASSF2A基因甲基化從無(wú)到有，從少到多的現(xiàn)象，說(shuō)明了RASSF2A基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化從卵巢上皮增殖階段就開(kāi)始起作用，與卵巢癌發(fā)生密切相關(guān)。多項(xiàng)研究表明，RASSF2A啟動(dòng)子區(qū)高甲基化與基因表達(dá)沉默有關(guān)［9－11］。本研究結(jié)果表明，在發(fā)生RASSF2A甲基化的組織中，其基因表達(dá)水平明顯下降，兩者呈負(fù)相關(guān)。結(jié)果提示，在卵巢癌中RASSF2A啟動(dòng)子甲基化是導(dǎo)致其低表達(dá)或者表達(dá)缺失的重要原因，這在細(xì)胞試驗(yàn)中也得到驗(yàn)證。應(yīng)用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5－aza－dC對(duì)卵巢癌細(xì)胞株進(jìn)行去甲基化處理后，卵巢癌細(xì)胞株的基因啟動(dòng)子甲基化被逆轉(zhuǎn)，而其mR－NA的表達(dá)水平明顯升高，從而進(jìn)一步證實(shí)了RASSF2A啟動(dòng)子CpG島的異常甲基化在調(diào)節(jié)RASSF2A基因的表達(dá)中發(fā)揮重要作用。研究顯示，RASSF2A基因甲基化程度與宮頸癌、胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)［8，12］，而與胰腺癌和結(jié)直腸癌［9，13］患者臨床病理特征無(wú)關(guān)。另有研究表明，基因啟動(dòng)子甲基化水平與癌癥患者年齡密切相關(guān)［14］。在子宮內(nèi)膜癌的研究中顯示，＞45歲的患者更容易發(fā)生RASSF2A甲基化（P＝0．041）［15］。在結(jié)腸癌和口腔鱗癌中也發(fā)現(xiàn)，RASSF2A基因甲基化程度與年齡相關(guān)［13，16］。在生物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，伴隨著時(shí)間的進(jìn)程，DNA甲基化異常會(huì)不斷呈現(xiàn)，由此認(rèn)為，表觀遺傳學(xué)疾病是一種與年齡相關(guān)性疾病。這在某種程度上解釋了為什么腫瘤多發(fā)生在老年人。檢測(cè)DNA甲基化程度可作為細(xì)胞衰老的標(biāo)志之一。本研究結(jié)果顯示，RASSF2A基因甲基化水平與卵巢癌患者的臨床病理參數(shù)之間無(wú)明顯的相關(guān)性，是上皮性卵巢癌中的早期頻發(fā)事件，隨著患者年齡的增加，RASSF2A基因甲基化有增高的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能上皮性卵巢癌中RASSF2A基因甲基化不是年齡相關(guān)的表觀遺傳學(xué)改變。

綜上所述，RASSF2A啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化是卵巢癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的頻發(fā)事件，是導(dǎo)致卵巢癌中RASSF2A低表達(dá)或表達(dá)缺失的重要原因，其參與了卵巢癌的發(fā)病過(guò)程，并在卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。監(jiān)測(cè)RASSF2A基因啟動(dòng)子CpG島甲基化水平可作為表觀遺傳學(xué)的分子靶標(biāo)，指導(dǎo)卵巢癌的診斷及其預(yù)后判定。

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第4篇：表觀遺傳學(xué)的研究意義范文

[關(guān)鍵詞] 胃癌；遺傳學(xué)；表觀遺傳學(xué)；非編碼RNA；DNA甲基化；組蛋白修飾

[中圖分類(lèi)號(hào)] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2013）07（a）-0043-04

胃癌是消化道最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在全球腫瘤死亡原因中排名第二，其5年生存率在10%左右[1]。胃癌的發(fā)生與發(fā)展是多種因素交互作用的結(jié)果，包括環(huán)境、飲食、遺傳、幽門(mén)螺桿菌感染、慢性炎癥浸潤(rùn)、癌前病變等。隨著人們對(duì)胃癌研究的不斷加深，遺傳因素及表觀遺傳因素已經(jīng)成為研究中的熱點(diǎn)，對(duì)于胃癌的發(fā)病機(jī)制、細(xì)胞免疫與防御、細(xì)胞分化及預(yù)防治療等方面具有十分重要的意義，本文就其研究進(jìn)展做一綜述。

1 表觀遺傳學(xué)

表觀遺傳學(xué)是研究細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，不改變相關(guān)基因的DNA序列而影響相關(guān)基因的表達(dá)，這種改變能通過(guò)有絲分裂和減數(shù)分裂進(jìn)行遺傳的一門(mén)學(xué)科[2-3]。表觀遺傳的變化在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)、預(yù)測(cè)預(yù)后的價(jià)值已經(jīng)得到了證實(shí)[4-7]。表觀遺傳學(xué)的范疇包括DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA的改變等。

1.1 DNA甲基化與胃癌

DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT）的作用下，將甲基由S-腺苷甲硫氨酸轉(zhuǎn)移到胞嘧啶5位碳原子上，形成5-甲基胞嘧啶[8]。胃癌中存在很多癌相關(guān)基因的甲基化，在胃癌形成的各個(gè)階段都能檢測(cè)到DNA甲基化的存在[9]。Cooper等[5]對(duì)包括220份慢性萎縮性胃炎、196份腸上皮生化、134份胃腺瘤、102份不典型性增生和202份胃癌及其癌旁組織和相應(yīng)血液標(biāo)本，采用甲基化特異性聚合酶聯(lián)反應(yīng)（methylation-specific PCR，MSP）檢測(cè)RUNT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3（RUNX3）啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)RUNX3的甲基化水平與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，從萎縮性胃炎（15.9%）到腸上皮生化（36.7%）、胃腺瘤（41.8%）、不典型性增生（54.9%）、胃癌（75.2%），甲基化水平逐漸提高，RUNX3基因甲基化在血清中檢測(cè)到的水平與胃癌組織中的水平顯著一致，表示循環(huán)RUNX3基因甲基化可作為標(biāo)志物檢測(cè)早期胃癌并有望用于胃癌的篩查。

既然檢測(cè)DNA甲基化可能用于胃癌的早期診斷，那么甲基化與胃癌的臨床病理特征、預(yù)后及治療是否存在某種聯(lián)系呢？賈安平等[10]應(yīng)用甲基化特異性PCR（MSP）檢測(cè)74例胃癌組織p16基因的啟動(dòng)子CpG島的甲基化狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中p16基因的甲基化陽(yáng)性率為56.8%，腫瘤分期晚、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率更高。Guo等[11]使用MSP的方法檢測(cè)了92例胃賁門(mén)腺癌RASSF1A基因啟動(dòng)子甲基化的情況，其中54例的出現(xiàn)異常甲基化，隨著胃癌的進(jìn)展，其甲基化率也逐漸增高。表明p16基因及RASSF1A基因甲基化可能與胃癌的病期相關(guān)。姜蕊等[12]在54例胃癌組織中檢測(cè)鈣黏蛋白（E-cadherin）基因的異常甲基化，發(fā)現(xiàn)E-cadherin基因啟動(dòng)子異常甲基化頻率為48.1%，顯著高于癌旁正常組織中的11.11%，并隨疾病進(jìn)展而進(jìn)一步提高。E-cadherin異常甲基化狀態(tài)與患者的性別及年齡均無(wú)關(guān)，而與胃癌的分化程度、病例類(lèi)型、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)。提示胃癌組織中E-cadherin基因甲基化狀態(tài)可幫助判斷胃癌分化程度、進(jìn)展情況，及預(yù)測(cè)預(yù)后。Sugita等[13]又對(duì)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)性胃癌異常甲基化與化療療效相關(guān)性進(jìn)行了研究，分析80例手術(shù)治療后發(fā)生轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的患者，使用氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的化療。發(fā)現(xiàn)存在BNIP3（Bcl-2/adenovirus E1B 19 kDa-interacting protein 3）和DAPK（death-associated protein kinase）基因甲基化的患者總生存期（OS）及無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）較短，且對(duì)化療的反應(yīng)率較低?？梢?jiàn)DNA甲基化與胃癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后之間有著密切的關(guān)系，進(jìn)一步研究DNA甲基化的機(jī)制，全面繪制DNA甲基化譜，可能對(duì)于胃癌的篩查、早期診斷、療效預(yù)測(cè)及預(yù)后判斷有幫助。

1.2 胃癌與組蛋白修飾

組蛋白是存在于真核生物體細(xì)胞染色質(zhì)中的一組進(jìn)化上非常保守的堿性蛋白質(zhì)，含精氨酸和賴(lài)氨酸等堿性氨基酸較多，是由德國(guó)科學(xué)家A.柯塞爾于1834年首先發(fā)現(xiàn)的。常見(jiàn)的組蛋白修飾方式有乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等。研究發(fā)現(xiàn)組蛋白修飾與其他表觀遺傳學(xué)改變共存于胃癌中，現(xiàn)在以乙?；?、甲基化、磷酸化研究最多[14]。

組蛋白磷酸化 組蛋白磷酸化是在組蛋白尾區(qū)加入帶有負(fù)電荷的PO4基團(tuán)，常發(fā)生于真白的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸殘基上，并且是可逆性修飾。其在有絲分裂、細(xì)胞死亡、DNA損傷修復(fù)、DNA復(fù)制和重組過(guò)程中有著直接的作用[15]。Fehri等[16]發(fā)現(xiàn)幽門(mén)螺桿菌可以誘導(dǎo)組蛋白H3絲氨酸10（H3S10）磷酸化水平降低，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，與幽門(mén)螺桿菌誘導(dǎo)胃癌發(fā)生相關(guān)。

1.2.1 組蛋白甲基化 組蛋白甲基化的位點(diǎn)多位于組蛋白H3和H4的精氨酸及賴(lài)氨酸殘基上，其甲基化方式有單甲基化、雙甲基化、三甲基化。其中H3-K4三甲基化的缺失、H3-K9甲基化和H3-K27三甲基化，這些甲基化改變?cè)谀[瘤早期出現(xiàn)并隨腫瘤進(jìn)展變化而改變[17]。這些都與胃癌的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。

1.2.2 組蛋白乙酰化 組蛋白乙?；墙M蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶將乙酰輔酶A乙?；糠洲D(zhuǎn)移到核心組蛋白氨基末端特定賴(lài)氨酸殘基上。一般認(rèn)為組蛋白乙酰化與基因激活相關(guān)，而組蛋白去乙?；c基因沉默或抑制有關(guān)。Mitani等[18]通過(guò)對(duì)29例胃癌組織標(biāo)本的分析，發(fā)現(xiàn)組蛋白H3去乙?；梢砸种埔职┗騪21（WAF1/CIP1）的表達(dá)，而對(duì)乙?；种苿┨幚砗?，胃癌細(xì)胞組蛋白乙?；缴撸瑥亩T導(dǎo)p21（WAF1/CIP1）的表達(dá)上調(diào)。

總之，特定的組蛋白修飾與特定的基因激活或抑制相關(guān)，組蛋白修飾在基因調(diào)控中起著重要作用。進(jìn)一步研究組蛋白修飾及其與基因調(diào)控的關(guān)系，有利于腫瘤發(fā)病機(jī)制研究，開(kāi)發(fā)新的抗腫瘤藥物，例如去乙?；种苿┑取?/p>

1.3 胃癌與非編碼RNA

非編碼RNA是指參與蛋白質(zhì)翻譯過(guò)程，不被翻譯成蛋白質(zhì)的RNA，如tRNA、rRNA、miRNA、snRNA等，而miRNA是目前研究的熱點(diǎn)。miRNA（microRNA）屬于非編碼RNA的一種，是內(nèi)源性非編碼小RNA。miRNA是長(zhǎng)約18-26nt的單鏈RNA分子，起始于pri-miRNA，pri-miRNA在核內(nèi)被Drosha酶復(fù)合體切割為miRNA前體，經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白expoin5的作用下，從核內(nèi)運(yùn)輸?shù)桨|(zhì)，再由Dicer酶進(jìn)一步切割成miRNA[19]。Wu等[20]應(yīng)用RT-PCR的方法檢測(cè)了30例胃癌組織和配對(duì)正常組織的60個(gè)候選miRNA，從中篩選出5個(gè)miRNA（miR-125a-3p， miR-133b， miR-143， miR-195，miR-212），經(jīng)過(guò)ROC分析表明miR-195和miR-212對(duì)于預(yù)測(cè)是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有較高的敏感性和特異性。Brenner等[21]通過(guò)從45例胃癌患者手術(shù)標(biāo)本中提取RNA，再通過(guò)QRT-PCR（Quantitative real-time polymerase chain reaction）的方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-451、miR-199a-3p、miR-195在預(yù)后良好及預(yù)后不良的患者中，表達(dá)存在差異，表達(dá)高的患者復(fù)發(fā)率高、預(yù)后差。miR-451、miR-199a-3p、miR-195可以作為胃癌預(yù)后的預(yù)測(cè)因子。Konishi等[22]對(duì)胃癌患者的血漿檢測(cè)發(fā)現(xiàn)miR-451和miR-486的濃度在術(shù)后分別下降90%和93%，表明miR-451和miR-486可能作為血液學(xué)檢查的手段用以篩查胃癌。

miRNA的種類(lèi)很多，對(duì)胃癌的作用途徑多種多樣，表1列舉了部分miRNA與胃癌的發(fā)生發(fā)展、治療及預(yù)后之間的關(guān)系。隨著對(duì)于miRNA作用機(jī)制的進(jìn)一步深入研究，有望使miRNA成為胃癌診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)的新的生物學(xué)標(biāo)記，還可能使其成為藥物標(biāo)靶或模擬其進(jìn)行新藥研發(fā)，為胃癌治療提供一種新的手段。

2 遺傳學(xué)改變

遺傳學(xué)改變是指基于基因序列改變而導(dǎo)致的基因表達(dá)水平的變化，如基因突變、基因雜合丟失和微衛(wèi)星不穩(wěn)定等。其中尤其以單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）最為常見(jiàn)。SNP影響并改變了某些正常的炎癥過(guò)程、免疫調(diào)節(jié)、DNA合成及修復(fù)等病理生理過(guò)程，而這些變化最終導(dǎo)致胃癌的發(fā)生。

2.1細(xì)胞因子及酶的基因多態(tài)性與胃癌

細(xì)胞因子是免疫細(xì)胞產(chǎn)生的一大類(lèi)能在細(xì)胞間傳遞信息、具有免疫調(diào)節(jié)和效應(yīng)功能的蛋白質(zhì)或小分子多肽。主要包括白介素（IL）、腫瘤壞死因子（TNF）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）、環(huán)氧合酶（COX）等。Guo等[29]通過(guò)分析中國(guó)北方人群胃賁門(mén)腺癌患者的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）基因多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)患者中-509T和869C基因型和等位基因分布較健康人群明顯升高，與非攜帶者相比，攜帶者發(fā)生Ⅲ期和Ⅳ期腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)增加。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-10的-1082G等位基因與胃癌高風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)[30]，Sun等[31]研究發(fā)現(xiàn)，IL-10的基因多態(tài)性分析中-1082G等位基因使胃癌患者發(fā)生惡液質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。宋傳貴等[32]對(duì)福建地區(qū)102例完整隨訪的胃癌患者進(jìn)行MMP-1基因多態(tài)性的基因型鑒定發(fā)現(xiàn)，2G/2G基因型可能是影響福建地區(qū)胃癌患者生存的不良預(yù)后因子之一，與含1G基因型相比，2G/2G等位基因攜帶者發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移的機(jī)會(huì)明顯增大。殷霞麗等[33]通過(guò)對(duì)118例胃癌患者的COX-2基因啟動(dòng)子區(qū)-1195G>A的多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)-1195G>A基因型與腫瘤大小及浸潤(rùn)深度明顯相關(guān)，其中-1195A提示存在腫瘤大、浸潤(rùn)深度深的高風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)與COX-2免疫組化表達(dá)存在顯著相關(guān)性。

2.2 DNA修復(fù)基因多態(tài)性與胃癌

DNA損傷修復(fù)是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，維持基因穩(wěn)定性和細(xì)胞正常功能的中心環(huán)節(jié)主要是DNA修復(fù)能力，如果相關(guān)修復(fù)基因發(fā)生突變，就會(huì)導(dǎo)致整個(gè)基因組DNA修復(fù)能力下降，從而引起細(xì)胞增殖和分化失控，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[34]。Yuan等[35]通過(guò)分析160例胃癌患者與其對(duì)照組的X射線(xiàn)損傷修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（XRCC1）的基因多態(tài)性分布，發(fā)現(xiàn)攜帶XRCC1 194Trp基因型的個(gè)體患胃癌風(fēng)險(xiǎn)增高，可能是由于該變異影響了XRCC1蛋白的修復(fù)功能。

2.3抑癌基因多態(tài)性與胃癌

抑癌基因是一類(lèi)調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制腫瘤表型表達(dá)的基因，可通過(guò)純合缺失或失活而引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。p53基因作為重要的腫瘤抑制基因，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中都具有重要作用。Song等[36]通過(guò)大規(guī)模的病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)p53-72Pro.Pro基因型的個(gè)體患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)增加。而Shirai等[37]的研究也表明該基因型的胃癌化療效果及預(yù)后差、容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

2.4其他基因多態(tài)性與胃癌

除了上述各種遺傳基因多態(tài)性與胃癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，還有多種胃癌易感基因。在中國(guó)人群中研究發(fā)現(xiàn)，前列腺干細(xì)胞抗原基因（PSCA）的rs2294008T等位基因能顯著提高非賁門(mén)胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并且rs2294008T等位基因和rs2976392A等位基因與非賁門(mén)胃癌低分化和高級(jí)別有關(guān)[38]。而最近的一項(xiàng)薈萃分析通過(guò)對(duì)9個(gè)病例對(duì)照研究的分析，表明PCSA的rs2294008T等位基因和rs2976392A等位基因與非賁門(mén)或彌漫性胃癌的易感性有關(guān)[39]。Xu等[40]通過(guò)對(duì)929例中國(guó)胃癌患者超氧化物歧化酶2（SOD2）和谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GSTP1）基因多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)，SOD2的rs4880 CT+CC基因型與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高度相關(guān)，GSTP1的rs1695 GA+GG基因型與腫瘤大小關(guān)系密切，表明SOD2的rs4880 CT+CC基因型與GSTP1的rs1695 GA+GG基因型與胃癌的進(jìn)展及侵襲性相關(guān)，而活性氧（ROS）的代謝途徑可能成為潛在的治療靶點(diǎn)。

