簡單的美麗精選(九篇)

前言：一篇好文章的誕生，需要你不斷地搜集資料、整理思路，本站小編為你收集了豐富的簡單的美麗主題范文，僅供參考，歡迎閱讀并收藏。

第1篇：簡單的美麗范文

作為學(xué)校教育，我們的教育目的明確，大家有綱可行。但單靠學(xué)校教育是遠遠不夠的，現(xiàn)在大家都非常重視學(xué)校教育向家庭教育的延伸。學(xué)校每一學(xué)期都能認真組織好學(xué)生家長的培訓(xùn)活動，使家長朋友們能用科學(xué)的教育方法來做好家庭教育。作為一位德育工作者，你面對數(shù)十個學(xué)生，也似乎面對數(shù)十個家庭，他們有的讓你心悅誠服，有的讓你焦慮擔(dān)憂……那該如何去應(yīng)對，如何去引導(dǎo)家長用簡單的教育來啟迪孩子的心智呢？

一、嚴厲教育是危險教育，要學(xué)會放下，學(xué)會尊重

俗話說“棍棒底下出孝子”。這句話在當(dāng)前形勢下已經(jīng)不成立了。兒童是脆弱的，他們的成長需要鼓勵，不需要懲罰，一切嚴厲的對待都隱藏著某種傷害。我們的父母不僅應(yīng)該放下手中的棍棒，更要放下心中的棍棒，心中無棍棒比手中無棍棒更重要。寬容而飽含真誠的教育，總是最美的、最動人的，對孩子也最有影響力，也是最簡單的教育。

我班有個小吳同學(xué)，我剛接手此班就有很多同事告訴我：“你切莫惹惱，否則后果自負。”確實也是如此。開始的一年中，無論是同學(xué)還是老師，只要有一點不順?biāo)?，他要么跟同學(xué)打架（掀翻同學(xué)桌子、揮拳打人），要么自虐（用頭撞墻、用剪刀剪衣服），要么自個跑出教室……班主任老師實在無奈喊他父母來學(xué)校，也毫無用處。他甚至可以向其母揮拳。面對如此場景，我有點吃驚，到底是什么讓他如此肆無忌憚？后來經(jīng)過多次家訪，才了解了原委：其父親脾氣暴躁，對孩子經(jīng)常打罵，長時間下來小吳就學(xué)會了仇恨。要改變小吳，必須先改變其父母的教育理念。我多次與他們聯(lián)系，告訴他們：“身教重于言教”是教育中的一條被時間和無數(shù)事件驗證過的真理性的結(jié)論，雖然嚴厲教育本身也是一種示范，但如果成年人對孩子拿出的是經(jīng)常性的批評和打罵，怎么能培養(yǎng)出孩子的友善與平和呢？

最后我跟他的家長約定：只要孩子不犯原則性的錯誤，你們就不得打罵，要心平氣和地跟他說。實在不行，可以跟老師說，我們來處理。學(xué)校發(fā)生的事，我們老師解決。就這樣，一學(xué)期下來，小吳碰到事似乎能冷靜處理了，當(dāng)感到委屈時，他獨自趴在桌上，不再揮拳揍人了。我在課上、課下也經(jīng)常有意無意地表揚他。

后來聽他奶奶說：“自從老師跟他父母談了后，他父親確實改變了很多。下班回家能靜下心和孩子聊天，聽孩子說說學(xué)校的事。父子倆有時還殺幾盤象棋。這在以往是根本不會發(fā)生的。”是啊，隨著孩子的長大，越來越需要家長的尊重。家長應(yīng)該放下“架子”，碰到?jīng)_突時，不能在孩子面前放縱自己的情緒，要先退一步，想想在哪里沒有好好理解孩子，自己應(yīng)該如何改變，從自己身上找問題，而不是總把問題都推到孩子身上，更不能用懲罰的方式來解決，要學(xué)會尊重。

二、習(xí)慣教育是順應(yīng)教育，多身教少言教

習(xí)慣對于一個人確實重要。杜威指出，“人們在對‘習(xí)慣’的理解中有一種錯誤，把習(xí)慣等同于機械的和外部的動作模式，而忽視智力的和道德的態(tài)度”?，F(xiàn)在我們的教育似乎也出現(xiàn)了偏差，我們的孩子事事都聽命于一個成天教導(dǎo)他的權(quán)威，疲于應(yīng)付，他的能量無法聚集，且越來越不會動腦筋了。

我在和孩子們聊天中獲悉：在休息日，有的家長會為孩子安排各類輔導(dǎo)課，還有的布置大量的課外習(xí)題。孩子們雖怨氣連天，但迫于無奈只得疲于應(yīng)付。而有的家長卻放縱孩子，或者認為孩子已大了，可以自己處理事情了，或者是因為自己工作忙，無暇顧及……對于孩子的學(xué)業(yè)也只是隨性問一下，有的甚至問都不問，任其玩耍，或直接把責(zé)任丟給了爺爺奶奶們。

針對這一現(xiàn)象，我通過家長會、家訪等多種形式和那些家長取得聯(lián)系，在孩子習(xí)慣的培養(yǎng)上共商對策。我們共同遵循“順應(yīng)自然，適當(dāng)推動”的習(xí)慣培養(yǎng)原則。要求家長做到：①要從孩子所有的壞習(xí)慣中看到自己的壞習(xí)慣，然后加以改善；②如要培養(yǎng)某個好習(xí)慣，要用正面的或暗示的方法，杜絕批評和責(zé)罰；③要擔(dān)當(dāng)起自己的責(zé)任，要有始終統(tǒng)一的言行，尤其要做出榜樣，多身教，少言教。

一階段試下來，我們班的學(xué)生真的改變了不少。也許是因為他們內(nèi)心沒有了家長們的壓力，能輕松面對學(xué)業(yè)，不再為自己作業(yè)或考試中的小過失感到羞愧和恐懼，也不會為成績的學(xué)習(xí)優(yōu)劣患得患失，他們能把注意力放在發(fā)現(xiàn)問題和解決問題上了，體會到學(xué)習(xí)的樂趣，也產(chǎn)生主動的愿望。在學(xué)校能得到了其他任課老師的肯定，孩子們在學(xué)校組織的各種比賽中也能榜上有名，為班級爭得了榮譽。

特別是小凱同學(xué)，以往只要在家，他都會端坐在電腦旁玩游戲，甚至在吃飯時間也不愿下線。他奶奶看叫他不動，怕餓了寶貝孫子，愉快地把飯碗端給他，讓他一邊吃一邊玩，不讓孩子鬧別扭。這樣的事經(jīng)常發(fā)生，其父母也是電腦迷。雖然大家都知道玩電游，會缺少運動，眼睛也會疲勞，但還是會樂此不疲?，F(xiàn)在小凱的父母能認識到自己的職責(zé)，也樂于和孩子一起改變。他們約定每周玩一次電腦游戲，大家相互監(jiān)督。其余時間隨自己合理分配：看書、下棋、散步……都可以。小凱在學(xué)校運動會上，為班級爭得了兩個第一名，還代表學(xué)校參加市局比賽呢。

第2篇：簡單的美麗范文

2、碗中倒入50g糯米粉、15g玉米淀粉、25g白糖，加入85g牛奶，攪拌均勻，過一遍篩，蓋上保鮮膜，用牙簽扎幾個孔，放入鍋中蒸20分鐘。

3、蒸好后取出，放入10g黃油融化，揉成面團，取適量糯米粉炒至微黃，面團平均分為6份，裹上熟糯米粉，搟成薄片。

4、150g淡奶油加入10g白糖打發(fā)，取一張面皮擠上一層奶油，放入奧利奧碎，再擠上一層奶油，收口包好即可。

第3篇：簡單的美麗范文

關(guān)鍵詞:廣播媒體 績效管理 功能重塑 實踐

在深化文化體制改革中,如何調(diào)動起媒體人的崗位意識已成為業(yè)內(nèi)普遍關(guān)心的問題。眾所周知,隨著我國網(wǎng)民人數(shù)的持續(xù)增長,閱讀網(wǎng)絡(luò)新聞已成為他們獲取外界信息的首要方式。從而,使得傳統(tǒng)廣播形式的新聞面臨十分尷尬的局面。且不說它受到網(wǎng)絡(luò)新聞的沖擊,就算沒有網(wǎng)絡(luò)新聞也會受到電視新聞形式的挑戰(zhàn)。由此可見,新時期惟有調(diào)動全體廣播人的創(chuàng)新潛力,才有可能在日益豐富的資訊形式下獲得生存空間。