2.5遺傳學(xué)改變研究中的一些問(wèn)題

以上論述只是目前已發(fā)現(xiàn)頗具規(guī)模的胃癌易感多態(tài)性基因中的一小部分，然而只有PSCA等少數(shù)幾個(gè)基因與胃癌易感性的關(guān)系較為明確。其主要原因可能為：①目前胃癌關(guān)聯(lián)研究樣本普遍都很小[41]；②不同胃癌類(lèi)型還受到表觀遺傳學(xué)的影響；③不良飲食、生活習(xí)慣和環(huán)境等外在因素促進(jìn)甚至導(dǎo)致胃癌發(fā)生[42]；④胃癌家系成員生活環(huán)境和遺傳背景較一致，基于家系的連鎖分析是鑒定胃癌相關(guān)基因的比較簡(jiǎn)單的方法，但是胃癌家系樣本難以獲得，并且通過(guò)家系定位的致病基因往往是該家族特異的，應(yīng)用到群體中具有一定局限性。

因此盡量使病例同質(zhì)化，采用較大規(guī)模的研究樣本和不同群體的驗(yàn)證，并在分析時(shí)注意不良飲食、生活習(xí)慣及環(huán)境等外在影響因素，將有利于明確胃癌的易感基因。

3 總結(jié)

胃癌的發(fā)生是多基因遺傳和表遺傳共同作用的結(jié)果，通過(guò)研究遺傳和表遺傳改變發(fā)現(xiàn)了很多與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)的因素，它們對(duì)于胃癌的早期診斷及預(yù)后判斷起著至關(guān)重要的作用，而阻斷這些遺傳和表遺傳改變的發(fā)生為胃癌的治療提供了更廣闊的研究和發(fā)展空間。

近年來(lái)的遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)研究主要集中在胃癌的早期診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)方面，但是其中大多數(shù)研究?jī)H針對(duì)單個(gè)位點(diǎn)或者單個(gè)基因多態(tài)性的變化上，很少有研究其相互關(guān)聯(lián)的變化對(duì)胃癌的影響。而且這些檢測(cè)運(yùn)用于臨床前，其敏感性及特異性也有待進(jìn)一步明確。對(duì)于那些被發(fā)現(xiàn)可能成為潛在治療靶點(diǎn)的基因位點(diǎn)，需要更多更大的重復(fù)性研究來(lái)確定它的真實(shí)可靠性，而后才是更深入地去發(fā)現(xiàn)通過(guò)何種手段去阻斷及干預(yù)。隨著研究的不斷深化，基因與基因、基因與環(huán)境之間的相互作用將被更深入地解析，利用基因分析的方法來(lái)評(píng)估個(gè)體胃癌風(fēng)險(xiǎn)，制定更加個(gè)體化的治療方案是未來(lái)研究的方向。

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第5篇：表觀遺傳學(xué)的研究意義范文

關(guān)鍵詞 行為遺傳學(xué)；數(shù)量遺傳學(xué)；分子遺傳學(xué)：基因：人格

分類(lèi)號(hào) B845

1 引言

人格是一個(gè)人獨(dú)特精神面貌的整體反映，是需要、動(dòng)機(jī)、興趣、態(tài)度、價(jià)值觀、氣質(zhì)、性格、能力等多個(gè)方面的整合。它的形成和發(fā)展與遺傳因素息息相關(guān)。然而，人格的遺傳性究竟如何？到底哪些基因在起作用？它們又是如何起作用的？針對(duì)諸如此類(lèi)的問(wèn)題，行為遺傳學(xué)家們?cè)噲D為我們提供有效的解答，并由此形成了一個(gè)重要的研究領(lǐng)域，即人格行為遺傳學(xué)研究。

人格行為遺傳學(xué)研究就是運(yùn)用行為遺傳學(xué)理論和方法來(lái)考察和揭示人格特征（包括人格障礙）和人格差異的遺傳基礎(chǔ)問(wèn)題。它強(qiáng)調(diào)遺傳基因是塑造人格核心特征和造成人格個(gè)別差異的主要因素，但并不忽視環(huán)境的作用，甚至主張人格特征與人格差異是多種基因、多種環(huán)境以及基因與環(huán)境動(dòng)態(tài)交互作用的結(jié)果。早在19世紀(jì)中后期，英國(guó)心理學(xué)家高爾頓（Galton，F(xiàn).）就首先利用家譜法和雙生子法研究了人格差異的遺傳基礎(chǔ)。盡管他的研究因未將遺傳和環(huán)境區(qū)分開(kāi)來(lái)而具有諸多局限，但它“為人類(lèi)行為的變異范圍提供了檔案證明并且說(shuō)明了行為變異存在遺傳基礎(chǔ)”（Plomin，DeFries，McClearn，& McGuffin，2008），是運(yùn)用行為遺傳學(xué)方法研究人格差異的先驅(qū)性嘗試。高爾頓之后的20世紀(jì)，人格的行為遺傳學(xué)研究因行為主義主流范式的盛行而長(zhǎng)期遭到“冷遇”。前者強(qiáng)調(diào)人格的遺傳性，而后者堅(jiān)持環(huán)境論并認(rèn)為人格由社會(huì)化的習(xí)慣決定，兩者的矛盾在這種勢(shì)力不均的情勢(shì)下曾一度不可調(diào)和。

但近幾十年來(lái)，行為主義的逐漸衰落和現(xiàn)代生物學(xué)特別是分子生物學(xué)的飛速發(fā)展分別為人格的行為遺傳學(xué)研究提供了巨大發(fā)展空間和發(fā)展動(dòng)力，并使它由傳統(tǒng)的數(shù)量遺傳學(xué)取向發(fā)展到分子遺傳學(xué)取向。分子遺傳學(xué)取向是發(fā)端于20世紀(jì)初而到20世紀(jì)末才應(yīng)用于人格研究的一種新取向，它在研究方法和研究理念上都較數(shù)量遺傳學(xué)取向具有革命性突破，目前正以驚人的速度發(fā)展著?？梢哉f(shuō)，人格遺傳學(xué)研究進(jìn)入到分子遺傳學(xué)時(shí)代（Johnson，Penke，& Spinath，2011）。不過(guò)，兩種研究取向在基本思路方面各有特色，在具體研究方面都取得了很多有價(jià)值的成果，積極推動(dòng)了人格行為遺傳學(xué)研究的復(fù)興和發(fā)展。

2 數(shù)量遺傳學(xué)取向

人格的數(shù)量遺傳學(xué)（quantitative genetics）研究取向主張運(yùn)用雙生子研究、收養(yǎng)研究等設(shè)計(jì)來(lái)估計(jì)群體中遺傳因素對(duì)人格表現(xiàn)型方差的貢獻(xiàn)率，旨在用數(shù)量化的手段從宏觀上估計(jì)某種人格變異在多大程度上是由遺傳效應(yīng)引起的，并考察遺傳通過(guò)與環(huán)境交互作用或相關(guān)影響人格的方式以及這些效應(yīng)發(fā)生的具體情境。

2.1 人格遺傳率

數(shù)量遺傳學(xué)衡量人格遺傳性大小的核心指標(biāo)是遺傳率（heritability），即在某群體內(nèi)觀測(cè)到的人格總變異中能被遺傳變異解釋的百分比，它既可以揭示遺傳是否影響某種人格特征又可以指明這種影響達(dá)到何種程度。人格遺傳率可以用公式h2=Vg/Vp（其中h2代表人格遺傳率，Vg代表遺傳導(dǎo)致的人格變異，V。代表觀測(cè)到的人格總變異）來(lái)表示，數(shù)值在0～1之間，越接近于0，說(shuō)明變異越少源于遺傳；越接近于1，說(shuō)明變異越多源于遺傳。需要指出的是，遺傳率估計(jì)具有如下三個(gè)特點(diǎn)：第一，它具有群體特異性，僅僅適用于解釋樣本或群體的人格差異，而不適用于描述個(gè)體人格的遺傳性；第二，它假定遺傳因子和環(huán)境因子之間不存在相關(guān)或交互作用；第三，它會(huì)因測(cè)量方法和計(jì)算方法不同而有細(xì)微差別（郭永玉，2005；Larsen & Buss，2009）。

2.2 數(shù)量遺傳學(xué)設(shè)計(jì)

為了把基因和環(huán)境對(duì)人格差異的貢獻(xiàn)分離開(kāi)來(lái)，數(shù)量遺傳學(xué)家采用了家族研究、雙生子研究和收養(yǎng)研究等多種研究設(shè)計(jì)。家族研究是最早用于人格研究的行為遺傳學(xué)方法，但它不能將遺傳與共同環(huán)境的作用區(qū)分開(kāi)來(lái)，因而不能得出準(zhǔn)確的遺傳率；雙生子研究是現(xiàn)代人格行為遺傳學(xué)研究最常用的一種有效方法，它在一定程度上克服了家族研究的缺陷，但它的等環(huán)境假設(shè)和代表性也往往令人擔(dān)憂(yōu)：收養(yǎng)研究作為一種強(qiáng)有力的自然實(shí)驗(yàn)法，是“解開(kāi)影響家族相似性的遺傳和環(huán)境源之結(jié)的最直接方法”，避免了雙生子研究中的等環(huán)境假設(shè)問(wèn)題，提供了環(huán)境影響人格差異的最佳證據(jù)，但它也存在三個(gè)爭(zhēng)議，即代表性、生前環(huán)境影響和選擇性安置效應(yīng)（Plomin et al.，2008）。

鑒于以上三種方法各有其長(zhǎng)處和不足，在過(guò)去的20多年中，數(shù)量遺傳學(xué)家已經(jīng)開(kāi)始利用家族研究、雙生子研究和收養(yǎng)研究的組合設(shè)計(jì)來(lái)研究人格。例如，研究分開(kāi)撫養(yǎng)的同卵雙生子就把雙生子研究和收養(yǎng)研究各自的優(yōu)點(diǎn)進(jìn)行了有效整合，并且分開(kāi)撫養(yǎng)的同卵雙生子在某種人格特質(zhì)上的相關(guān)系數(shù)可以直接解釋為遺傳率的一個(gè)指標(biāo)（Larsen & Buss，2009）。另外，隨著離異和再婚現(xiàn)象增多而產(chǎn)生的繼親家庭研究，自然地綜合了家族研究與收養(yǎng)研究的優(yōu)勢(shì)，也是一種有趣和有效的組合研究設(shè)計(jì)。對(duì)多組比較的組合設(shè)計(jì)，甚至簡(jiǎn)單的收養(yǎng)和雙生子研究，現(xiàn)代行為遺傳學(xué)通常采用模型擬合（model fitting）的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，即建立一個(gè)反映各種遺傳和環(huán)境因素對(duì)某種人格特質(zhì)貢獻(xiàn)大小的結(jié)構(gòu)方程模型，并將其與觀測(cè)到的相關(guān)進(jìn)行比較，從而估計(jì)出遺傳和環(huán)境的影響程度（郭永玉，2005）。

2.3 具體研究與發(fā)現(xiàn)

數(shù)量遺傳學(xué)取向的人格研究者利用上述設(shè)計(jì)主要對(duì)人格特質(zhì)、人格障礙以及態(tài)度與偏好的遺傳性問(wèn)題進(jìn)行了考察。

2.3.1 人格特質(zhì)

數(shù)量遺傳學(xué)關(guān)于人格特質(zhì)的研究主要涉及人格的五大特征，即外傾性、宜人性、責(zé)任心、神經(jīng)質(zhì)和經(jīng)驗(yàn)開(kāi)放性，其中研究最充分的要數(shù)外傾性和神經(jīng)質(zhì)。多數(shù)數(shù)量遺傳學(xué)研究表明，“大五”人格模型中的所有因素都具有中等大小的遺傳率，并且此研究結(jié)果在不同年齡段、不同性別以及不同文化背景的樣本群體中具有普遍一致性（saudino，1997；Loehlin，McCrae，Costa，& John，1998）。例如，兩項(xiàng)以雙生子為被試的研究表明，神經(jīng)質(zhì)和外傾性的遺傳率估計(jì)值分別為43%和52-54%（Wray，Birley，Sullivan，Visscher，& Martin，2007；Rettew，Rebollo-Mesa，Hudziak，Willemsen，& Boomsma，2008）。以往數(shù)量遺傳學(xué)對(duì)“大五”人格的研究通常都以正常人群為被試，最近許多研究開(kāi)始關(guān)注異常人群“大五”人格的遺傳性問(wèn)題。例如，Kendler，Myers和Reichborn-Kjennerud（2011）的研究表明，邊緣型人格障礙與“大五”人格中的神經(jīng)質(zhì)維度存在顯著的遺傳正相關(guān)，而與宜人性和責(zé)任心維度存在顯著的遺傳負(fù)相關(guān)。Hare等人（2012）的研究表明，躁郁癥患者人群“大五”人格的遺傳率（23%～32%）某種程度上低于正常人群的研究結(jié)果（40%～60%）。我們固然可以推測(cè)是異常人格影響了“大五”人格遺傳率的變化，但要得出確切的因果結(jié)論還需依賴(lài)未來(lái)數(shù)量遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)更加細(xì)致的綜合研究。

除“大五”人格外，研究者還對(duì)活動(dòng)水平（activity level）和“精神病”人格特質(zhì)的個(gè)別差異進(jìn)行了行為遺傳學(xué)分析。活動(dòng)水平是氣質(zhì)的一個(gè)組成元素，其個(gè)別差異出現(xiàn)于生命早期，并隨著時(shí)間推移在兒童身上表現(xiàn)出穩(wěn)定性。Spinath，Wolf，Angleitner，Borkenau和Riemann（2002）對(duì)300對(duì)雙生子的研究表明，活動(dòng)水平存在40%的遺傳率?！熬癫　比烁裉刭|(zhì)包括權(quán)術(shù)主義、鐵石心腸、沖動(dòng)性不一致、無(wú)所畏懼、責(zé)備外化和壓力免疫等方面。Blonigen，Carlson，Krueger和Patrick（2003）對(duì)353名男性雙生子進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)所有這些“精神病”人格特質(zhì)都表現(xiàn)出中等或高等的遺傳率。

數(shù)量遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，盡管不同研究設(shè)計(jì)所得出的具體數(shù)值會(huì)有所不同，但一般的人格特質(zhì)都具有較高的遺傳率估計(jì)值（Krueger & Johnson，2008）。

2.3.2 人格障礙

數(shù)量遺傳學(xué)系統(tǒng)研究的人格障礙主要有精神分裂型人格障礙、強(qiáng)迫型人格障礙和邊緣型人格障礙。精神分裂型人格障礙具有輕微精神分裂樣癥狀，用個(gè)人訪談法和問(wèn)卷法所做研究表明，它具有非常高的遺傳率（Kendler，Myers，Torgersen，Neale，& Reichbom-Kjennerud，2007）。強(qiáng)迫型人格障礙是一種神經(jīng)精神病狀態(tài)，以思想、情感、觀念以及行為的反復(fù)為典型癥狀，它所包含的五個(gè)因素即禁忌、污馳/清潔、疑慮、迷信/儀式和對(duì)稱(chēng)/囤積的遺傳率位于24%和44%之間（Katerberg etal.，2010）。上述兩種人格障礙可能是精神機(jī)能障礙遺傳連續(xù)體的一部分，因?yàn)樗鼈兎謩e與精神分裂癥和強(qiáng)迫焦慮癥之間存在某種程度的遺傳重疊（Plomin et al.，2008）。邊緣型人格障礙是一種以心境反復(fù)無(wú)常、自我認(rèn)同感紊亂、情緒沖動(dòng)以及行為不穩(wěn)定等為主要表現(xiàn)的人格障礙，它很大程度上受遺傳基因影響。例如，對(duì)荷蘭、比利時(shí)和澳大利亞三個(gè)國(guó)家5000多名雙生子的數(shù)量遺傳學(xué)研究表明，加性遺傳效應(yīng)（additive genetic effect）可以解釋42%的邊緣型人格障礙變異，而且這一結(jié)果具有跨性別和跨國(guó)別的一致性（Distel et al.，2008）。最近一項(xiàng)10年的雙生子縱向研究發(fā)現(xiàn)，邊緣型人格障礙特質(zhì)在14～24歲的各個(gè)年齡段都具有中等的遺傳率，且遺傳率有隨年齡增長(zhǎng)而輕微上升的趨勢(shì)，而這些特質(zhì)的穩(wěn)定性和變化受遺傳因素高度影響，一定程度上也受非共享環(huán)境的影響（Bornovalova，Hicks，Iacono，& McGue，2009）。

2.3.3 態(tài)度與偏好

穩(wěn)定的態(tài)度和偏好通常被看作人格的一部分，并表現(xiàn)出廣泛的個(gè)體差異。數(shù)量遺傳學(xué)家對(duì)態(tài)度和偏好的遺傳性進(jìn)行了饒有趣味的考察。綜觀多數(shù)研究可知，態(tài)度的核心特征傳統(tǒng)主義具有中等的遺傳率。例如，一項(xiàng)明尼蘇達(dá)的雙生子研究表明，傳統(tǒng)主義的遺傳率為63%；一項(xiàng)對(duì)654名收養(yǎng)和非收養(yǎng)兒童的縱向研究表明，遺傳對(duì)保守態(tài)度具有重要影響，并且顯著的遺傳影響早在12歲時(shí)就已產(chǎn)生（Larsen & Buss，2009）。然而，并不是所有態(tài)度和信仰都表現(xiàn)出中等水平的遺傳率，這要因所研究的態(tài)度類(lèi)型而異。例如，一項(xiàng)對(duì)400對(duì)雙生子的研究表明，對(duì)上帝的信仰、對(duì)宗教事務(wù)的參與以及對(duì)種族一體化的態(tài)度的遺傳率為零（Larsen&Buss，2009）。基因似乎也影響職業(yè)興趣或偏好。一項(xiàng)用修訂版的杰克遜職業(yè)興趣量表（JVIS）做的研究表明，34種職業(yè)興趣中有30種的遺傳率在37%和61%之間（schermer & Vernon，2008）。這表明，我們絞盡腦汁作出的職業(yè)選擇很大程度上受到我們從父母那里繼承的基因的影響。但值得我們注意的是，為什么有些態(tài)度和興趣具有較高的遺傳性，而有些態(tài)度和信仰的遺傳性不明顯甚至為零？或許未來(lái)的行為遺傳學(xué)研究能夠給出答案。

3 分子遺傳學(xué)取向

人格的分子遺傳學(xué)（molecular genetics）研究取向主張?jiān)贒NA水平上用基因測(cè)定方法研究特定基因?qū)θ烁癖憩F(xiàn)型的影響效應(yīng)，旨在超越傳統(tǒng)人格數(shù)量遺傳學(xué)研究?jī)H停留在統(tǒng)計(jì)學(xué)層面考察遺傳率的局限，而從微觀層面直接鑒別對(duì)人格產(chǎn)生重要遺傳影響的具體基因或基因組合，以精確揭示人格特征（包括人格障礙）或人格差異的根本遺傳機(jī)制。