一、媒體單位崗位特征分析

廣播媒體單位的崗位設(shè)置,仍然遵循新聞單位的基本職能結(jié)構(gòu)。為了簡化分析內(nèi)容并不影響分析結(jié)果,這里僅就記者、編輯人員、廣告人員、主持人等四個崗位進行分析。

1.記者崗位分析

受到廣播新聞覆蓋范圍的決定,廣播媒體的記者每天都須面對同城或某一區(qū)域的突發(fā)事件進行采訪,因這些事件與當(dāng)?shù)孛癖娚a(chǎn)、生活密切相關(guān),使得新聞采訪體現(xiàn)出密集化、繁瑣化、隨機化的特點。不難看出,這些特點將增大記者崗位的工作量,且無法保證所有新聞素材都具有報道價值。

從以上描述中可以發(fā)現(xiàn),在績效管理的功能發(fā)揮上應(yīng)著眼于激發(fā)記者崗位意識上來。對于新聞線索的篩選和洞察事件的代表性方面,需要他們的職業(yè)敏感性來推動。

這里的編輯人員可界定為組稿和撰寫新聞的員工,其崗位與記者崗位形成了緊密的關(guān)聯(lián)性。受到記者崗位特點的影響,編輯人員崗位仍然面臨著組稿壓力。同時,受到廣播新聞形式的作用,對于稿件內(nèi)容的編排和字數(shù)控制等都與其它媒體新聞不同。目前,在接收廣播新聞群體日益同質(zhì)化的情況下,也對新聞內(nèi)容的選取提出了更高的要求。惟有適應(yīng)市場需求才能順利銷售出自己的產(chǎn)品,而新聞信息就是廣播媒體的產(chǎn)品。這就需要編輯人員走出編輯室,深入到目標(biāo)聽眾中間去掌握他們所喜聞樂見的新聞內(nèi)容是什么。從而,在績效管理的功能發(fā)揮上則應(yīng)促使編輯人員與聽眾間形成良性互動。

3.廣告人員崗位分析

眾所周知,廣播媒介體的廣告業(yè)務(wù)已成為其獲得經(jīng)營利潤的重要來源。從這個角度來看,廣告人員崗位就顯得格外重要。實踐表明,通過廣播所的廣告信息往往具有很強的針對性,如針對老年人和司機群體等。從商業(yè)角度來看,廣告人員就應(yīng)在多元目標(biāo)導(dǎo)向下來應(yīng)對廣告需求。其中的一個目標(biāo)就是社會目標(biāo),即應(yīng)本著對公眾負責(zé)的態(tài)度,先期核實廣告內(nèi)容的真實性,特別對于涉及老年人醫(yī)藥保健產(chǎn)品的宣傳就更需謹慎。這目標(biāo)的實現(xiàn),將為廣播媒體在今后的行業(yè)競爭中獲得良好的社會口碑。那么在績效管理的功能定位上,就應(yīng)激發(fā)廣告人員的社會責(zé)任意識,而借助懲戒機制來規(guī)制可能出現(xiàn)的機會主義行為。

4.主持人崗位分析

正是因為廣播新聞的覆蓋范圍有限,因此,在節(jié)目的編排上也較其它媒體更多地使用互動。這時,主持人崗位已不單單是展開新聞解讀的角色了,其還需要與不同的聽眾進行信息互動。從目前的節(jié)目內(nèi)容來看,以反映當(dāng)?shù)貙嶋H問題的互動節(jié)目很受聽眾喜歡。然而,由于所反映事件的多樣性、復(fù)雜性和專業(yè)性,也不斷對主持人的知識結(jié)構(gòu)形成了挑戰(zhàn)。為此,建立自主學(xué)習(xí)意識以及學(xué)習(xí)型團隊就顯得十分必要。從而,這也為績效管理的功能發(fā)揮提供了切入點。