3.1 人格候選基因

已知人類(lèi)基因具有數(shù)萬(wàn)種之多，要想從中找出對(duì)人格起作用的特定基因是件困難的事情。況且，復(fù)雜的人格或行為特質(zhì)并不簡(jiǎn)單地遵循孟德?tīng)柕膯位蜻z傳定律，而是同時(shí)受作用幅度不完全相同而又相互協(xié)同和相互作用的多個(gè)基因的影響，這就又大大增加了確定這些基因的難度。因此，研究者不可能對(duì)所有基因都進(jìn)行考察，更多的是考察候選基因與人格的關(guān)系。人格候選基因（candidate gene）是被假定與某一人格特質(zhì)有關(guān)的基因，通常人們已了解其生物學(xué)功能和序列，它們可能是結(jié)構(gòu)基因、調(diào)節(jié)基因或在生化代謝途徑中影響性狀表達(dá)的基因。研究者一般通過(guò)了解相關(guān)生理機(jī)制來(lái)確定人格的候選基因。例如，用于治療活動(dòng)過(guò)度的藥物常含有多巴胺，因而像多巴胺受體、多巴胺啟動(dòng)子和多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體這樣與多巴胺有關(guān)的基因便成為候選基因研究的目標(biāo)。我們通常缺乏哪些基因是人格候選基因的強(qiáng)假設(shè)，因此試圖將那些與具有生理作用的DNA標(biāo)記有關(guān)的基因與人格聯(lián)系起來(lái)的做法是很有道理的（張麗華，宋芳，鄒群，2006）。

3.2 研究策略

人格分子遺傳學(xué)研究者主要采用連鎖策略和關(guān)聯(lián)策略來(lái)尋找和鑒別對(duì)特定人格或行為特質(zhì)有廣泛遺傳影響的具體基因。連鎖策略（linkagestrategy）采取從行為水平到基因水平的“自上而下”的研究思路，它以攜帶某種人格特質(zhì)或障礙的家系為研究對(duì)象，對(duì)連續(xù)幾代人的DNA樣本進(jìn)行分析，以確定是否有對(duì)該人格特征影響較大的特定基因存在。由于研究者并無(wú)假定的候選基因，這種策略對(duì)定位單基因遺傳特質(zhì)的強(qiáng)效基因十分有效，但當(dāng)牽涉若干個(gè)作用較小的基因時(shí)它便不再那么有效。然而，大多數(shù)復(fù)雜的人格或行為特質(zhì)往往牽涉多個(gè)微效基因，于是另一種較新的關(guān)聯(lián)策略（association strategy）便成為最常用的確定人格基因的策略。關(guān)聯(lián)策略采取由基因到行為的“自下而上”的研究思路，通過(guò)考察擁有某種特定基因（或等位基因）的個(gè)體比沒(méi)有該基因的個(gè)體在某種特定人格特質(zhì)上的得分是高還是低，來(lái)確定候選基因與人格或行為特質(zhì)之間的關(guān)聯(lián)情況，即一種可能的因果關(guān)系。關(guān)聯(lián)策略比連鎖策略更容易找到只有微弱效應(yīng)的特定基因，但系統(tǒng)性不夠強(qiáng)。

隨著人類(lèi)基因組多態(tài)性研究以及SNP分型技術(shù)的發(fā)展，全基因組掃描（genome-wide scanning）逐漸成為一種標(biāo)志性的分子遺傳學(xué)人格研究策略（Strobel & Brocke，2011）。它主要包括對(duì)人格表現(xiàn)型的全基因組連鎖分析和全基因組關(guān)聯(lián)分析，先將人格表現(xiàn)型的相關(guān)位點(diǎn)定位于染色體某個(gè)區(qū)域，然后再進(jìn)行候選基因研究或連鎖不平衡分析，確定其具體基因位點(diǎn)。例如，一項(xiàng)用全基因組掃描做的研究表明，傷害回避與8p21染色體區(qū)域存在顯著相關(guān)（zohar et al.，2003）。

3.3 具體研究與發(fā)現(xiàn)

基因主要是通過(guò)大腦中的神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)來(lái)影響人格的，因而參與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的基因便成為主要的候選基因。在Cloninger等人的人格心理生物模型中，新穎性尋求（novelty-seeking）、傷害回避（harm-avoidance）和獎(jiǎng)賞依賴(lài)（reward-dependence）三種氣質(zhì)維度被假定分別與大腦調(diào)節(jié)不同類(lèi)型刺激反應(yīng)的三種神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)即多巴胺（dopamine）系統(tǒng)、5-羥色胺（serotonin）系統(tǒng)和去甲。腎上腺素（noradrenaline）系統(tǒng)相聯(lián)系。此類(lèi)理論假設(shè)促使人格分子遺傳學(xué)研究者們主要從這三種神經(jīng)遞質(zhì)路徑考察了基因多態(tài)性與人格之間的關(guān)系。

3.3.1 多巴胺系統(tǒng)

多巴胺是腦部負(fù)責(zé)快樂(lè)和興奮的一種積極化學(xué)物質(zhì)，它的缺乏會(huì)促使個(gè)體積極尋求有效物質(zhì)或新異經(jīng)驗(yàn)以增加多巴胺釋放。到目前為止，人格研究中最早且最多關(guān)注的DNA標(biāo)記是位于第11號(hào)染色體短臂上的多巴胺D4受體基因（DRD4）。1996年，兩個(gè)獨(dú)立研究小組同時(shí)在《自然遺傳學(xué)》上報(bào)告了DRD4基因的3號(hào)外顯子中的48-bp VNTR多態(tài)性與新穎性尋求之間存在正相關(guān)，標(biāo)志著人格分子遺傳學(xué)研究的初步登場(chǎng)（Ebstein & Israel，2009）。其中，Ebstein領(lǐng)導(dǎo)的小組運(yùn)用三維人格問(wèn)卷（TPQ）對(duì)124名猶太健康志愿者進(jìn)行了測(cè)量，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)重復(fù)段DRD4等位基因?qū)π路f性尋求具有6%的解釋效應(yīng)，而未發(fā)現(xiàn)它與另外三個(gè)TPQ指標(biāo)（獎(jiǎng)賞依賴(lài)、傷害回避和堅(jiān)持性）有顯著關(guān)聯(lián)（Ebstein et al.，1996）；Beniamin領(lǐng)導(dǎo)的小組運(yùn)用大五人格量表修訂版（NEO-PI-R）對(duì)315名美國(guó)成人和兄弟姐妹進(jìn)行了預(yù)測(cè)測(cè)量，也發(fā)現(xiàn)擁有長(zhǎng)重復(fù)段DRD4等位基因的個(gè)體比擁有短重復(fù)段DRD4等位基因的個(gè)體新穎性尋求水平顯著高，并且發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)重復(fù)段DRD4等位基因與NEO-PI-R量表的外傾性和責(zé)任心兩個(gè)維度顯著相關(guān)，而在其他三個(gè)維度即神經(jīng)質(zhì)、開(kāi)放性和宜人性上未見(jiàn)此結(jié)果（Benjamin et al.，1996）。對(duì)于這兩種研究的結(jié)果可能的解釋是，擁有長(zhǎng)重復(fù)段DRD4等位基因的個(gè)體對(duì)多巴胺的相對(duì)缺乏反應(yīng)敏感，需要尋求外界新異經(jīng)驗(yàn)來(lái)增加多巴胺釋放，而擁有短重復(fù)段DRD4等位基因的個(gè)體傾向于對(duì)腦中已經(jīng)存在的多巴胺作出高度反應(yīng)，無(wú)需尋求新異經(jīng)驗(yàn)便可使多巴胺含量達(dá)到適當(dāng)水平。

此后，一系列研究對(duì)DRD4基因與新穎性尋求這種人格特質(zhì)之間的關(guān)聯(lián)進(jìn)行了重復(fù)驗(yàn)證，但結(jié)果并不完全一致。兩項(xiàng)分別以德國(guó)人和日本人為被試的研究證實(shí)DRD4基因與新穎性尋求特質(zhì)之間的確存在顯著關(guān)聯(lián)（strobel，Wehr，Michel，&Brocke，1999；Tomitaka et al.，1999）；Burt等人對(duì)明尼蘇達(dá)137個(gè)雙生子家庭所做的研究發(fā)現(xiàn)，DRD4基因與新穎性尋求測(cè)量指標(biāo)之間不存在任何關(guān)聯(lián)（Bun，McGue，Iacono，Comings，&MacMurray，2002）；Ekelund等人則得出了與1996年研究相反方向的結(jié)果，即在新穎性尋求水平較高的群體中，2次和5次重復(fù)等位基因而非7次重復(fù)等位基因的頻率更高（Ekelund，Lichtermann，Jarvelin，& Pelmnen，1999）。除此之外，有些研究還發(fā)現(xiàn)DRD4基因與其他人格候選基因存在聯(lián)合效應(yīng)。一項(xiàng)關(guān)于1歲新生兒對(duì)新異事物反應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn)，DRD4基因中的48-bp VNTR與5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因（5-HTT）中的一種多態(tài)性存在聯(lián)合效應(yīng)（Lakatos et al.，2003）。之所以會(huì)出現(xiàn)如此多樣的研究結(jié)果，可能與樣本大小、被試特點(diǎn)（年齡、性別和種族文化等）、測(cè)量工具、研究設(shè)計(jì)等因素有關(guān)。例如，分組方法不同所得研究結(jié)果就會(huì)有很大差異（Tsuchimine et al.，2009）。不管怎樣，這都有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。

除DRD4基因外，研究者還對(duì)多巴胺系統(tǒng)中的其他人格候選基因進(jìn)行了考察，如多巴胺D2受體基因（DRD2）、多巴胺D3受體基因（DRD3）、多巴胺D5受體基因（DRD5）以及多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因（DATl）等。一項(xiàng)用多種人格測(cè)驗(yàn)所做的研究表明，DRD2基因的-141C插入/缺失多態(tài)性與卡氏人格量表（KSP）測(cè)量的冷漠以及北歐大學(xué)人格量表（SSP）測(cè)量的自信缺乏之間存在關(guān)聯(lián)（JSnsson et al.，2003，），而利用氣質(zhì)性格量表（TcI）對(duì)被試所做的一項(xiàng)研究表明，-141C插入/缺失多態(tài)性和DRD2/ANKK1基因的TaqlA多態(tài)性與人格特質(zhì)之間可能并非存在直接強(qiáng)相關(guān)，而是在DRD2基因與ANKKl基因的交互作用條件下才對(duì)人格產(chǎn)生影響（Tsuchimine et al.，2012）。在一個(gè)由862名個(gè)體組成的樣本中發(fā)現(xiàn)DRD3基因與神經(jīng)質(zhì)和行為抑制存在關(guān)聯(lián)，而當(dāng)該樣本擴(kuò)大到1465人時(shí)這種關(guān)聯(lián)未得到驗(yàn)證（Henderson et al.，2000）。有研究表明，DRD5基因可能與人格的持續(xù)性發(fā)展有關(guān)（Vanyukov，Moss，Kaplan，Kirillova，&Tarter，2000）。由于發(fā)現(xiàn)DAT1基因與具有某些新穎性尋求特征的注意缺陷多動(dòng)癥（ADHD）存在關(guān)聯(lián)（Jorm et al.，2001，），有人用極端分?jǐn)?shù)個(gè)體為被試考察了DATl基因與新穎性尋求之間的關(guān)聯(lián)，結(jié)果表明這種效應(yīng)只在女性被試身上有所顯現(xiàn)（van Gestel et al.，2002）。

3.3.2 5-羥色胺系統(tǒng)

5-羥色胺作為一種生物胺，對(duì)于人類(lèi)的攻擊性、抑郁、焦慮、沖動(dòng)、幸福感等情緒情感具有重要調(diào)控作用。此系統(tǒng)中最經(jīng)常被研究的人格候選基因是5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因（5-HTT），該基因越長(zhǎng)釋放和回收5-羥色胺的效率越高，已有許多研究考察了它與傷害回避等焦慮類(lèi)人格特質(zhì)之間的關(guān)聯(lián)。5-HTT基因具有兩種多態(tài)性：5-HTT基因連鎖的多態(tài)性區(qū)域（5-HTTLPR）和5-HTT基因2號(hào)內(nèi)含子中的VNTR多態(tài)性，其中人格研究關(guān)注最多的是5-HTTLPR。

1996年的一項(xiàng)經(jīng)典研究發(fā)現(xiàn)，短5-HTTLPR等位基因攜帶者較長(zhǎng)5-HTTLPR等位基因攜帶者在神經(jīng)質(zhì)和傷害回避維度上的表現(xiàn)水平更高（Lesch et al.，1996）。功能性磁共振成像表明，攜帶一個(gè)或兩個(gè)短5-HTTLPR等位基因復(fù)本的個(gè)體在對(duì)恐怖刺激的反應(yīng)中表現(xiàn)出更強(qiáng)的杏仁核神經(jīng)元活動(dòng)（Harid et al.，2002）。這種由遺傳導(dǎo)致的杏仁核對(duì)情緒刺激的興奮性差異支持了該結(jié)論。不過(guò)，也有一些其他研究并未發(fā)現(xiàn)此種關(guān)聯(lián)（Flory et al.，1999；Tsai，Hong，& Cheng，2002）。還有一些研究得出了相反結(jié)果。例如，使用極端得分個(gè)體做的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，短5-HTTLPR等位基因在低傷害回避群體中比在高傷害回避群體中出現(xiàn)的頻率更高（van Gestel et al.，2002）。2004年的一份元分析指出。這種可重復(fù)性的缺乏很大程度上是由于樣本量過(guò)小以及所使用的量表不同而導(dǎo)致（Sen，Burmeister，& Ghosh，2004）。分析者發(fā)現(xiàn)，運(yùn)用大五人格量表測(cè)量的神經(jīng)質(zhì)與5-HTTLPR有顯著關(guān)聯(lián)，而運(yùn)用氣質(zhì)性格量表測(cè)量的傷害回避與5-HTTLPR不存在任何顯著關(guān)聯(lián)。2008年的另一份元分析也得出了類(lèi)似結(jié)論（Munaf6 et al.，2008）。然而，使用NEO-PI-R量表對(duì)4000多名被試進(jìn)行的一項(xiàng)大型研究發(fā)現(xiàn)，5-HTTLPR與神經(jīng)質(zhì)或其各維度（焦慮，抑郁，憤怒，敵意，自我意識(shí)，沖動(dòng)。易受傷害性）之間不存在任何關(guān)聯(lián)（Terracciano etal.，2009）。近年來(lái)，有研究者發(fā)現(xiàn)，與其雜合子同伴或短等位基因的純合子同伴相比，具有長(zhǎng)5-HTLPR等位基因的純合子個(gè)體通常更關(guān)注積極情感畫(huà)面，而選擇性地回避一同呈現(xiàn)的消極情感畫(huà)面（Fox，Ridgewell，& Ashwin，2009）。這表明他們通常更加樂(lè)觀。使用信息加工眼動(dòng)跟蹤評(píng)估法進(jìn)行的另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，短5-HTLPR等位基因攜帶者在視覺(jué)上更加偏愛(ài)積極場(chǎng)景而回避消極場(chǎng)景，長(zhǎng)5-HTLPR等位基因的純合子個(gè)體更加無(wú)偏地看待情緒場(chǎng)景（Beevers，Ellis，Wells，& McGeary，2009）。這表明，短5-HTLPR等位基因攜帶者可能比長(zhǎng)等位基因純合子個(gè)體對(duì)環(huán)境中的情緒信息更加敏感。對(duì)于5-HTLPR與人格特質(zhì)之間關(guān)系的這些看似不一致的結(jié)論，還有待進(jìn)一步研究確證。此外，一項(xiàng)最新研究顯示，5-HTLPR與Val66Met兩種多態(tài)性對(duì)傷害回避存在顯著交互作用（Ariaset al.，2012）。

除5-HTT基因外，研究者還對(duì)5-羥色胺系統(tǒng)中的另外兩個(gè)人格候選基因5-羥色胺2A受體基因（5-HT2A）和5-羥色胺2C受體基因（5-HT2C）進(jìn)行了考察。有研究者在雙極性精神障礙患者和健康控制組群體中檢驗(yàn)了5-HT2A的1號(hào)外顯子中的一種單核苷酸多態(tài)性與傷害回避維度之間的關(guān)聯(lián)，但是沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何關(guān)聯(lián)存在（Blairy et al.，2000）。還有研究者以健康日本人為樣本對(duì)5-HT2A的5種單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行了考察，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)它們與氣質(zhì)性格量表的任何維度存在關(guān)聯(lián)（Kusumi et al.，2002）。就5-HT2C與人格的關(guān)系而言，研究者發(fā)現(xiàn)5-HT2C中的一個(gè)點(diǎn)突變與三維人格問(wèn)卷的獎(jiǎng)賞依賴(lài)維度和堅(jiān)持性維度存在關(guān)聯(lián)，并且DRD4與5-HT2C對(duì)獎(jiǎng)賞依賴(lài)存在顯著交互效應(yīng)（Ebstein et al.，1997）。然而，后來(lái)的一項(xiàng)重復(fù)性研究發(fā)現(xiàn)，5-HT2C對(duì)獎(jiǎng)賞依賴(lài)不存在主效應(yīng)，但DRD4與5-HT2C對(duì)獎(jiǎng)賞依賴(lài)確實(shí)存在顯著交互效應(yīng)（Kühn et al.，1999）。

3.3.3 去甲腎上腺素系統(tǒng)

在人格的分子遺傳學(xué)研究中，人們對(duì)去甲腎上腺素系統(tǒng)的關(guān)注遠(yuǎn)不及對(duì)多巴胺系統(tǒng)和5-羥色胺系統(tǒng)的關(guān)注多，但也取得了一些研究成果。有研究以健康被試為樣本，考察了去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)體（NET）的一種外顯子限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）與氣質(zhì)性格量表中各維度之間的關(guān)系，但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何關(guān)聯(lián)存在（Samochowiec et al.，2001）。不過(guò)，另一項(xiàng)以朝鮮人為被試的研究表明，去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)體的T-182C基因多態(tài)性與氣質(zhì)性格量表的獎(jiǎng)賞依賴(lài)維度存在顯著關(guān)聯(lián)（Ham，Choi，Lee，Kang，& Lee，2005）。有研究表明，在中國(guó)人被試中，αla腎上腺素受體基因（ADRAlA）和0c2a腎上腺素受體基因（ADRA2A）的多態(tài)性與三維人格問(wèn)卷各維度之間不存在任何關(guān)聯(lián)（Tsai，Wang，& Hong，2001）。而之前的另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，ADRA2A的一種常見(jiàn)單核苷酸多態(tài)性與易怒性、敵對(duì)性和沖動(dòng)性諸測(cè)量值之間的確存在某些關(guān)聯(lián)（comings et al.，2000）。關(guān)于去甲腎上腺素系統(tǒng)的諸候選基因與人格之間關(guān)系的研究，有待進(jìn)一步加強(qiáng)。