二、崗位特征驅(qū)動下的功能重塑

根據(jù)馬斯洛的“需求層次理論”可知,單純利用薪酬體制設(shè)計來提升員工的工作熱情面臨著極限;并且,忽略精神層面的績效管理功能定位也不利于團隊成員的穩(wěn)定性。具體而言,崗位特征驅(qū)動下的功能重塑可從以下四個方面展開:

1.針對記者崗位的功能重塑

結(jié)合他們的崗位特點,崗位意識可概括為:良好的工作態(tài)度、積極的工作動機以及團隊精神、進取精神等要素。不難理解,這些屬于記者思想意識中的要素,主要仍取決于他們的個人職業(yè)素養(yǎng)。通過績效管理體系的適應(yīng)性調(diào)整,也能推進上述意識的形成。

(1)績效管理目標(biāo)方面。改變傳統(tǒng)“計件管理”突出量的弊端,而在人本原則下以新聞素材質(zhì)量作為績效管理的目標(biāo),就將增強記者的工作主動性,且提升后續(xù)工作的水平。因記者和編輯崗位間的強關(guān)聯(lián)性,在績效管理中可以引入團隊管理目標(biāo),即將記者和編輯作為整體來考核他們的工作業(yè)績。從而建立兩種崗位間的監(jiān)督態(tài)勢,對記者的工作施加積極影響。

(2)績效管理手段方面。績效管理手段仍然以一系列考核指標(biāo)為參照,將事后效果與指標(biāo)相比較而得出考核結(jié)論。在增強記者崗位意識的要求下,應(yīng)加大評價新聞素材質(zhì)量水平的權(quán)重。包括新聞素材的影響力、時效性以及收聽人群的覆蓋面等。實施考核的形式應(yīng)包括記者自評、同行評價、團隊成員評價等方面。

不難看出,編輯崗位離新聞環(huán)節(jié)又近了一步。結(jié)合上述崗位分析結(jié)論可得,他們須與聽眾之間建立起信息交流機制,從而提高在新聞稿件內(nèi)容編排和素材選擇上的專業(yè)技術(shù)水平。因此,在功能重塑上仍然可以從績效管理目標(biāo)和手段上進行解讀。

(1)績效管理目標(biāo)方面。促使編輯人員走出去、到聽眾中去,則成為目標(biāo)定位的出發(fā)點。其功能重塑就表現(xiàn)在,以突出新聞稿件的技術(shù)指標(biāo),轉(zhuǎn)換到以聽眾對新聞稿件的樂聞程度上來。樂聞程度的高低可以通過聽眾每周的收聽次數(shù)、新聞的影響程度等要素體現(xiàn)出來。

(2)績效管理手段方面。這里主要涉及到考核指標(biāo)的重構(gòu)與權(quán)重的配置。為了促使編輯人員與聽眾建立起穩(wěn)定的聯(lián)系,可將“聽眾對新聞打分”引入到考核指標(biāo)之中。打分的指標(biāo)體系在目標(biāo)方面已經(jīng)勾勒出來,這里應(yīng)將聽眾評價結(jié)果與編輯人員的績效獎金掛鉤。

第4篇：簡單的美麗范文

關(guān)鍵詞：冷鮮梅條肉；假單胞菌（Pseudomonas）；預(yù)測模型

中圖分類號：TS251.1 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）18-4473-03

梅條肉是豬背脊兩側(cè)的肉，營養(yǎng)價值高，是冷鮮肉銷售市場中較暢銷的一類肉制品。假單胞菌（Pseudomonas）屬于嗜冷菌，其在有氧條件下是引起冷鮮肉腐敗的主要微生物[1，2]。近些年，應(yīng)用食品預(yù)測微生物學(xué)可評估食品貨架期和安全性[3]。目前，研究微生物生長預(yù)測模型都是以液體培養(yǎng)基為基質(zhì)而未考慮食品體系的復(fù)雜性[4，5]。對冷鮮肉、水禽等食品中主要腐敗微生物生長預(yù)測模型[6，7]研究較多，并形成相應(yīng)模型[8-10]。本試驗研究托盤包裝冷鮮梅條肉中假單胞菌的一級和二級生長預(yù)測模型，為冷鮮肉評估風(fēng)險概率和確定微生物危害提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料和試劑 試驗所用冷鮮梅條肉購于武漢市常青花園周黑鴨專營店；CFC瓊脂購于青島海博生物技術(shù)有限公司，氯化鈉（優(yōu)級純）購于國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

1.1.2 主要儀器 CP214（C）型電子天平[奧豪斯儀器（上海）有限公司]、LRH-100C型低溫培養(yǎng)箱 （上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、DHP-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、DNP-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏試驗設(shè)備有限公司）、LRH-150-S恒溫恒濕培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療器械廠）、SW-CJ-2FD型雙人單面凈化工作臺（蘇州凈化設(shè)備有限公司）、手提式蒸汽不銹鋼消毒器（滅菌鍋）（上海三申醫(yī)療器械有限公司）、低溫培養(yǎng)箱（三洋電機國際貿(mào)易有限公司）、HBM—400系列樣品均質(zhì)器（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）、SK-1快速混合器（金壇市科析儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 不同溫度下假單胞菌數(shù)量的測定 選取0、5、10、15和20 ℃為試驗溫度，將當(dāng)天購買的冷鮮梅條肉分別儲藏在以上5個溫度條件下，每天剪取25 g放入裝有225 mL無菌生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，以每秒7次的速度拍擊2 min；取出樣品，從無菌均質(zhì)袋中吸取1 mL懸液進行稀釋，取3個合適的稀釋梯度，每個稀釋梯度做3個重復(fù)，傾注平板計數(shù)，并記為第0天，0、5和10 ℃之后每隔24 h，15和20 ℃之后每隔12 h從同一批梅條肉中無菌操作剪取25 g進行測定。用選擇性培養(yǎng)基CFC瓊脂傾注平皿，30 ℃培養(yǎng)48 h后進行菌落計數(shù)[11，12]。

1.2.2 一級模型的擬合及其驗證

1）一級模型的擬合。應(yīng)用SAS 9.1統(tǒng)計軟件，分別將在不同溫度下獲得的腸桿菌的生長數(shù)據(jù)，用Gompertz模型擬合其生長動態(tài)[13]。Gompertz方程如下：

lgN（t）=N0+C·exp{-exp[-B（t-M）]} （1）

式（1）中，N0是初始菌數(shù)，lg（CFU/g）；C是隨時間無限增加時菌增量的對數(shù)值，lg（CFU/g）；B是在時間為M時的相對最大比生長速率，d；M是達到相對最大生長速率所需要的時間，d。再求出最大比生長速率U=B×C/e（e取2.718 2），d-1；遲滯期LPD=M-（1/B），d。

2）一級模型的驗證。通過計算準(zhǔn)確因子（Af）和偏差因子（Bf）來驗證一級模型的預(yù)測效果。準(zhǔn)確因子是用來評價預(yù)測模型的預(yù)測準(zhǔn)確度的指標(biāo)，偏差因子是用來評價預(yù)測值和實測值的差異程度的指標(biāo)。準(zhǔn)確因子的值越大表明預(yù)測效果越差，當(dāng)準(zhǔn)確因子值為1時預(yù)測效果最為理想。計算準(zhǔn)確因子Af和偏差因子Bf的公式如（2）和（3）所示[14]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度下假單胞菌生長曲線

由圖1可知儲藏的溫度越低，假單胞菌的生長速度越緩慢，隨著溫度的升高其生長速度加快。在0 ℃條件下假單胞菌生長趨勢緩慢，4 d后數(shù)量有所增加，在5 ℃時2 d后生長迅速。10、15、20 ℃ 3個溫度條件下假單胞菌急速增長，說明在10 ℃以上的溫度對假單胞菌生長的影響明顯。