4 總結(jié)與展望

行為遺傳學(xué)通過(guò)數(shù)量遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)兩條取徑對(duì)人格遺傳性問(wèn)題進(jìn)行了不同層次的詳細(xì)探索，取得了較為豐富的研究成果，推進(jìn)了我們對(duì)人格遺傳程度和遺傳機(jī)制的深刻認(rèn)識(shí)，也有利于促進(jìn)人格研究的科學(xué)化。人格行為遺傳學(xué)研究的兩類(lèi)取向各具優(yōu)勢(shì)和不足。數(shù)量遺傳學(xué)取向借助生態(tài)研究設(shè)計(jì)從宏觀上估計(jì)遺傳變異對(duì)人格差異的解釋程度，資料獲取經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)單、技術(shù)要求低，并且結(jié)果解釋相對(duì)容易，但它無(wú)法確切地告訴我們究竟哪些基因或多態(tài)性導(dǎo)致了人格差異以及具體作用過(guò)程如何（Parens，2004），對(duì)研究設(shè)計(jì)和被試取樣的依賴(lài)性較強(qiáng)，況且面對(duì)遺傳與環(huán)境實(shí)際存在相關(guān)或交互作用的不爭(zhēng)事實(shí)，遺傳率的解釋意義往往遭到質(zhì)疑（Lerner，2011）。分子遺傳學(xué)取向擺脫了數(shù)量遺傳學(xué)取向存在的諸多不足，可以從DAN水平精確細(xì)微地探知造成人格障礙或差異的特定基因及其作用機(jī)制，但研究程序繁瑣復(fù)雜，對(duì)新興生物技術(shù)要求較高，在人格候選基因的選擇上帶有推測(cè)性，迄今為止尚未產(chǎn)生符合最初預(yù)期的可重復(fù)的實(shí)質(zhì)性人格研究成果（McClellan & King，2010）。除此之外，兩類(lèi)研究取向還存在諸多共同的問(wèn)題：一是受測(cè)量手段限制，對(duì)被試自陳報(bào)告依賴(lài)性高，往往會(huì)造成某些人格特質(zhì)在防衛(wèi)或偽裝心理作用下被隱藏；二是由于研究設(shè)計(jì)和技術(shù)、被試取樣、人格和基因自身復(fù)雜性以及環(huán)境與基因的交互作用等原因，研究結(jié)果的可重復(fù)性不高（Kim & Kim，2011）；三是受過(guò)去百余年消極心理學(xué)研究傳統(tǒng)的影響，所研究的對(duì)象主要是精神分裂癥、抑郁癥、多動(dòng)癥等病理人群（張文新，王美萍，曹叢，2012），缺乏對(duì)健康人群積極人格品質(zhì)的遺傳研究；四是研究成果的現(xiàn)實(shí)利用率低，未能把研究所得成果及時(shí)有效地轉(zhuǎn)化為現(xiàn)實(shí)效益。

鑒于人格行為遺傳學(xué)研究所存在的諸多問(wèn)題，未來(lái)研究應(yīng)特別注意以下五個(gè)方面：

（1）強(qiáng)調(diào)兩種研究取向的有機(jī)結(jié)合，在數(shù)量遺傳設(shè)計(jì)中加入對(duì)特定基因型的直接測(cè)量。這兩種研究取向各有優(yōu)缺，可以相互彌補(bǔ)，況且分子遺傳學(xué)的許多工作需用傳統(tǒng)數(shù)量遺傳學(xué)設(shè)計(jì)綜合考慮環(huán)境與遺傳因素來(lái)完成。未來(lái)研究可以在數(shù)量遺傳設(shè)計(jì)中加入對(duì)特定基因型的直接測(cè)量，例如，可以先用數(shù)量遺傳學(xué)方法確定某種人格特征是否具有遺傳性以及遺傳到什么程度，然后再用分子遺傳學(xué)方法從根本上細(xì)微探究影響人格的具體基因及其作用方式。

（2）注重多學(xué)科和多范式的有效整合。人格的行為遺傳學(xué)研究是一項(xiàng)綜合性很高的困難工作，涉及遺傳學(xué)、心理學(xué)、生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、醫(yī)學(xué)和社會(huì)學(xué)等多門(mén)學(xué)科，因此需要在更廣泛的視野下進(jìn)行多學(xué)科的整合研究。人格的遺傳機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，靠單一研究工具（如自陳問(wèn)卷）或研究范式很難獲得理想結(jié)果，今后應(yīng)在傳統(tǒng)研究范式的基礎(chǔ)上綜合采用腦成像、誘發(fā)電位、前脈沖抑制和計(jì)算機(jī)博弈模型等一些新的研究范式，從多個(gè)角度綜合考察和相互印證人格與基因的關(guān)系，從而彌補(bǔ)由自陳報(bào)告帶來(lái)的弊端，同時(shí)克服可重復(fù)性低的問(wèn)題。

（3）擴(kuò)大對(duì)健康人群積極人格品質(zhì)的研究。未來(lái)人格行為遺傳學(xué)研究不僅要研究病理人群的消極人格品質(zhì)，而且更要研究正常人群甚至超常人群的積極人格品質(zhì)，探究它們的遺傳性及分子作用機(jī)制，為積極人格品質(zhì)的培養(yǎng)提供遺傳學(xué)依據(jù)。

第6篇：表觀遺傳學(xué)的研究意義范文

【關(guān)鍵詞】 腫瘤抑制基因;DNA甲基化;胃癌

Abstract:Epigenetics is the study of genetic changes in gene expression without the sequence change of DNA， in which DNA methylation is one of the most widely studied epigenetic mechanism. CpG island is the sequence of human genome， located mainly in the promoter as well as the first extron regions. The size of it is nearly 100～1 000 bp and it links with 60% of human coding genes. Methylation of CpG sites in the promoter regions of genes can lead to decreased expression and silence the tumor suppressor genes and contribute to oncogenesis. The research development of DNA methylation in gastric carcinoma was reviewed in this article.

Key words：tumor suppressor genes; DNA methylation;gastric carcinoma

胃癌是人類(lèi)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率高，據(jù)統(tǒng)計(jì)，其死亡率居全球惡性腫瘤死亡率的第二位，嚴(yán)重的危害著人類(lèi)的健康和生命。胃癌發(fā)生的機(jī)制目前仍不是很清楚，研究表明，細(xì)胞無(wú)限增殖及分化受阻是腫瘤發(fā)生的基本過(guò)程，隨著分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展，人們逐漸深化了對(duì)腫瘤發(fā)生學(xué)的認(rèn)識(shí)。近年研究結(jié)果顯示腫瘤的發(fā)生是多基因異常共同作用的結(jié)果，包括癌基因活化和腫瘤抑制基因失活，有關(guān)表遺傳學(xué)研究顯示[1]，表遺傳學(xué)異常參與了腫瘤發(fā)生過(guò)程，而且在某種腫瘤的發(fā)生中起重要作用，其中DNA異常甲基化可致基因表達(dá)減弱或基因沉默，是導(dǎo)致腫瘤抑制基因失活的重要機(jī)制之一。本文就胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中一些腫瘤抑制基因DNA異常甲基化研究進(jìn)展作一綜述。

1 DNA甲基化及其作用

表遺傳學(xué)(epigenetics)是1939年由waddington首先提出的。表遺傳學(xué)是研究在DNA序列沒(méi)有改變的情況下，所發(fā)生的可遺傳性基因表達(dá)的改變[1]168-174。其中包括DNA甲基化、基因組印記、染色體組蛋白修飾、隔離蛋白以及非編碼RNA調(diào)控等方式，這種模式傳遞給子代細(xì)胞是不依賴(lài)DNA序列的。其中DNA甲基化是研究最多、最深入的一種表遺傳學(xué)表達(dá)機(jī)制。

DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferases DNMTS)的介導(dǎo)下，二核苷酸中胞嘧啶(C)的第5位原子上的H被S—腺苷甲硫氨酸提供的甲基取代，使之變成5—甲基胞嘧啶(5-methy1cytosine，m5C)[2]的化學(xué)修飾過(guò)程。甲基化酶包括維持甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT 1) 和重新甲基化酶(DNMT 3a，DNMT 3b)。維持甲基化酶的作用是識(shí)別子代DNA 雙鏈中親代單鏈上已甲基化的CpG 位點(diǎn)，催化互補(bǔ)單鏈的胞嘧啶(C) 發(fā)生甲基化;重新甲基化酶的作用是使非甲基化的雙鏈DNA 發(fā)生甲基化的過(guò)程[3] 。DNA的甲基化修飾反應(yīng)主要發(fā)生在CpG二核苷酸的胞嘧啶，CpG 位點(diǎn)以?xún)煞N形式存在，一種為分散于DNA中，正常情況下這些 CpG二核苷酸甲基化可作為一種宿主基因的保護(hù)機(jī)制，它會(huì)抑制重復(fù)子轉(zhuǎn)錄以及重復(fù)子同源性重組，還可以抑制“寄生”DNA序列(如逆轉(zhuǎn)錄病毒片段)的侵入;另一種是CpG 結(jié)構(gòu)高度聚集在一起，即CpG 島(CpG island)。CpG島在基因組內(nèi)呈不連續(xù)分布，通常位于基因的啟動(dòng)子區(qū)域(promoter region)，也可位于第一外顯子區(qū)域， 故又稱(chēng)5′-CpG 島[4]。在正常細(xì)胞中，CpG 島通常不發(fā)生甲基化修飾，而腫瘤組織常發(fā)生其相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)域的異常甲基化。DNA 甲基化異?？煞譃榧谆鰪?qiáng)、甲基化減弱和甲基化轉(zhuǎn)移酶水平增高三種情況，其中抑癌基因甲基化增強(qiáng)在腫瘤中最常見(jiàn)?？赏ㄟ^(guò)改變基因的構(gòu)型或與核內(nèi)甲基化CG序列結(jié)合蛋白結(jié)合，阻止轉(zhuǎn)錄因子與基因形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，從而導(dǎo)致其表達(dá)沉默，使腫瘤抑制活性喪失，被認(rèn)為是腫瘤抑制基因失活的重要途徑。另外，DNA 的甲基化還可促進(jìn)腫瘤相關(guān)基因突變，因5-甲基胞嘧啶可自發(fā)性或在SAM 作用下引起鄰位脫氨轉(zhuǎn)變?yōu)樾叵汆奏?，使甲基化的CpG 突變?yōu)門(mén)pG，因此其也是甲基化促進(jìn)惡變的機(jī)制之一。

CpG島甲基化是一種基因外修飾，在正常細(xì)胞中基因的甲基化大多發(fā)生在其啟動(dòng)子CpG 島之外，而在腫瘤細(xì)胞中某些抑癌基因的CpG島甲基化則導(dǎo)致該基因轉(zhuǎn)錄失活，故在腫瘤研究中檢測(cè)基因啟動(dòng)子區(qū)CpG 島甲基化狀態(tài)，對(duì)于闡明腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制及建立早期診斷方法均具重要意義。目前DNA甲基化的檢測(cè)方法比較多，其中廣泛應(yīng)用的技術(shù)是甲基化特異性的PCR技術(shù)(MSP)和甲基化敏感的單堿基延伸技術(shù)(Ms-SNuPE)，這些技術(shù)的敏感性高，特異性強(qiáng)，適用于微量DNA或石蠟包埋DNA。在MSP技術(shù)的基礎(chǔ)上，又先后發(fā)展了基于熒光檢測(cè)方法的實(shí)時(shí)定量PCR(MethyLight)和依賴(lài)于限制性核酸內(nèi)切酶的甲基化分析方法(COBRA)，這些技術(shù)提高了檢測(cè)的敏感性，實(shí)現(xiàn)了高通量和高特異性。此外，有人將MSP技術(shù)與變性高效液相色譜法(DNPLC)相結(jié)合，來(lái)測(cè)定整個(gè)CpG位點(diǎn)的甲基化。近年，中國(guó)科學(xué)院化學(xué)研究所與清華大學(xué)的研究人員合作，發(fā)展了基于水溶性陽(yáng)離子型共軛聚合物的新DNA甲基化分析方法。通過(guò)熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(FRET)研究了質(zhì)粒和人腫瘤細(xì)胞p16基因啟動(dòng)子區(qū)特異CpG位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)該技術(shù)具有較高的靈敏度和特異性。引物無(wú)需熒光標(biāo)記，檢測(cè)在均相溶液中進(jìn)行，無(wú)需分離、純化等手段，而且與高通量分析兼容，在癌癥臨床診斷上具有潛在的應(yīng)用價(jià)值[5]。

2 胃癌相關(guān)基因的甲基化

近年研究結(jié)果顯示，多種基因的異常甲基化在胃癌發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。有研究[6]表明，DNA的甲基化率在胃癌前病變轉(zhuǎn)化為癌的過(guò)程會(huì)發(fā)生改變。Kang等[7] 對(duì)非腫瘤胃黏膜和胃腫瘤進(jìn)行p16、hMLH1、DAP—kmase、THBS1、及TIMP-3等5種基因檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)除DAP—kmase甲基化的頻率相近之外，其他基因從慢性胃炎到腸化生及從腺瘤到腺癌甲基化頻率都有不同程度的增高。因此認(rèn)為，這些基因的高甲基化在胃癌變發(fā)生過(guò)程中的較早階段就已出現(xiàn)，這為胃癌的早期診斷提供了新思路。

2.1 p16基因甲基化

p16基因又稱(chēng)多腫瘤抑制基因(multiple tumor suppressor，MTS)，定位于9p21 位點(diǎn)，由2個(gè)內(nèi)含子和3 個(gè)外顯子組成。該基因編碼的蛋白是一種重要的細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控蛋白，可與D型細(xì)胞周期蛋白(cyclinD)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)激酶CDK4 和CDK6而抑制蛋白激酶活性，使腫瘤細(xì)胞周期調(diào)節(jié)中抑癌基因Rb的表達(dá)產(chǎn)物(PRb)不能磷酸化而保持活化狀態(tài)，抑制轉(zhuǎn)錄因子EF解離，使細(xì)胞周期進(jìn)展最關(guān)鍵的G 1/S轉(zhuǎn)換停滯，對(duì)細(xì)胞周期起負(fù)調(diào)控作用。因此，p16 基因的變異或其蛋白的失活會(huì)導(dǎo)致cyclinD-CDK4/6-pRb-E2F調(diào)節(jié)途徑的失控，而使細(xì)胞過(guò)度增殖，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。目前研究表明p16基因的純合缺失和點(diǎn)突變異常多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)。在胃癌中p16基因異常甲基化主要發(fā)生在外顯子1和啟動(dòng)子區(qū)域，且基因啟動(dòng)子的高度甲基化更為常見(jiàn)。Lee等[8]最早報(bào)道了p16 甲基化與胃癌的關(guān)系，他們用甲基化敏感性限制性?xún)?nèi)切酶研究了9 個(gè)胃癌細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)2個(gè)細(xì)胞株有甲基化，而且不表達(dá)p16mRNA;體外以去甲基化劑5-deoxy-ezecytidine對(duì)胃癌細(xì)胞系處理后，因CpG島異常甲基化而封閉的基因又重新表達(dá)。Ficorella 等[9]發(fā)現(xiàn)原發(fā)性胃癌中p16 基因啟動(dòng)子區(qū)域高甲基化是導(dǎo)致其轉(zhuǎn)錄失活的重要原因。Bai等[10]利用誘發(fā)Wistar 大鼠胃癌模型研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠胃黏膜向胃癌演變過(guò)程中，p16 基因甲基化是在胃癌發(fā)生過(guò)程的較早階段出現(xiàn)，其甲基化的頻率在正常胃上皮中為2.7%， 在慢性萎縮性胃炎中為16.7%，在腸上皮化生中為37.5%，在胃腺瘤中為64.7%，在胃癌中則高達(dá)82.5%。Abbaszadegan 等[11]通過(guò)MSP 和免疫組化等方法同時(shí)對(duì)52 例胃癌患者組織和血清中p16基因甲基化及蛋白表達(dá)情況分析后，認(rèn)為p16 啟動(dòng)子區(qū)高甲基化在胃癌發(fā)生中起重要作用，并且與胃癌惡性程度相關(guān)。同時(shí)提出血清中DNA 甲基化水平的檢測(cè)可能是胃癌早期檢查的一個(gè)重要的生物學(xué)指標(biāo)。

2.2 DNA錯(cuò)配修復(fù)基因(MMR)、CpG甲基化表型(CIMP)與胃癌

研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌的發(fā)生中存在微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability，MSI)和 CpG甲基化表型(CpG island methylator phenohype，CIMP)兩種分子途徑。在DNA MMR中起主要作用的是基因hMLH1 和hMSH2。MMR通過(guò)修復(fù)DNA堿基錯(cuò)配、降低自發(fā)性突變，而增強(qiáng)DNA的保真性和維持基因組的穩(wěn)定性。Herman等[12]最早報(bào)告了在結(jié)直腸癌中MMR hMLH1失活與DNA甲基化有關(guān)，后來(lái)發(fā)現(xiàn)胃癌中同樣存在微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability，MSI)亞型，但還沒(méi)有胃癌中有關(guān)DNA MMR發(fā)生突變的報(bào)道。Fleisher 等[13]檢測(cè)了65 例胃癌組織的hMLH1甲基化情況發(fā)現(xiàn)，隨著胃癌中MSI頻率的降低hMLH1基因的甲基化率也隨之降低。由此推測(cè)，hMLH1基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化與MSI有關(guān)，有可能是該基因失活的一種普遍機(jī)制。Poplawski等[14]通過(guò)甲基化敏感限制性?xún)?nèi)切酶PCR(MSRE-PCR)對(duì)比分析27例胃癌患者與25 例健康人后認(rèn)為，hMLH1 甲基化對(duì)胃癌形成有促進(jìn)作用。由此可見(jiàn)，hMLH1啟動(dòng)子的甲基化與胃癌的發(fā)生有關(guān)，可能是胃癌發(fā)生機(jī)制中的早期分子事件。

CpG甲基化表型(CIMP)是指一些病例同時(shí)存在多個(gè)基因甲基化的現(xiàn)象。CIMP已在大腸癌、肝癌、肝內(nèi)外膽管癌、胰腺癌、卵巢癌、急性髓性白血病、膀胱癌等惡性腫瘤中得到證實(shí)。由于胃癌的發(fā)生是一個(gè)多步驟、多因素相互作用的結(jié)果，也涉及許多相關(guān)基因的異常表達(dá)，因此多基因的啟動(dòng)子甲基化的研究也就自然得到了研究人員的青睞，而且越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)CIMP與胃癌有著密切的關(guān)系。Kim等[15] 通過(guò)檢測(cè)40例早期胃癌組織中hMLH1、TIMP3、THBS1、DAP—K、GSTP1、APC和MINT2的甲基化狀況發(fā)現(xiàn)，除了2 例基因甲基化陰性外，CIMP盡然高達(dá)40%。可見(jiàn)，啟動(dòng)子甲基化在早期胃癌中是一種普遍現(xiàn)象。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)，在腫瘤發(fā)生的不同階段、不同基因的啟動(dòng)子甲基化表達(dá)狀況是不同的，有的基因隨胃癌的進(jìn)展其甲基化發(fā)生率有不斷升高的趨勢(shì)，而在健康青年人標(biāo)本及胎盤(pán)中未發(fā)DNA甲基化?？梢?jiàn)CIMP在胃癌的發(fā)生中是一早發(fā)事件，可以利用此特征作為胃癌的早期診斷指標(biāo)，同時(shí)對(duì)建立胃癌相關(guān)基因的甲基化譜也具有積極的作用。