2.2 假單胞菌生長動力學(xué)模型的擬合及其驗證

2.2.1 一級模型的擬合 運用SAS 9.1軟件擬合不同溫度下假單胞菌的生長曲線。由表1可以看出判定系數(shù)R2的值較高，并且隨溫度升高R2值逐漸增加，表明Gompertz模型能很好地描述不同溫度下假單胞菌的生長情況。利用Gompertz模型求得的假單胞菌生長動力學(xué)參數(shù)（表2）顯示：0 ℃條件下最大比生長速率較低，遲滯期較長，假單胞菌的生長處于抑制狀態(tài)，隨著溫度的升高，比生長速率急劇增加，遲滯期縮短，當(dāng)溫度升高到20 ℃時，遲滯期縮短至0.244 8 d。

2.2.2 一級模型的驗證 用準(zhǔn)確因子（Af）和偏差因子（Bf）來驗證模型的預(yù)測效果。通過公式（2）和（3）計算得到偏差因子和準(zhǔn)確因子的值如表3所示。從表3可以看出模型的準(zhǔn)確因子和偏差因子均為1左右，表明模型能很好地預(yù)測不同溫度下假單胞菌的生長。

2.3 二級模型的擬合

表4為模型的方差分析結(jié)果，用F統(tǒng)計量檢驗二級模型總體的顯著性。由圖2、圖3和表4可知溫度與比生長速率存在良好的線性關(guān)系。

3 結(jié)論

本試驗研究了一定溫度條件下假單胞菌的增殖變化情況，在此基礎(chǔ)上，構(gòu)建了冷鮮梅條肉中假單胞菌生長預(yù)測的一級模型和二級模型。隨著溫度升高，最大比生長速率從0.714 0 d-1上升到3.230 1 d-1，遲滯期從 2.117 5 d縮短到0.244 8 d，表明溫度是抑制微生物生長的一個重要柵欄因子。加強生鮮食品在加工、儲藏及銷售過程中的溫度監(jiān)管工作，可為生鮮食品質(zhì)量安全提供基礎(chǔ)保障。

參考文獻：

[1] SCHIRMER B C，HEIR E， LANGSRUD S.Characterization of the bacterial spoilage flora in marinated pork products[J].Journal of Applied Microbiology，2009，106（6）：2106-2116.

[2] HORVATH K，ANDRASSY E，KORBASZ M， et al.Using automatic conductimetry for monitoring spoilage bacteria on chilled pork cutlets[J].Acta Alimentaria，2007，36（2）：283-291.

[3] MCMEEKIN T A. Predictive microbiology： Quantitative science delivering quantifiable benefits to the meat industry and other food industries[J].Meat Science，2007（77）：17-27.

[4] Gill C O，GREER G G， DILTS B D. The aerobic growth of Aeromonas hydrophila and Listeria monocytogenes in broths and on pork[J].International Journal of Food Microbiology，1997，35：67-74.

[5] Gill C O，GREER G G， DILTS T， et al. Induction of a lag phase by chiller temperatures in Escherichia coli growing in broth or on pork[J].Journal of Food Microbiology，2001，2（18）：141-149.

[6] 王宏勛，陳艷麗，黃娜麗.評價蒜素影響假單胞生長的方法研究[J].食品科學(xué)，2012，33（13）：221-224.

[7] 姜英杰，鄒曉葵，吳菊清，等.假單胞菌在豬肉上生長預(yù)測模型的建立與驗證[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（8）：141-145.

[8] 林 睿，王宏勛，陳振青，等.裸裝鹵制全鴨中腸桿菌生長預(yù)測模型研究[J].食品科學(xué)，2012，33（15）：188-190.

[9] 郭全友，楊憲時.冷藏大黃魚不同細菌生長模型的比較[J].南方水產(chǎn)，2005（1）：43-49.

[10] 李苗云，朱應(yīng)舉，趙改名.微生物預(yù)測模型研究及其在肉品工業(yè)中的應(yīng)用[J].食品科技，2008（2）：57-59.

[11] GB 4789.2—2008，食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定[S].

[12] GB/T 5009.44—2003，肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法[S].