APC 基因是一種抑癌基因，編碼的APC蛋白可以抑制上皮細(xì)胞增殖而抑制腫瘤的發(fā)生。早期研究證實(shí)該基因是結(jié)直腸癌的管家基因，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)該基因在胃癌的發(fā)生發(fā)展中也起重要作用。曾有學(xué)者用免疫組化方法分析了120 例胃癌病人的APC基因的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，APC缺失率為78%，因此認(rèn)為APC 基因缺失可能與胃癌的發(fā)生有關(guān)。近年來(lái)大量的研究顯示APC基因啟動(dòng)子1A部位甲基化與胃癌發(fā)生關(guān)系密切。Hosoya等[16]研究發(fā)現(xiàn)APC基因啟動(dòng)子1A蛋白表達(dá)率與甲基化率在正常胃粘膜和非癌粘膜中保持一致，在癌粘膜中甲基化率增高。而1B均未發(fā)現(xiàn)有甲基化。由此可見(jiàn)，ACP啟動(dòng)子甲基化主要發(fā)生在1A部位，且ACP啟動(dòng)子1A部位的甲基化可能是胃癌發(fā)生的一個(gè)中間環(huán)節(jié)，而不是胃癌發(fā)生的始動(dòng)因素。3 結(jié) 語(yǔ)

通過(guò)對(duì)胃癌相關(guān)基因甲基化分析發(fā)現(xiàn)，多種相關(guān)基因甲基化是胃癌形成的重要機(jī)制之一。DNA甲基化異常不僅可在手術(shù)標(biāo)本中檢測(cè)到，還可從各種體液如外周血清中檢測(cè)到，為臨床應(yīng)用帶來(lái)極大便利，因此腫瘤相關(guān)基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)是一種非常有前途的生物標(biāo)記物，可作為腫瘤的敏感性生物標(biāo)志物。檢測(cè)胃癌相關(guān)基因啟動(dòng)子異常甲基化不僅可用于高危人群監(jiān)測(cè)、腫瘤風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、胃癌早期診斷，還可用于判斷腫瘤遷移情況，預(yù)測(cè)胃癌手術(shù)、放化療療效等。由于DNA甲基化是一個(gè)可逆的過(guò)程，故通過(guò)恢復(fù)僅被抑制而未發(fā)生突變或丟失的生長(zhǎng)調(diào)控基因表達(dá).來(lái)恢復(fù)細(xì)胞正常生長(zhǎng)調(diào)控功能，并且已有這方面的動(dòng)物模型研究證實(shí)了這一想法。故DNA的去甲基化將為癌癥的治療提供新思路。由于一些病原體的感染可以誘發(fā)腫瘤相關(guān)基因甲基化從而導(dǎo)致胃癌的發(fā)生，故預(yù)防感染和及時(shí)的根除這些病原體會(huì)對(duì)預(yù)防胃癌的發(fā)生有重要的意義。

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第7篇：表觀遺傳學(xué)的研究意義范文

同時(shí)，學(xué)生難以通過(guò)自身的自主學(xué)習(xí)與實(shí)踐獲取知識(shí)，更難有機(jī)會(huì)對(duì)課程的內(nèi)容和問(wèn)題發(fā)表基于自己理解的看法與意見(jiàn)。教與學(xué)的雙方對(duì)這一現(xiàn)象都頗有微詞。教師覺(jué)得學(xué)生學(xué)得太被動(dòng)，沒(méi)有主動(dòng)思考; 而學(xué)生則抱怨老師教學(xué)不夠精彩，提不起興趣。為了改善這一狀況，提高教學(xué)效果，自2012 年始至2014 年的三個(gè)教學(xué)周期里，本教學(xué)團(tuán)隊(duì)在原有教學(xué)體系的基礎(chǔ)上，嘗試進(jìn)行了教學(xué)方法的改革，采用探究式教學(xué)模式，改變教師的教學(xué)方法和學(xué)生的學(xué)習(xí)方式。強(qiáng)調(diào)教師的作用不單是傳道、授業(yè)和解惑，還要盡可能地激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣，提高學(xué)習(xí)效率，同時(shí)培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)精神和科學(xué)態(tài)度，形成一定的創(chuàng)新意識(shí)品質(zhì)和實(shí)踐能力，以期為農(nóng)科其他專(zhuān)業(yè)課的教學(xué)改革研究與實(shí)踐提供可借鑒的范例。

一、構(gòu)建基于問(wèn)題的探究式教學(xué)模式

通過(guò)設(shè)計(jì)問(wèn)題情景，激發(fā)學(xué)生好奇心和求知欲是探究式教學(xué)模式的本質(zhì)特征，其關(guān)鍵在于挑起學(xué)生在認(rèn)識(shí)上的矛盾，形成認(rèn)知沖突，并提出問(wèn)題。怎樣才能在教學(xué)過(guò)程中制造出認(rèn)知沖突呢? 最有效的方法就是創(chuàng)設(shè)懸念法。懸念是一種學(xué)習(xí)心理機(jī)制，是由學(xué)生對(duì)所學(xué)對(duì)象感到疑惑不解而又想解決時(shí)所產(chǎn)生的一種心理狀態(tài)。它能激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)動(dòng)機(jī)和興趣，使思維活躍、想象豐富，在解決所提出問(wèn)題的同時(shí)還培養(yǎng)了學(xué)生克服困難的意志力。探究式教學(xué)的基本框架與模式或步驟如下: ( 1) 設(shè)置情景。( 2) 提出問(wèn)題( 包含問(wèn)題) 。( 3) 提出猜想或假設(shè)。( 4) 搜集資料和事實(shí)。( 5) 驗(yàn)證假設(shè)。( 6) 交流評(píng)價(jià)與得出結(jié)論。( 7) 整合、建構(gòu)、遷移、應(yīng)用。

( 一) 課堂理論教學(xué)方面

課堂理論教學(xué)是課程教學(xué)過(guò)程最重要的方式，在教學(xué)過(guò)程中，隨著生命科學(xué)、信息技術(shù)和工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，我們一直不斷將新理論和新技術(shù)補(bǔ)充到園藝植物育種學(xué)課程的教學(xué)內(nèi)容之中，如離體培養(yǎng)育種、分子育種等近年來(lái)取得的研究新成果都在課堂上余小林等基于問(wèn)題的園藝植物育種學(xué)探究式教學(xué)模式研究得到了及時(shí)的反映。同時(shí)，在課程講授中，以育種途徑為主線(xiàn)，重點(diǎn)介紹園藝植物種質(zhì)資源調(diào)查( 查) 、引種馴化( 引) 、選擇育種( 選) ，以及在現(xiàn)有資源基礎(chǔ)上，通過(guò)人工創(chuàng)造變異，選擇獲得新的品種類(lèi)型的創(chuàng)造變異育種( 育) 途徑，以及采用這些途徑選育新品種的理論、方法、技術(shù)等內(nèi)容。

根據(jù)探究式教學(xué)模式的要求，我們將部分章節(jié)的課程內(nèi)容進(jìn)行了問(wèn)題化，把定論形式陳述的材料轉(zhuǎn)化成引導(dǎo)學(xué)生探究的問(wèn)題形式。為此，本教學(xué)團(tuán)隊(duì)經(jīng)過(guò)多次討論，設(shè)計(jì)了10 個(gè)情景問(wèn)題: ( 1) 如何協(xié)調(diào)栽培品種遺傳背景越來(lái)越窄與種質(zhì)資源亟需保護(hù)間的矛盾? ( 2) 為什么在明末清初時(shí)我國(guó)的人口有個(gè)劇增的高峰( 主要得益于紅薯、玉米和馬鈴薯等重要農(nóng)作物種質(zhì)資源的引進(jìn)) ? ( 3) 如何制定園藝植物的育種目標(biāo)? ( 4)如何在育種過(guò)程中避免遺傳累贅，實(shí)現(xiàn)優(yōu)良性狀的定向重組? ( 5) 航天育種是未來(lái)的發(fā)展方向嗎? ( 6) 雜種優(yōu)勢(shì)的分子遺傳機(jī)制是什么? ( 7) 芽變的遺傳機(jī)理及其在育種中的應(yīng)用。( 8) 轉(zhuǎn)基因作物的是天使還是魔鬼? ( 9) 基因組測(cè)序及分子設(shè)計(jì)育種的現(xiàn)在與將來(lái)。( 10) 表觀遺傳在育種中的作用。在上述精心設(shè)計(jì)的情景問(wèn)題中，有些是本學(xué)科相關(guān)研究領(lǐng)域的研究前沿問(wèn)題，如雜種優(yōu)勢(shì)的分子遺傳機(jī)制、表觀遺傳在育種中的作用和消除遺傳累贅實(shí)現(xiàn)定向重組是迄今為止植物育種領(lǐng)域的研究瓶頸和未解之謎; 有些是業(yè)內(nèi)和社會(huì)當(dāng)前的熱點(diǎn)關(guān)注問(wèn)題，如分子設(shè)計(jì)育種、芽變的遺傳機(jī)理、航天育種和轉(zhuǎn)基因作物的取舍等; 有些則是影響社會(huì)發(fā)展進(jìn)程的重大問(wèn)題，如種質(zhì)資源的保護(hù)和人口社會(huì)發(fā)展問(wèn)題等。但所有情景問(wèn)題都是動(dòng)態(tài)和開(kāi)放的，沒(méi)有唯一的標(biāo)準(zhǔn)答案，需要學(xué)生通過(guò)查詢(xún)大量的文獻(xiàn)資料，進(jìn)行認(rèn)真分析和整理，才能形成自己的觀點(diǎn)或假設(shè)，并通過(guò)大量論證來(lái)支撐自己的觀點(diǎn)或假設(shè)。

具體做法為: 將全班同學(xué)分成67 個(gè)小組( 5 人/小組) ，每小組負(fù)責(zé)一個(gè)題目。當(dāng)授課到相應(yīng)章節(jié)，在講授完基本概念和理論知識(shí)以后，就由某一小組接受本章的探究式情景問(wèn)題的任務(wù)，通過(guò)小組討論，一般在四周后選擇合適的時(shí)間，由本小組代表通過(guò)PPT 形式在全班進(jìn)行交流，并由授課教師和各小組組長(zhǎng)對(duì)其探究式教學(xué)成效進(jìn)行考核，同時(shí)，各小組還要遞交以學(xué)術(shù)論文格式撰寫(xiě)的總結(jié)報(bào)告。探究式教學(xué)討論部分占總成績(jī)的20%30%。為了促進(jìn)小組之間的生生交流，防止產(chǎn)生能者多勞的現(xiàn)象，采用臨時(shí)抽簽的方式產(chǎn)生小組交流的代表，其他組員可以在后面的答疑階段進(jìn)行必要的補(bǔ)充。

正是這一小小操作上的改進(jìn)，大大增加了小組內(nèi)學(xué)生的交流和討論時(shí)間。只有每個(gè)組員都熟悉本小組的探究問(wèn)題和PPT 內(nèi)容，才能在全班交流時(shí)取得好成績(jī)，因?yàn)樯吓_(tái)前誰(shuí)也不知道誰(shuí)會(huì)上臺(tái)主講，誰(shuí)也不想因自己而拖全小組的后腿。

( 二) 實(shí)驗(yàn)教學(xué)方面

實(shí)驗(yàn)是培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立思考、分析和解決問(wèn)題能力的一個(gè)重要教學(xué)環(huán)節(jié)，是進(jìn)一步掌握和理解理論知識(shí)的鑰匙，也為學(xué)生后續(xù)實(shí)習(xí)及畢業(yè)后的工作提供專(zhuān)業(yè)基本操作技能的訓(xùn)練。在傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)課教學(xué)中，大多偏重于對(duì)相關(guān)理論的驗(yàn)證，且過(guò)于強(qiáng)調(diào)程序性，老師講得多，學(xué)生參與少。學(xué)生完全按照教師所講或教材所示的步驟，機(jī)械性地操作實(shí)驗(yàn)，缺少對(duì)研究原理與方法、實(shí)驗(yàn)過(guò)程和技巧的深入思考，甚至互相抄襲實(shí)驗(yàn)報(bào)告，導(dǎo)致學(xué)生過(guò)分依賴(lài)教師及教材，缺乏學(xué)習(xí)的主動(dòng)性與積極性，不利于創(chuàng)新性人才的培養(yǎng)。針

對(duì)這一現(xiàn)實(shí)問(wèn)題，結(jié)合本課程實(shí)驗(yàn)內(nèi)容理論基礎(chǔ)要求高、操作性強(qiáng)和實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)等特點(diǎn)，我們對(duì)部分自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)開(kāi)展了探究式教學(xué)方法的改革。在上一次實(shí)驗(yàn)課結(jié)束的時(shí)候我們就布置下次實(shí)驗(yàn)的任務(wù)，讓學(xué)生自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，使其全程參與前期實(shí)驗(yàn)方案的制定、實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備和試劑的配制等各個(gè)環(huán)節(jié)。以園藝植物花粉生活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)為例，目前測(cè)定植物花粉生活力的方法主要有: 形態(tài)檢驗(yàn)法、發(fā)芽法、授粉法和染色法，其中染色法有I - KI 法、氯化三笨四氮唑法( TTC) 、聯(lián)苯胺- 萘酚法和亞歷山大染色法等。

對(duì)此我們提出下面兩個(gè)問(wèn)題: 這些方法對(duì)所有植物的花粉都適用嗎? 哪些方法適合哪些植物? 同時(shí)，老師在課前僅對(duì)各種檢測(cè)方法進(jìn)行介紹和指導(dǎo)，具體實(shí)驗(yàn)材料和方法均由每組自行選擇。在隨后制定實(shí)驗(yàn)方案時(shí)，學(xué)生選擇最多的是形態(tài)檢驗(yàn)法和染色法，發(fā)芽法和授粉法由于需要的時(shí)間太長(zhǎng)而很少有人問(wèn)津。

實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也同樣讓人感到欣喜，結(jié)果表明，上述四種染色法對(duì)十字花科植物( 白菜、油菜、蘿卜和二月蘭等) 的花粉均得到比較滿(mǎn)意的結(jié)果，TTC 法和聯(lián)苯胺- 萘酚法對(duì)桃花和梨花的花粉有較好的染色效果，而結(jié)香和白玉蘭的花粉僅對(duì)亞歷山大染色法較為敏感。在比較了多種植物的花粉和染色法以后，通過(guò)一系列的置疑、判斷、比較、選擇以及相應(yīng)的分析、綜合、概括等過(guò)程，由發(fā)散到收斂，學(xué)生得到了不同植物的花粉對(duì)上述不同方法的檢測(cè)效果各異的結(jié)論。學(xué)生普遍反映，這樣得到的知識(shí)比老師在課堂上強(qiáng)調(diào)10 遍的效果還要好很多。通過(guò)自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、自主完成實(shí)驗(yàn)和自主管理實(shí)驗(yàn)，大大激發(fā)了學(xué)生創(chuàng)新思維和創(chuàng)新意識(shí)，讓學(xué)生逐漸掌握思考和解決問(wèn)題的方法，提高了學(xué)生創(chuàng)新實(shí)踐的能力。

隨后，我們對(duì)園藝植物開(kāi)花習(xí)性調(diào)查和有性繁殖園藝植物的常規(guī)品種育種計(jì)劃制定等兩個(gè)設(shè)計(jì)性和綜合性的實(shí)驗(yàn)也實(shí)行了類(lèi)似的探究式教學(xué)改革，也同樣取得了較好的教學(xué)效果。

二、探究式教學(xué)模式提高了教學(xué)效果

學(xué)生的學(xué)習(xí)效果是檢驗(yàn)教師教學(xué)效果的標(biāo)尺。探究式教學(xué)模式是對(duì)傳統(tǒng)的授予式教學(xué)模式的一種改革與補(bǔ)充，它以學(xué)生的自主探究為基礎(chǔ)，使學(xué)生掌握自主學(xué)習(xí)的基本方法，形成運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決實(shí)際問(wèn)題的能力，并逐步廣泛的遷移到一切學(xué)習(xí)和生活領(lǐng)域之中，彌補(bǔ)知識(shí)轉(zhuǎn)化為能力的裂隙，培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力，這與前人的研究結(jié)果基本一致。經(jīng)過(guò)2012-2014 年三個(gè)學(xué)年度的教學(xué)改革實(shí)踐，園藝植物育種學(xué)課程教與學(xué)的方式得到了根本性的改變，教師的責(zé)任由教逐漸過(guò)渡到導(dǎo)，引導(dǎo)學(xué)生積極思考，拓寬了學(xué)生思維，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)學(xué)生的個(gè)人尋找問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力與團(tuán)隊(duì)協(xié)作能力。學(xué)生的學(xué)也由主動(dòng)代替了以往的被動(dòng)，由以前的要我學(xué)變成我要學(xué)。真正體現(xiàn)了學(xué)生的主體地位老師和學(xué)生的平等關(guān)系，拉近了師生之間的距離。針對(duì)不同的情景問(wèn)題，學(xué)生通過(guò)不同的途徑查詢(xún)文獻(xiàn)資料，通過(guò)小組討論和課堂討論，有效地提高了學(xué)生總結(jié)歸納和口頭表達(dá)能力，整個(gè)教學(xué)過(guò)程培養(yǎng)和鍛煉了學(xué)生獲取知識(shí)和運(yùn)用知識(shí)的能力。在近3 年的教學(xué)改革實(shí)踐中，我們還設(shè)計(jì)了一套問(wèn)卷調(diào)查來(lái)檢測(cè)探究式教學(xué)模式的教學(xué)效果，

現(xiàn)將結(jié)果小結(jié)與分析如下。

( 一) 學(xué)生對(duì)探究式教學(xué)改革整體表示滿(mǎn)意根據(jù)對(duì)近3 年的調(diào)查問(wèn)卷進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，2012 年非常滿(mǎn)意的比例是76%，基本滿(mǎn)意的比例是19%; 2013 非常滿(mǎn)意的比例是81%，基本滿(mǎn)意的比例是15%; 2014 年非常滿(mǎn)意的比例是82%，基本滿(mǎn)意的是比例14%。說(shuō)明同學(xué)們對(duì)基于問(wèn)題的探究式教學(xué)改革整體表示滿(mǎn)意，而且，隨著實(shí)施經(jīng)驗(yàn)的進(jìn)一步豐富和對(duì)問(wèn)題做相應(yīng)的調(diào)整，非常滿(mǎn)意的比例呈逐年上升的趨勢(shì)。

( 二) 學(xué)生認(rèn)可所凝練的十個(gè)情景問(wèn)題統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，對(duì)課程所提出的討論主題的平均滿(mǎn)意度高達(dá)92% 以上，說(shuō)明學(xué)生對(duì)所凝練的十個(gè)情景問(wèn)題表示相當(dāng)?shù)恼J(rèn)可。出現(xiàn)這一結(jié)果的原因是上述情景問(wèn)題都是據(jù)本課程的理論和實(shí)驗(yàn)的教學(xué)內(nèi)容，結(jié)合最新的研究熱點(diǎn)和前沿，以及身邊耳熟能詳?shù)默F(xiàn)象和事件而設(shè)計(jì)，因此，獲得高度認(rèn)可也在情理之中。另外，學(xué)生普遍認(rèn)為討論主題的意義是影響探究式教學(xué)成效的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)，從重要性的排序?yàn)?討論主題的意義 文獻(xiàn)閱讀師生討論生生討論，說(shuō)明我們?cè)趯?shí)施探究式教學(xué)方法的時(shí)候必須十分重視情景問(wèn)題的凝練，同時(shí)，增加學(xué)生的文獻(xiàn)閱讀量，加強(qiáng)師生和生生之間的討論也是影響探究式教學(xué)的重要環(huán)節(jié)。鑒于此，我們擬建立一個(gè)情景問(wèn)題庫(kù)，將根據(jù)學(xué)科發(fā)展的情況以及學(xué)生的實(shí)際情況實(shí)行動(dòng)態(tài)篩選和匹配，挑選最適宜的討論主題供學(xué)生選擇。

( 三) 抽簽產(chǎn)生主講人的小改革極大地促進(jìn)了學(xué)生小組內(nèi)的討論

根據(jù)參加小組討論的情況，以及對(duì)近3 年的問(wèn)卷調(diào)查進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，小組領(lǐng)到討論題目以后，一般由23 個(gè)骨干分子領(lǐng)銜查閱文獻(xiàn)和整理研討報(bào)告，學(xué)生小組討論的方式主要是QQ 群、課間和臥談會(huì)等時(shí)間開(kāi)展交流，但面對(duì)面的長(zhǎng)時(shí)間深入討論的機(jī)會(huì)較少。2012 年問(wèn)卷調(diào)查中選擇交流很多和交流一般的有65%，而選擇交流很少和不交流的比例高達(dá)35%; 2013 年選擇交流很多和交流一般的有88%，而選擇交流很少和不交流的比例驟降到12%; 2014 年選擇交流很多和交流一般的有91%，而選擇交流很少和不交流的比例僅9%。2013 和2014 年小組討論時(shí)間大幅增加的原因可能是由于小組主講代表由臨時(shí)抽簽產(chǎn)生而造成的，說(shuō)明教學(xué)改革過(guò)程中適時(shí)適當(dāng)?shù)刈鲂┘?xì)小的程序改正也能顯著提高課程的教學(xué)效果，有著四兩撥千斤之功效。

( 四) 學(xué)生對(duì)探究式教學(xué)所需時(shí)間有所顧慮對(duì)調(diào)查問(wèn)卷進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果顯示，有23%的同學(xué)認(rèn)為探究式教學(xué)占用了太多的時(shí)間，認(rèn)為占用時(shí)間有點(diǎn)多的比例是39%，選擇一般的有33%，僅有5%的人選擇根本不。上述結(jié)果顯示，認(rèn)為需要較多時(shí)間的同學(xué)約占2 /3，說(shuō)明我們所設(shè)計(jì)的情景問(wèn)題的難易度稍偏難。如何把握設(shè)計(jì)情景問(wèn)題的難易程度是目前擺在我們面前的一個(gè)現(xiàn)實(shí)問(wèn)題，所討論的主題既要涉及學(xué)科的前沿，又要難易適中，其標(biāo)準(zhǔn)就是讓學(xué)生跳一跳能夠得著就好。通過(guò)對(duì)本課程的學(xué)習(xí)，學(xué)生全面、系統(tǒng)掌握?qǐng)@藝植物育種學(xué)的基本理論和基本方法，并能應(yīng)用于分析和解決生產(chǎn)中的有關(guān)問(wèn)題。同時(shí)，學(xué)生在科學(xué)的態(tài)度、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯糠椒ǚ矫嬉驳玫搅擞?xùn)練，取得了良好的教學(xué)效果。學(xué)生對(duì)教師的教學(xué)評(píng)價(jià)連續(xù)3 年都在4. 5 分( 5 分制) 以上。

三、問(wèn)題與展望

改變傳統(tǒng)的教學(xué)觀念和教學(xué)方法對(duì)教師和學(xué)生而言都是一個(gè)嚴(yán)重的挑戰(zhàn)，因?yàn)榻虒W(xué)雙方都要花時(shí)間和精力進(jìn)行磨合以適應(yīng)新的教學(xué)模式。眾所周知，近年來(lái)，隨著寬口徑、厚基礎(chǔ)、重素質(zhì)教改方向的確立，一些專(zhuān)業(yè)課程的課時(shí)縮減了很多，園藝植物育種學(xué)課程也由原來(lái)的84 課時(shí)縮減到現(xiàn)在的58 課時(shí)，要在有限的時(shí)間內(nèi)把更多的知識(shí)教授給學(xué)生，必須改變?cè)械慕虒W(xué)方式和教學(xué)觀念。通過(guò)20122014 三個(gè)年度的教學(xué)改革實(shí)踐，園藝植物育種學(xué)課程教學(xué)效果有了明顯的提高，但也存在著一些問(wèn)題和不足，需要在今后的課程教學(xué)過(guò)程中加以不斷地改正和完善。

( 一) 堅(jiān)持有所為、有所不為的原則開(kāi)展探究式教學(xué)改革

研究表明，不是所有的課程和教學(xué)內(nèi)容都適合探究式教學(xué)模式。在本課程的教學(xué)過(guò)程中，一些基礎(chǔ)育種理論和育種方法還是采用授予式的教學(xué)方式，讓學(xué)生先具備一定的專(zhuān)業(yè)理論知識(shí)和技能才能更好地開(kāi)展探究式的學(xué)習(xí)和工作。雖然采用授予式教學(xué)，但在課上也要適當(dāng)注意師生的互動(dòng)，積極調(diào)動(dòng)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。

在理論學(xué)習(xí)方面，如緒論、育種途徑、引種馴化和選擇育種等內(nèi)容是植物育種學(xué)的基本概念和基礎(chǔ)知識(shí)，這些內(nèi)容適宜采用傳統(tǒng)的教學(xué)方式進(jìn)行授課，重組育種和雜交優(yōu)勢(shì)育種中的后部分內(nèi)容可以開(kāi)展探究式教學(xué)，而誘變育種、離體育種和分子育種則完全應(yīng)用探究式教學(xué)模式開(kāi)展教學(xué)。在實(shí)驗(yàn)教學(xué)部分，基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)和驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)一般不適于探究式教學(xué)，而綜合性和自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)是開(kāi)展探究式教學(xué)模式的主要對(duì)象。在課時(shí)允許的前提下，今后我們將嘗試將更多的教學(xué)內(nèi)容引入探究式教學(xué)模式，從而提高其教學(xué)效果。

( 二) 鼓勵(lì)學(xué)生在課堂上積極提問(wèn)

和國(guó)外學(xué)生一有問(wèn)題就舉手提問(wèn)的習(xí)慣相比，我們的學(xué)生在課堂上提問(wèn)的意愿非常低，不愿意在課堂上主動(dòng)展示自己的觀點(diǎn)，只有在教師點(diǎn)名的情況下才會(huì)回答問(wèn)題。對(duì)調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果顯示，產(chǎn)生這一現(xiàn)象的主要原因有: 學(xué)生認(rèn)為打斷教師不禮貌( 22%) 、怕耽誤大家的時(shí)間( 20%) 、怕別人笑話(huà)自己?jiǎn)栴}太簡(jiǎn)單( 12%) 、以上都是( 46%) 。因此，在課程教學(xué)開(kāi)始，我們首先要培養(yǎng)學(xué)生的提問(wèn)意識(shí)，不斷向他們灌輸上課打斷老師講課是認(rèn)真聽(tīng)課的體現(xiàn)的思想，打消他們不敢提問(wèn)的顧慮，實(shí)現(xiàn)課堂上更好的師生互動(dòng)，從而不斷提高課堂的教學(xué)效果。

( 三) 需更加合理地安排小組間的交流與班級(jí)研討時(shí)間

第8篇：表觀遺傳學(xué)的研究意義范文

線(xiàn)粒體DNA非編碼區(qū)由兩個(gè)tRNA基因分離，D-loop區(qū)域就處在這個(gè)非編碼區(qū)中[2]。在線(xiàn)粒體DNA中，D-loop區(qū)是重鏈和輕鏈的復(fù)制起點(diǎn)，也稱(chēng)之為“控制區(qū)ControlRegion”，其進(jìn)化壓力較小，是線(xiàn)粒體DNA基因組序列和長(zhǎng)度變異最大的區(qū)域，Horai等[3]發(fā)現(xiàn)該區(qū)域的基因變化速度比細(xì)胞核DNA和其他細(xì)胞器的基因快5倍，同時(shí)也是進(jìn)化最快的部分。因此，選擇D-loop區(qū)作為鑒定種群遺傳狀況的分子標(biāo)記直接有效。利用D-loop的序列在群體遺傳學(xué)上進(jìn)行分析的工作在20世紀(jì)70年代就已經(jīng)展開(kāi)了，那時(shí)候僅僅用于分析區(qū)域內(nèi)種間的親緣關(guān)系?，F(xiàn)今，D-loop區(qū)已經(jīng)廣泛被用作非常高效的工具來(lái)推斷不同區(qū)域內(nèi)種間或種內(nèi)的親緣關(guān)系和遺傳狀況。D-loop區(qū)中仍然細(xì)分為3個(gè)部分，中央保守區(qū)、終止序列區(qū)和保守序列區(qū)。其中終止序列區(qū)包含了線(xiàn)粒體DNA終止復(fù)制的相關(guān)序列，是變異最大的部分[4]，最具研究和分析價(jià)值。在進(jìn)行數(shù)據(jù)結(jié)果分析時(shí)，由D-loop序列分析得到的單倍型多樣性指數(shù)和核苷酸多樣性是兩個(gè)評(píng)價(jià)群體遺傳資源或者群遺傳多樣性的重要指標(biāo)。

1.1野生群體遺傳多樣性分析

1.1.1D-loop部分序列分析D-loop序列分析中，由于并不是整個(gè)D-loop序列都發(fā)生堿基的插入或者替換，可以采取對(duì)保守序列區(qū)或者終止序列區(qū)的部分區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增。由于這兩個(gè)部分的進(jìn)化比中央保守區(qū)迅速得多，只對(duì)這一區(qū)段的序列進(jìn)行分析也能代表物種的遺傳多樣性和進(jìn)化過(guò)程。張仁意等[5]對(duì)青海4個(gè)不同湖水采集的155尾裸鯉（Gymnocyprisprzewalskii）個(gè)體的線(xiàn)粒體DNA的D-loop區(qū)中部分序列進(jìn)行擴(kuò)增，得到754bp的序列長(zhǎng)度，分析發(fā)現(xiàn)155個(gè)樣本中有34個(gè)單倍型，但4個(gè)群體中可魯克湖群體的單倍型多樣性和核苷酸多樣性遠(yuǎn)低于其他種群；進(jìn)一步的遺傳分化系數(shù)的分析表明，該地區(qū)已經(jīng)產(chǎn)生一定的遺傳分化，但由于地理隔離的原因，系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)結(jié)果還沒(méi)有發(fā)展出明顯的單枝，加之該區(qū)域群體的遺傳多樣性偏低，需要進(jìn)行重點(diǎn)保護(hù)。

鄭真真等[6]對(duì)全球大青鯊（Prionaceglauca）進(jìn)行了D-loop區(qū)中694bp擴(kuò)增分析，采集了來(lái)自中東太平洋、中西太平洋、中東大西洋、西南大西洋和印度洋5個(gè)海域的165尾個(gè)體，分析發(fā)現(xiàn)145個(gè)單倍型，變異程度非常大。進(jìn)一步分析后發(fā)現(xiàn)5個(gè)區(qū)域的大青鯊種群的單倍型和核苷酸都處于較高水平，種質(zhì)資源較好；但是遺傳分化指數(shù)顯示5個(gè)區(qū)域存在強(qiáng)烈的基因交流，種群遺傳分化水平較低。鄒芝英等[7]采集了8尾長(zhǎng)鰭鯉（Cyprinuscarpiovar.longfin），擴(kuò)增得到600bp的部分序列，找到了與終止區(qū)域相關(guān)的6個(gè)特征序列；對(duì)這些特定的區(qū)域分析得到6個(gè)單倍型，13個(gè)變異位點(diǎn)，顯示了較好的種質(zhì)資源狀況，核苷酸多樣性數(shù)值與其他魚(yú)類(lèi)接近，遺傳狀況中等，由于該物種稀有且僅存在偏遠(yuǎn)地區(qū)，保護(hù)珍惜水產(chǎn)動(dòng)物資源已經(jīng)迫在眉睫。向燕等[8]為了了解3種鱘魚(yú)：達(dá)氏鱘（Acipenserdabryanus）、中華鱘（A.sinensi）和史氏鱘（A.schrencki）親魚(yú)的遺傳狀況和遺傳背景，對(duì)線(xiàn)粒體D-loop區(qū)部分序列進(jìn)行分析，擴(kuò)增得到400bp的序列，49尾親魚(yú)個(gè)體一共得到僅18個(gè)單倍型，并且對(duì)于單倍型系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析后，發(fā)現(xiàn)集中在6個(gè)單倍型中，說(shuō)明這些群體很有可能來(lái)自同一母親；不過(guò)各單倍型遺傳距離較遠(yuǎn)，說(shuō)明父本來(lái)自不同的個(gè)體；其結(jié)果提示，在生產(chǎn)中仍要采用不同單倍型進(jìn)行人工繁育，以避免近親而導(dǎo)致種質(zhì)退化。

Kumazawa等[9]研究發(fā)現(xiàn)，D-loop的5＇端和3＇端有串聯(lián)重復(fù)序列，這段的變異速率較快。Abinash等[10]在北美不同區(qū)域采集淡水扁頭鯰（Pylodictisolivaris），對(duì)35bp的串聯(lián)重復(fù)區(qū)進(jìn)行分析檢測(cè)，從美國(guó)35個(gè)水系采集了330尾樣本，分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在東南墨西哥灣的70%樣本出現(xiàn)串聯(lián)重復(fù)的變異，而采自密西西比河95％的樣本和墨西哥灣西南沿岸的扁頭鯰沒(méi)有出現(xiàn)這個(gè)區(qū)域的變異；系統(tǒng)發(fā)育的計(jì)算結(jié)果表明，在70萬(wàn)年和205萬(wàn)年左右出現(xiàn)群體分流；從地理位置上看，密西西比河的支流進(jìn)入墨西哥灣西南沿岸流域，而東南墨西哥灣為另一條流域；該結(jié)果表明種群的遺傳結(jié)構(gòu)受到地域特殊性的影響。D-loop區(qū)部分序列的結(jié)果分析能滿(mǎn)足一定程度的遺傳多樣性和遺傳狀況分析，可以得到可靠的結(jié)果數(shù)據(jù)幫助人們進(jìn)行資源保護(hù)和簡(jiǎn)單的育種工作。隨著科技進(jìn)步和測(cè)序水平的改善，進(jìn)行全序列的測(cè)序漸漸進(jìn)入研究者的視野，全長(zhǎng)序列將獲得更加完整和正確的結(jié)果。

1.1.2D-loop全序列分析D-loop的多態(tài)性一種是來(lái)源于堿基的突變、插入和替換形成的不同單倍型，不僅種間有差異，種內(nèi)個(gè)體間也存在差異，只是重復(fù)的差異小于種間的差異。而且在個(gè)體中D-loop一旦發(fā)生差異，線(xiàn)粒體DNA會(huì)穩(wěn)定地將這種差異遺傳下去，這種差異在個(gè)體間表現(xiàn)為線(xiàn)粒體DNA分子的長(zhǎng)度變異，因此對(duì)D-loop全長(zhǎng)進(jìn)行分析研究更能體現(xiàn)整體的變異程度。肖明松等[11]在淮河淮濱段、鳳臺(tái)段、蚌埠段、洪澤湖段采集84尾野生烏鱧（Ophicephalusargus）進(jìn)行種群資源的研究，分析發(fā)現(xiàn)33個(gè)單倍型，檢測(cè)了單倍型多樣性（h）、核苷酸多樣性（Pi）、遺傳分化指數(shù)（Fst）、遺傳距離以及中性檢驗(yàn)、錯(cuò)配分析和NJ樹(shù)，發(fā)現(xiàn)其h和Pi較高，表明種群平均多態(tài)性相對(duì)較好；但在遺傳距離的分析中發(fā)現(xiàn)所有群體的差異都較小，這可能是由于在淮河流域中不同支流的種流程度較高造成的，所以變異發(fā)生在種內(nèi)，而種群之間的分化較少。董志國(guó)等[12]對(duì)大連、東營(yíng)、連云港、舟山、湛江和漳州6個(gè)地區(qū)的野生三疣梭子蟹（Portunustritubercatus）進(jìn)行D-loop全基因組區(qū)的遺傳多樣性及群體遺傳結(jié)構(gòu)的分析，選擇單倍型多樣性和核苷酸多樣性作為重要指標(biāo)，并加入了群體遺傳分化指數(shù)的分析，進(jìn)行Tajima’sD中性檢驗(yàn)和單倍型間的分子變異分析，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)梭子蟹的遺傳多樣性很高，產(chǎn)生一定的遺傳分化；不過(guò)在系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析中，地理距離對(duì)遺傳距離沒(méi)有顯著的關(guān)系，原因仍需要進(jìn)一步研究。趙良杰等[13]在千島湖汾口、富文、臨岐3個(gè)大眼華鳊（Sinibramamacrops）主要繁殖區(qū)域采集了115尾個(gè)體，對(duì)樣品進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和D-loop序列測(cè)定后，分析形態(tài)主成分和各個(gè)基因遺傳學(xué)分析指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)千島湖各地的大眼華鳊之間有豐富的基因交流，并沒(méi)有形成容易滅絕的小種群，表明各個(gè)地理群體仍然有豐富的遺傳多樣性，面對(duì)一定的災(zāi)害時(shí)有一定的彈性，不過(guò)這樣的良好狀況仍然需要政府和漁民對(duì)該區(qū)域的種質(zhì)資源進(jìn)行保護(hù)。高志遠(yuǎn)等[14]對(duì)海南松濤水庫(kù)南豐鎮(zhèn)、番加鄉(xiāng)、白沙群體的長(zhǎng)臀鮠（Cranoglanisbouderius）的D-loop序列全場(chǎng)進(jìn)行分析，44尾個(gè)體中發(fā)現(xiàn)11個(gè)單倍型，但在分析中發(fā)現(xiàn)單倍型較高，而核苷酸多樣性較低，認(rèn)為是由于海南島偏僻的地理位置難與大陸長(zhǎng)臀鮠進(jìn)行基因交流，推斷在歷史中可能出現(xiàn)過(guò)嚴(yán)重的瓶頸效應(yīng)；中性檢測(cè)也表明沒(méi)有任何整體或局部的種群擴(kuò)張，數(shù)據(jù)皆表明該地域長(zhǎng)臀鮠正處在較危險(xiǎn)的境地，需要進(jìn)行種群的保護(hù)措施。

1.2養(yǎng)殖群體遺傳多樣性分析目前，國(guó)內(nèi)對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖過(guò)程中出現(xiàn)的生長(zhǎng)不良與病害頻繁大多歸結(jié)于飼料與環(huán)境的問(wèn)題。誠(chéng)然，營(yíng)養(yǎng)和免疫是養(yǎng)殖的關(guān)鍵，但是由于人工育種和繁育雜交造成的種質(zhì)資源下降也是重要因素之一。養(yǎng)殖戶(hù)往往在育種過(guò)程中，沒(méi)有考慮到育種群體的遺傳狀況，導(dǎo)致近親雜交，子代產(chǎn)生各種問(wèn)題。徐鋼春等[15]對(duì)灌江納苗養(yǎng)殖刀鱭（Coilianasus）的子三代品種與在淡水生活環(huán)境下湖鱭（C.nasustaihuensis）兩個(gè)群體的遺傳多樣性進(jìn)行了比較和分析，進(jìn)行單倍型和核苷酸分析后，發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖刀鱭的遺傳多樣性要優(yōu)于湖鱭，這可能是由于刀鱭僅是子三代，還未經(jīng)歷大量的人工繁殖和育種，保留了較好的遺傳狀況；而湖鱭由于其陸封型的特點(diǎn)，導(dǎo)致其種質(zhì)資源漸漸下降，需要進(jìn)行放流等活動(dòng)保證種質(zhì)資源。姚茜等[16]對(duì)來(lái)自浙江湖州某公司的養(yǎng)殖群體、緬甸引進(jìn)的群體和兩者雜交的“南太湖1號(hào)”群體的羅氏沼蝦（Macrobrachiumrosenbergii）的D-loop區(qū)進(jìn)行分析，共16尾群體分析得到14個(gè)單倍型，結(jié)果表明緬甸引進(jìn)的群體核苷酸多樣性最高，浙江湖州人工養(yǎng)殖群體的多樣性最低，說(shuō)明人工育種對(duì)遺傳多樣性有較大的影響。通過(guò)遺傳距離和遺傳分化指數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，雜交群體更加偏向本地種群。在今后的育種工作中，可在雜交代中選取優(yōu)秀性狀的沼蝦，與緬甸種群雜交，以獲得更優(yōu)秀的品種，為今后的人工繁育打下基礎(chǔ)。李勝杰等[17]將珠江水產(chǎn)研究所養(yǎng)殖品種大口黑鱸（Micropterussalmoides）與北方和佛羅里達(dá)兩個(gè)野生群體進(jìn)行D-loop區(qū)的遺傳分析，在23尾采集的樣品中，5尾個(gè)體含有兩種單倍型，北方11尾個(gè)體發(fā)現(xiàn)9種單倍型，而佛羅里達(dá)僅有1種單倍型。在遺傳距離分析上發(fā)現(xiàn)，珠江水產(chǎn)研究所的養(yǎng)殖群體與北方群體更加接近。對(duì)于單倍型多樣性和核苷酸多樣性分析，結(jié)果表明養(yǎng)殖群體與國(guó)外種群相比，其遺傳多樣性處于較低水平，需要開(kāi)展種質(zhì)的保護(hù)工作，應(yīng)引入國(guó)外品種進(jìn)行雜交，改善國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖群體的遺傳結(jié)構(gòu)，提高遺傳多樣性，豐富大口黑鱸的種質(zhì)資源。

1.3親緣與起源分析D-loop區(qū)串聯(lián)重復(fù)的現(xiàn)象雖然豐富，但是不同動(dòng)物的重復(fù)位置不一致，重復(fù)的序列和重復(fù)的單元也不一致，所以相近物種之間對(duì)比分析有助于明確不同物種的關(guān)系。郝君等[18]對(duì)烏克蘭鱗鯉（Cyprinuscarpio）、鯽（Carassisauratus）、鰱（Hypophthalmichthysmolitrix）、鳙（Aristichthysnobilis）、草魚(yú)（Ctenopharyngodonidellus）和烏蘇里擬鲿（Pseudobagrusussuriensis）6種不同魚(yú)的線(xiàn)粒體D-loop區(qū)進(jìn)行測(cè)序，分析了種內(nèi)、種間遺傳結(jié)構(gòu)差異，發(fā)現(xiàn)作為分子標(biāo)記對(duì)系統(tǒng)分化效果的差異，6種不同魚(yú)的堿基含量、堿基差異、遺傳距離和系統(tǒng)發(fā)育都有顯著的差異，構(gòu)建的D-loop序列的NJ系統(tǒng)樹(shù)展示了6種魚(yú)的分類(lèi)地位，肯定了D-loop區(qū)比鄰近區(qū)段的tRNA和12sRNA在魚(yú)類(lèi)識(shí)別、分類(lèi)、種類(lèi)鑒定和遺傳多樣性分析上更加可靠。侯新遠(yuǎn)等[19]對(duì)5種蝦虎魚(yú)類(lèi)進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系的研究，分析了河川沙塘鱧（Odontobutispotamophila）、鴨綠沙塘鱧（O.yaluensis）、中華沙塘鱧（O.sinensis）、葛氏鱸塘鱧（Perccottusglenii）及尖頭塘鱧（Eleotrisoxycephala）這6種蝦虎魚(yú)類(lèi)同源長(zhǎng)度約為830bp的D-loop序列，通過(guò)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)和遺傳距離分析，得到6種魚(yú)類(lèi)的親緣關(guān)系即河川沙塘鱧、鴨綠沙塘鱧、中華沙塘鱧、平頭沙塘鱧聚為一支，尖頭塘鱧、葛氏鱸塘鱧和褐塘鱧等聚為另一支，為魚(yú)類(lèi)資源的分類(lèi)和利用提供了基礎(chǔ)。馬波等[20]在額爾齊斯河采集了兩種類(lèi)型的銀鯽（C.auratusgibelio），對(duì)幾種鯽魚(yú)的可量性狀和D-loop區(qū)進(jìn)行分析，得到了優(yōu)勢(shì)種群的生長(zhǎng)性狀，確定了它們的遺傳學(xué)特征和分類(lèi)學(xué)地位，同時(shí)通過(guò)D-loop區(qū)的單倍型共享率研究了兩種鯽的起源和遺傳特征，這些結(jié)果對(duì)我國(guó)將來(lái)進(jìn)行銀鯽育種有很大幫助。Klaus等[21]利用D-loop序列對(duì)歐洲鯉魚(yú)（C.carpio）137的起源進(jìn)行研究。在此之前對(duì)于歐洲鯉魚(yú)也有過(guò)很多關(guān)于起源的研究：Zhou等[22]發(fā)現(xiàn)一些歐洲養(yǎng)殖的鯉魚(yú)起源可能在德國(guó)和歐洲，而俄羅斯主要養(yǎng)殖的鯉魚(yú)起源在亞洲。Zhou等[23]在德國(guó)鏡鯉和伏爾加河的野生鯽魚(yú)利用D-loop區(qū)全序列獲得獨(dú)特的3種單倍型；而Mabuchi等[24]在日本鯉魚(yú)中發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)D-loop區(qū)單倍型與Zhou等報(bào)道的歐洲發(fā)現(xiàn)的單倍型非常相似。Klaus等[21]的研究結(jié)果指出歐洲和中亞所有的鯉魚(yú)品種有一個(gè)共同的祖先，而且有可能是在后冰河時(shí)期傳播到中亞或者歐洲。對(duì)于這種現(xiàn)象，可能是由于在育種過(guò)程中，沒(méi)有進(jìn)行規(guī)范的養(yǎng)殖記錄，導(dǎo)致各種群出現(xiàn)雜交現(xiàn)象。而且，養(yǎng)殖戶(hù)挑選具有優(yōu)勢(shì)性狀的品種進(jìn)行，容易導(dǎo)致其他稀有單倍型的消失，從而使得種質(zhì)資源慢慢下降。

1.4個(gè)體內(nèi)異質(zhì)性分析同一個(gè)體內(nèi)存在多種重復(fù)序列數(shù)目不同從而表現(xiàn)為異質(zhì)。高祥剛等[25]采用克隆技術(shù)，在我國(guó)海域隨機(jī)采集了3頭斑海豹（Phocalargha），每尾個(gè)體任選14個(gè)克隆菌，對(duì)它們的線(xiàn)粒體DNAD-loop區(qū)的終止序列區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序，發(fā)現(xiàn)其個(gè)體內(nèi)存在多種不同的串聯(lián)重復(fù)單位，即存在異質(zhì)現(xiàn)象，說(shuō)明我國(guó)的斑海豹種質(zhì)資源保護(hù)較好，進(jìn)化狀態(tài)比較積極。張四明等[26]在野生的中華鱘種群種間和個(gè)體體內(nèi)檢測(cè)線(xiàn)粒體DNA的長(zhǎng)度變異情況，發(fā)現(xiàn)中華鱘有較多個(gè)體的異質(zhì)性，表現(xiàn)出良好的遺傳多樣性。由此可見(jiàn)，個(gè)體的異質(zhì)存在是導(dǎo)致線(xiàn)粒體DNA中控制區(qū)D-loop長(zhǎng)度變化的主要原因，而個(gè)體的線(xiàn)粒體DNA長(zhǎng)度異質(zhì)性是直接推動(dòng)動(dòng)物物種遺傳多樣性的重要途徑。綜上所述，可以發(fā)現(xiàn)線(xiàn)粒體D-loop區(qū)的序列分析已經(jīng)在水產(chǎn)行業(yè)取得大量進(jìn)展，D-loop區(qū)基因的插入、突變和替換都是影響多樣性的關(guān)鍵，而個(gè)體內(nèi)的異質(zhì)和串聯(lián)重復(fù)的高頻率變化不僅存在于水產(chǎn)動(dòng)物個(gè)體中，也存在于種群內(nèi)，甚至在不同物種之間都對(duì)野生水產(chǎn)動(dòng)物的起源、親緣關(guān)系、遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)和動(dòng)物進(jìn)化程度起著重要的作用。在養(yǎng)殖群體中，D-loop區(qū)的分析正在漸漸起到重要的作用，若結(jié)合微衛(wèi)星、RFLP等其他分子標(biāo)記技術(shù)，將來(lái)對(duì)人工育種和對(duì)親魚(yú)、親蝦的選育工作有重大意義。

2細(xì)胞色素b序列（cytb）

線(xiàn)粒體DNA中編碼蛋白質(zhì)的基因有還原型輔酶I的亞基、ATP合成酶的亞基、細(xì)胞色素c氧化酶的3個(gè)亞基和細(xì)胞色素b[27]。Zardoya等[28]研究認(rèn)為，cytb的進(jìn)化速度適中，適合進(jìn)行種內(nèi)和種間的遺傳分析?，F(xiàn)今利用cytb序列多數(shù)用于種內(nèi)和種間的遺傳分化分析、遺傳圖譜建立和遺傳多樣性調(diào)查，并輔以其他標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行組合分析。王曉梅等[29]獲取中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)cytb序列的PCR產(chǎn)物后，利用DGGE技術(shù)分析了溫州、儀征、江都、南京、盤(pán)錦和合浦地區(qū)的中華絨螯蟹的遺傳多樣性，并與合浦絨螯蟹(E.japonicahepuensis)對(duì)比，發(fā)現(xiàn)中華絨螯蟹與合浦絨螯蟹遺傳距離較大，在親緣關(guān)系上具有顯著的差異，但是仍有部分遺傳標(biāo)記相同，說(shuō)明存在一定的基因交流。

黃小彧等[30]利用cytb序列檢測(cè)了長(zhǎng)江支流貴定與干流合江和宜都的中華倒刺鲃(Spinibarbussinensis)群體的遺傳多樣性，分析群體的遺傳距離，結(jié)合地理因素分析了該物種的種質(zhì)資源現(xiàn)狀，發(fā)現(xiàn)合江的遺傳多樣性最好，而支流群體與干流群體的遺傳分化較大，地理隔離使同一物種的基因交流程度降低。夏月恒等[31]利用cytb序列對(duì)中國(guó)近海3個(gè)地區(qū)的鮸魚(yú)（Miichthysmiiuy）的遺傳多樣性進(jìn)行分析，通過(guò)對(duì)地理環(huán)境和歷史因素的解釋?zhuān)J(rèn)為中國(guó)鮸魚(yú)基因型的單倍型多樣性高和核苷酸多樣性低可能是因?yàn)榉N群在某個(gè)時(shí)期突然擴(kuò)張，使單倍型突變大量產(chǎn)生，但這段時(shí)間對(duì)于提高核苷酸多樣性時(shí)間不足，所以產(chǎn)生了如此差別；且Fst結(jié)果極低，說(shuō)明該地區(qū)遺傳分化程度很低，加上不同地理的單倍型網(wǎng)絡(luò)圖交錯(cuò)呈現(xiàn)，有可能是因?yàn)榉N群由于擴(kuò)張之后還未達(dá)到平衡，需要對(duì)該地區(qū)進(jìn)行保護(hù)。鐘立強(qiáng)等[32]調(diào)查了長(zhǎng)江中下游5個(gè)湖泊的黃顙魚(yú)，利用cytb序列分析了不同地區(qū)遺傳多樣性和遺傳分化的程度，60尾個(gè)體檢測(cè)出37個(gè)單倍型，F(xiàn)st分析顯示這5個(gè)種群的變異大部分都來(lái)自群體內(nèi)，說(shuō)明各個(gè)種群間有一定的基因交流，系統(tǒng)樹(shù)顯示它們沒(méi)有分化成譜系。司從利等[33]從長(zhǎng)江貴定和樂(lè)山兩個(gè)群體的泉水魚(yú)cytb序列分析其遺傳狀況、結(jié)構(gòu)和多樣性程度，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)群體由于三峽大壩的地理因素，已明顯受到嚴(yán)重的影響，出現(xiàn)高度的遺傳分化，建議對(duì)該物種進(jìn)行分區(qū)保護(hù)，提高遺傳多樣性，豐富種質(zhì)資源。

司從利等[34]在廣東、廣西等地基于cytb序列分析了華南居氏銀魚(yú)（Salanxcuvieri）的遺傳現(xiàn)狀，從鄰接樹(shù)上可發(fā)現(xiàn)有一定的分支，認(rèn)為地理因素正在逐漸影響遺傳結(jié)構(gòu)，推測(cè)瓊州海峽的地理位置可能影響廣東、廣西種群間的遺傳交流；中性檢測(cè)結(jié)果表明在更新世晚期發(fā)生擴(kuò)增，地球當(dāng)時(shí)的氣候影響了該種群的遺傳多樣性；根據(jù)現(xiàn)狀，建議分地區(qū)對(duì)該種群進(jìn)行人為保護(hù)，避免出現(xiàn)種質(zhì)退化。李偉文等[35]兩年中在7個(gè)遠(yuǎn)洋捕撈點(diǎn)采集了黃鰭金槍魚(yú)（Thunnusalbacares），擴(kuò)增了cytb部分序列得到663bp，108尾個(gè)體僅有24個(gè)單倍型，且單倍型多樣性和核苷酸多樣性都處于較低水平，群體的遺傳多樣性較差；Fst分析得到變異大多發(fā)生在群體內(nèi)部，表明其遺傳分化程度較低，并且基因交流非常強(qiáng)烈，種質(zhì)資源正在衰退，這與人類(lèi)破壞環(huán)境和大面積捕殺有密切關(guān)系。謝楠等[36]利用cytb對(duì)魴屬（Megalobrama）4種魚(yú)類(lèi)及長(zhǎng)春鳊（Parabramispekinensis）進(jìn)行了系統(tǒng)分類(lèi)。但在結(jié)果分析過(guò)程中僅靠cytb的信息難以準(zhǔn)確將不同品種進(jìn)行區(qū)分，仍需要配合其他標(biāo)記進(jìn)一步研究。

3其他標(biāo)記與組合分析

16SrRNA序列、12SrRNA序列和COI序列在線(xiàn)粒體基因組中變異速度較慢，保守性較高，因此很難由其單獨(dú)作為驗(yàn)證工具來(lái)進(jìn)行遺傳分析，往往需要結(jié)合其他的基因片段，才能同時(shí)作為鑒定種內(nèi)親緣關(guān)系和物種遺傳多樣性程度的工具。劉萍等[37]選取了山東青島中華虎頭蟹（Orithyiasinica）野生群體的16SrRNA和COI基因片段研究其遺傳多樣性，但是發(fā)現(xiàn)16SrRNA變異程度較小，效果不佳；在遺傳距離和系統(tǒng)進(jìn)化研究中，兩種技術(shù)檢測(cè)了不同蟹之間的親緣關(guān)系以及它們的進(jìn)化分化時(shí)間，利用NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)發(fā)現(xiàn)中華虎頭蟹與梭子蟹類(lèi)的親緣關(guān)系最近，并采用“分子鐘”對(duì)4個(gè)蟹類(lèi)的分化時(shí)間進(jìn)行計(jì)算。吳玲等[38]對(duì)沿海6個(gè)群體的白氏文昌魚(yú)（Branchiostomabelcheri）和日本文昌魚(yú)（B.japonicum）分別進(jìn)行COI和16SrRNA序列的研究，發(fā)現(xiàn)兩種魚(yú)種內(nèi)遺傳多樣性較高，但還沒(méi)有明顯的遺傳分化；其中茂名群體和威海群體具有最高的核苷酸多樣性，很有可能為這兩類(lèi)魚(yú)的祖先。

翁朝紅等[39]對(duì)近江蟶（Sinonovacularivularis）、縊蟶（S.constricta）、小刀蟶（Cultellusattenuatus）、尖刀蟶（C.scalprum）和大竹蟶（Solengrandis）的COI和16SrRNA部分序列進(jìn)行測(cè)序和分析，在進(jìn)行遺傳距離和系統(tǒng)演化分析后，結(jié)果表明近江蟶已進(jìn)化至獨(dú)立為一個(gè)種，并且通過(guò)聚類(lèi)分析推斷近江蟶應(yīng)歸屬于竹蟶超科，解決了這幾種蟶分類(lèi)歸屬。郁建鋒等[40]結(jié)合12SrRNA和16SrRNA的序列為太湖流域河川沙塘鱧的分類(lèi)提供了重要的幫助，發(fā)現(xiàn)了大量的變異位點(diǎn)和簡(jiǎn)約位點(diǎn)，而且在兩種標(biāo)記的驗(yàn)證下，比較得出太湖流域河川沙塘鱧與福建流域河川沙塘鱧已經(jīng)存在一定的遺傳差異。同時(shí)，系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析表明，太湖流域河川沙塘鱧與其他鱧已存在遺傳分化差異。王慶容等[41]對(duì)長(zhǎng)江中上游舞陽(yáng)河、烏江、雅礱江、岷江和金沙江5個(gè)野生鲇(Silurusasotus)群體的親緣關(guān)系和遺傳差異進(jìn)行了分析，對(duì)比了核苷酸和單倍型多樣性，發(fā)現(xiàn)舞陽(yáng)群體與其他群體的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。楊慧榮等[42]同時(shí)利用D-loop和cytb的序列對(duì)長(zhǎng)江水系的赤眼鱒（Squoliobarbuscurriculus）進(jìn)行了遺傳多樣性的分析，通過(guò)遺傳變異率、單倍型多樣性等指標(biāo)發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)江赤眼鱒遺傳多樣性較高，種質(zhì)狀況較好；同時(shí)，根據(jù)Fst和分子變異等級(jí)差異分析發(fā)現(xiàn)，不同水系的群體存在明顯的遺傳分化；系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)證明了珠江水系赤眼鱒與長(zhǎng)江水系赤眼鱒正在逐漸分化為兩類(lèi)群體，并提出cytb序列在變異顯著的群體間更能發(fā)揮作用。

孫希福等[43]利用cytb序列和D-loop序列分析了江豚（Neophocaenaphocaenoides）在鼠豚類(lèi)及一角鯨類(lèi)的分類(lèi)地位，系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)表明，江豚的遺傳距離與一角鯨科較為接近，并確定棘鰭鼠海豚、太平洋鼠海豚及黑眶鼠海豚3種群有較近的親緣關(guān)系，否定了之前僅憑借形態(tài)學(xué)的分類(lèi)方式。畢瀟瀟等[44]在某一水產(chǎn)品公司采集了來(lái)自美國(guó)與荷蘭的狹鱈（Theragrachalcogramma）、太平洋鱈（Gadusmacrocephalus）、藍(lán)鱈（Micromesistiuspoutassou）和遠(yuǎn)東寬突鱈（Eleginusgracilis）4種不同屬的鱈魚(yú)，利用16SrRNA、cytb和COI序列比較了它們的序列結(jié)構(gòu)，根據(jù)核苷酸分歧速率以及NJ系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，將太平洋鱈、狹鱈和寬突鱈歸為一支，也顯示了它們較接近的遺傳距離，給分類(lèi)學(xué)提供了非常重要的理論基礎(chǔ)。

4展望

線(xiàn)粒體分子標(biāo)記技術(shù)主要用于物種的遺傳多樣性分析、親緣、親權(quán)分析和物種進(jìn)化程度分析。該基因組功能重要且能穩(wěn)定遺傳，是物種個(gè)體基因組中變化速度較快且保留較好的部分。對(duì)D-loop區(qū)的序列進(jìn)行測(cè)序、比對(duì)、計(jì)算和分析后能得到物種的種屬分類(lèi)、遺傳結(jié)構(gòu)、歷史發(fā)育情況和遺傳多樣性狀態(tài)。而且，D-loop區(qū)穩(wěn)定的母系遺傳，使得分析起源有較好可靠性，聚類(lèi)分析結(jié)果準(zhǔn)確。同時(shí)，細(xì)胞色素b和16SrRNA等序列雖然進(jìn)化速度較慢，但其穩(wěn)定性的特征可以得到較好保留，獲得的插入、替換和缺失等突變可以持續(xù)遺傳，以作為數(shù)據(jù)分析的可靠依據(jù)。在進(jìn)行不同情況的分析時(shí)，可以結(jié)合一到兩種分子標(biāo)記技術(shù)，作為重要的輔助參考標(biāo)記。

綜上，在水產(chǎn)行業(yè)的遺傳分析中，野生群體的遺傳多樣性是將來(lái)進(jìn)行育種和引進(jìn)的關(guān)鍵，通過(guò)線(xiàn)粒體分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)野生經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)動(dòng)物的遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性分析是高效、準(zhǔn)確和可靠的。其中單倍型多樣性和核苷酸多樣性表現(xiàn)了分子結(jié)構(gòu)的變異程度，體現(xiàn)了野生群體種質(zhì)資源的現(xiàn)狀；遺傳分化特征能表現(xiàn)群體的基因交流狀況，表明了群體間自由的自由度；分子變異等級(jí)分析可以讓我們了解不同地域群體突變的來(lái)源，表現(xiàn)了群體遺傳結(jié)構(gòu)的差異；中性檢測(cè)等分析從分子層面揭示了魚(yú)類(lèi)的系統(tǒng)發(fā)育狀況。

第9篇：表觀遺傳學(xué)的研究意義范文

[關(guān)鍵詞] 干擾素調(diào)節(jié)因子8；骨髓增生異常綜合征伴原始細(xì)胞增多；外周血RNA；逆轉(zhuǎn)錄PCR；實(shí)時(shí)熒光定量PCR

[中圖分類(lèi)號(hào)] R551.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2017）09-0043-05

Study on expression of interferon regulatory factor 8 in myelodysplastic syndromes with excess blasts subtype

XU Xudong1 XIAO Xiangyang1 CHEN Long1 WANG Jianchao2

1.Zhejiang Chinese Medicine University Second Clinical Medical College， Hangzhou 310053， China； 2.The Second Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University， Hangzhou 310005， China

[Abstract] Objective To investigate whether the expression of interferon regulatory factor 8（IRF-8） is abnormal in myelodysplastic syndromes with excess blasts （MDS-EB） subtype and to analyze its correlation with MDS-EB. Methods A total of 30 experimental specimens from three groups were collected. 20 cases were MDS-EB case specimens and divided into MDS-EB1 group and MDS-EB2 group. 10 cases of healthy physical examination were as healthy control group. All the samples were collected from the peripheral venous blood of the subjects. The total RNA was extracted from the peripheral blood immediately after the collection. The expression level of IRF-8 mRNA was detected by real-time fluorescence quantitative PCR after reverse transcription PCR. The average expression of each group was expressed as RQ（x±s）. Results The mean RQ values of real-time fluorescent quantitative PCR in the three groups were MDS-EB1（0.59±0.08）， MDS-EB2（0.26±0.10）， healthy control（1.20±0.26）， and there was significant difference among the three groups（P

[Key words] Interferon regulatory factor 8； Myelodysplastic syndromes with excess Blasts； Peripheral blood RNA； Reverse transcription PCR； Real-time quantitative PCR

骨髓增生異常綜合征（myelodysplastic syndromes，MDS）是一組源于髓系造血干細(xì)胞的克隆性疾病。根據(jù)WHO 2016年出版的診斷指南，MDS目前主要有8種亞型[1]，其中病情程度較為嚴(yán)重的亞型是骨髓增生異常綜合征伴原始細(xì)胞增多（MDS-EB）。MDS-EB占所有MDS亞型中發(fā)病的34.2%[2]。MDS-EB的骨髓原始細(xì)胞數(shù)目可達(dá)到5%～19%，根據(jù)MDS國(guó)際預(yù)后積分系統(tǒng)（IPSS）的評(píng)價(jià)，MDS-EB一般可劃分為中危或高危，平均轉(zhuǎn)白率接近40%[3]，其發(fā)病及轉(zhuǎn)白過(guò)程中，可存在多種基因位點(diǎn)的突變和相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)沉默，但其機(jī)制尚不明確。

干擾素調(diào)節(jié)因子（interferon regulatory factor，IRF）是一種具有抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等多種功能的細(xì)胞因子[4]，IRF-8是其重要的家族成員之一，在腫瘤發(fā)病以及抗腫瘤相關(guān)免疫中具有重要作用[5，6]。在血液腫瘤方面，IRF-8表達(dá)缺失是慢性髓細(xì)胞性白血?。╟hronic myelogenous leukemia，CML）發(fā)病的重要分子事件，大多數(shù)CML患者的IRF-8 mRNA表達(dá)嚴(yán)重缺乏[7]。而同樣作為血液腫瘤疾病的MDS-EB，目前還未有與IRF-8表達(dá)相關(guān)的研究報(bào)道。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年12月～2016年12月收集浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院血液科住院的MDS-EB患者20例作為研究對(duì)象，并根據(jù)臨床資料分為MDS-EB1組和MDS-EB2組。MDS-EB1組樣本來(lái)自臨床確診的MDS-EB1患者，骨髓報(bào)告提示原始細(xì)胞數(shù)>5%且10%且

1.2方法

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定外周血單個(gè)核細(xì)胞IRF-8 mRNA的表達(dá)水平。

1.2.1總RNA抽提 使用肝素抗凝管采集新鮮外周血，自然沉淀后收集上清液，1000 rpm離心15 min，分裝上清，-80℃凍存。沉淀后的細(xì)胞部分以PBS洗滌，F(xiàn)icoll分離外周血單個(gè)核細(xì)胞后，迅速進(jìn)行總RNA抽提。

1.2.2 OD260/OD280 抽提總RNA后，取2 μL總RNA樣品，測(cè)定260 nm、280 nm的吸光值，計(jì)算OD260/OD280，測(cè)定其純度和濃度。

1.2.3 IRF-8的相對(duì)表達(dá)量 使用SYBR熒光染料試劑盒對(duì)樣本進(jìn)行定量分析，每個(gè)樣本重復(fù)3次。引物由上海生工生物技術(shù)公司合成。IRF-8引物序列：上游引物5’-TTGTTGCCAGGAAGATTAG-3’，下游引物5’-CAAAGGAGAAAGGAGGACA-3’。計(jì)算機(jī)自動(dòng)Ct分析法獲得各個(gè)反應(yīng)孔的Ct值，計(jì)算不同樣本的平均Ct值，應(yīng)用Ct法計(jì)算表達(dá)量。IRF-8用內(nèi)參基因GAPDH進(jìn)行校正，應(yīng)用Step One Plus 2.2.3軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，根據(jù)公式2-Ct（RQ）計(jì)算IRF-8的相對(duì)表達(dá)量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用方差分析，再采用LSD-t檢驗(yàn)行兩兩比較，P

2結(jié)果

2.1 總RNA提取濃度檢測(cè)

對(duì)30個(gè)標(biāo)本進(jìn)行總RNA提取后進(jìn)行濃度測(cè)定，各組平均濃度分別為MDS-EB1組（642±199）ng/μL，MDS-EB2組（495±110）ng/μL，健康φ兆椋514±88）ng/μL，具體數(shù)值見(jiàn)表3。各標(biāo)本濃度符合進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)要求。

2.2實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果

通過(guò)對(duì)三組樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，用內(nèi)參基因GAPDH對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正。檢測(cè)結(jié)果平均RQ值：MDS-EB1組（0.59±0.08），MDS-EB2組（0.26±0.10），健康對(duì)照組（1.20±0.26），具體數(shù)值及表達(dá)水平見(jiàn)表4和圖1。

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)三組數(shù)據(jù)進(jìn)行成對(duì)樣本檢驗(yàn)，三組實(shí)驗(yàn)樣本間表達(dá)量存在顯著差異（P

3討論

迄今為止，對(duì)于MDS發(fā)病及其演變機(jī)制尚無(wú)明確定論，但一般認(rèn)為骨髓免疫異常、基因水平改變、遺傳學(xué)異常和細(xì)胞凋亡過(guò)度等是導(dǎo)致MDS骨髓造血干細(xì)胞克隆性病變的四大重要因素。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于MDS的分子診斷研究已經(jīng)逐漸成為熱點(diǎn)，在WHO最新出版的2016年MDS診斷指南中，提及了9種在MDS中80%～90%常見(jiàn)基因異常，包括SF3B1、TET2、SRSF2、ASXL1、DNMT3A、RUNX1、U2AF1、TP53和EZH2[1]。其中，SF3B1作為骨髓增生異常綜合征伴環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多（myelodysplastic syndrome with ring sideroblast，MDS-RS）非常重要的一個(gè)分子突變位點(diǎn)，對(duì)于疾病的診治具有重要意義[8]。但另一方面，與其他血液腫瘤不同，目前臨床上反應(yīng)MDS療效的生物標(biāo)記物還非常有限[9]，尤其在MDS-EB這一亞型方面。

IRF-8是IFN-γ調(diào)控因子家族的成員，對(duì)于髓系細(xì)胞生成非常重要[10]，其作為IFN-γ/STAT1信號(hào)通路的關(guān)鍵分子，參與JAK/STAT的調(diào)控過(guò)程[11]，并介導(dǎo)Fas、Bax、FLIP、JAK1和STAT1的表達(dá)實(shí)現(xiàn)實(shí)體瘤細(xì)胞凋亡[12，13]。Watanabe T等[14]也在IRF-/-的小鼠實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，IRF-8在調(diào)節(jié)髓細(xì)胞生成、發(fā)展分化及生長(zhǎng)過(guò)程中起著重要的決定性作用。另外也證實(shí)了IRF-8在急性髓系白血?。╝cute myelogenous leukemia，AML）、CML中的腫瘤抑制功能，恢復(fù)IRF-8的表達(dá)可拮抗Bcr/Abl的致瘤性作用[15]。

本研究將IRF-8運(yùn)用到MDS-EB中，通過(guò)檢測(cè)其mRNA的表達(dá)水平分析IRF-8的表達(dá)是否異常。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示相較于健康對(duì)照組，MDS-EB組的表達(dá)水平顯著降低，表明IRF-8在MDS-EB發(fā)病過(guò)程中表達(dá)受到明顯抑制，提示IRF-8可能是一種MDS-EB的抑制基因，對(duì)MDS-EB發(fā)病具有抑制作用。另外MDS-EB組間對(duì)比顯示MDS-EB2中IRF-8的表達(dá)水平比MDS-EB1更低，這可能與IRF-8調(diào)節(jié)骨髓細(xì)胞生成、促進(jìn)髓細(xì)胞分化成熟的作用有關(guān)[16]。因此IRF-8的表達(dá)抑制可能會(huì)造成骨髓細(xì)胞的成熟障礙，從而導(dǎo)致原始細(xì)胞數(shù)量增加，而原始細(xì)胞數(shù)量的增加與MDS-EB的發(fā)病和轉(zhuǎn)白都具有密切關(guān)聯(lián)，提示IRF-8的表達(dá)水平對(duì)于MDS-EB的疾病進(jìn)展具有重要提示作用。

本研究中發(fā)現(xiàn)IRF-8在MDS-EB中表達(dá)存在抑制，而這種抑制可能涉及多種分子機(jī)制，并且與腫瘤的發(fā)病發(fā)展相關(guān)。在一些實(shí)體瘤中，異常甲基化是腫瘤發(fā)病的重要原因之一，實(shí)驗(yàn)研究表明，鼻咽癌和消化道腫瘤中，IRF-8啟動(dòng)子的異常甲基化會(huì)導(dǎo)致IRF-8表達(dá)抑制[17]，在腎細(xì)胞癌（RCC）中IRF-8作為功能性腫瘤抑制因子也經(jīng)常發(fā)生甲基化[18]，而婁曄等[19]發(fā)現(xiàn)MDS-EB存在高甲基化狀態(tài)，這可能與IRF-8的表達(dá)抑制相關(guān)。當(dāng)然除甲基化外，組蛋白修飾等表觀遺傳機(jī)制也參與IRF-8的抑制表達(dá)。Banik等[20]研究發(fā)現(xiàn)IRF-8對(duì)組蛋白脫乙酰酶抑制劑的抗腫瘤活性具有重要作用，并且確認(rèn)了IRF-8-MMP3新的腫瘤發(fā)病機(jī)制。Wonyong Lee等[21]研究表明甲基化試劑聯(lián)合組蛋白脫乙酰酶抑制劑才能恢復(fù)IRF-8 mRNA水平的表達(dá)，這說(shuō)明多種IRF-8的抑制機(jī)制可能存在多種控制中心。而在對(duì)IRF8-/-的小鼠模型恢復(fù)IRF-8表達(dá)能力后，證實(shí)IRF-8對(duì)AML和CML具有腫瘤抑制功能。因此，IRF-8對(duì)于MDS-EB也可能具有重要的抑制作用。

目前，一些腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)研究主要用于抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，從而達(dá)到緩解疾病的效果。如華蟾素就具有體內(nèi)外抑制人胰腺癌細(xì)胞增殖作用[22]，而基于多信號(hào)通路報(bào)告基因?qū)τ谶@類(lèi)藥物抑制腫瘤進(jìn)展的分子機(jī)制研究具有重要作用。IRF-8作為多種細(xì)胞信號(hào)通路當(dāng)中的關(guān)鍵分子，其表達(dá)和抑制對(duì)于腫瘤進(jìn)展及藥物療效都具有重要的提示意義。因此進(jìn)一步研究IRF-8的分子機(jī)制不僅能對(duì)MDS-EB的靶向治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，還能對(duì)于華蟾素等腫瘤抑制藥物在抑制腫瘤過(guò)程中的分子作用機(jī)制提供研究?jī)r(jià)值。

另一方面，在MDS-EB的發(fā)病機(jī)制上，除遺傳學(xué)異常以外，骨髓免疫異常也被認(rèn)為是MDS-EB發(fā)病的一個(gè)重要原因。而骨髓免疫異常也是免疫相關(guān)性全血細(xì)胞減少癥（immuno-related pancytopenia，IRP）的主要發(fā)病原因。這兩種疾病都具有骨髓造血異常、貧血等相似的臨床癥狀，因此在臨床鑒別上具有一定難度。IRP的發(fā)病機(jī)制一般認(rèn)為與T淋巴細(xì)胞的調(diào)控異常有關(guān)，并伴有TH1、TH2、TH17陽(yáng)性細(xì)胞比例異常[23，24]。而IRF-8在T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞的誘導(dǎo)分化上具有重要作用[25-28]，并且具有抑制Th17細(xì)胞分化的作用。所以，IRF-8不僅在MDS-EB中存在異常表達(dá)，也可能在IRP中也有異常表達(dá)，因此進(jìn)一步研究IRF-8的作用與功能，對(duì)于這兩種疾病發(fā)病機(jī)制的研究和鑒別均具有重要價(jià)值。

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