[13] ZWIETERING M H， JONGENBERGER I， ROMBOUTS F M， et al. Modeling of the bacterial growth curve[J]. Application Environment Microbiology，1990，56（6）：1875-1881.

第5篇：簡單的美麗范文

【摘要】 利用人源的白細胞彈性蛋白酶建立了一種快速、微量、靈敏的高通量體外篩選方法。利用該模型從微生物菌種庫菌株的次生代謝產(chǎn)物中篩選得到一陽性真菌F02ZA2554。該菌株發(fā)酵液經(jīng)有機溶劑提取、硅膠柱層析、及HPLC ODS反相柱層析等活性跟蹤下的分離純化，得到活性化合物F02ZA2554 A，該化合物對白細胞彈性蛋白酶有中等強度的抑制活性，其IC50為32.4μmol/L。通過對該化合物的紫外、質(zhì)譜、核磁等理化分析，確定該化合物為蒽醌類化合物中的大黃素甲醚(physcion)，該化合物的抗炎活性屬首次報道。

【關(guān)鍵詞】 人白細胞彈性蛋白酶抑制劑 大黃素甲醚 抗炎作用

Studies on the high throughput screening assay for HLE inhibitor

ABSTRACT Using LpyroglutamylLprolylLvalinepNA as the substrate， a high throughput screening assay was developed for screening HLE inhibitors with high S/N ratios (>5) and Z′factors (>0.85). In screening for HLE inhibitors from metabolites of microorganisms， a compound named F02ZA2554A was isolated from fungal broth with IC50 of 32.4μmol/L. The spectrum data (UV， IR， MS and NMR) showed that it is physcion， which is the ubiquitous component in many kinds of herbs. These results maybe revealed the mechanism of physcion on antiinflammation， which has never been reported before.

KEY WORDS Human leukocyte elastase inhibitor; Physcion; Antiinflammation

人白細胞彈性蛋白酶(human leukocyte elastase，HLE)是人體中的一種蛋白水解酶，它直接作用于肺、肝臟、腎臟等結(jié)締組織中的彈性蛋白、膠原蛋白、蛋白多糖等胞外基質(zhì)。體內(nèi)彈性蛋白酶表達過多或活性過高均可導(dǎo)致嚴重的組織損傷，并造成或加重多種如肺氣腫、慢性支氣管炎、膿血癥、腎炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和某些皮膚癥等疾病［1～4］。因此，彈性蛋白酶抑制劑已經(jīng)成為治療上述疾病藥物的重要研發(fā)方向之一。另外由于彈性蛋白酶可以破壞膠原纖維及組織基底膜層，在腫瘤的形成和腫瘤轉(zhuǎn)移方面起關(guān)鍵作用，所以彈性蛋白酶已經(jīng)成為抗癌新藥的作用靶點［5，6］。

本研究利用顯色方法建立了一種高通量的人白細胞彈性蛋白酶抑制劑體外篩選模型，經(jīng)驗證該模型快速、靈敏、穩(wěn)定。為了尋找新的HLE抑制劑，利用該模型對微生物的次生代謝產(chǎn)物進行了高通量的藥物篩選， 并從一株真菌的發(fā)酵液中分離得到活性化合物F02ZA2554 A，經(jīng)結(jié)構(gòu)確定為大黃素甲醚(physcion)，該化合物的抗炎活性此前未見報道。本文就模型的建立、陽性菌株的篩選、活性化合物的分離及生理活性進行闡述。

1 材料與方法

1.1 篩選用微生物的菌株

放線菌和真菌由本室微生物菌種庫提供，微生物的代謝產(chǎn)物經(jīng)溶媒提取作為篩選樣品。

1.2 試劑及儀器

人白細胞彈性蛋白酶(human leukocyte elastase，HLE)和多肽底物均購自Sigma公司；Victor2 1420多標(biāo)記分析儀(美國PE公司)；GenesysTM 2紅外分光光度計(美國Nicolet公司)；質(zhì)譜(AutospecUltima)；核磁共振500MHz(Inova)。

1.3 HLE活性測定原理及方法

HLE活性測定原理與方法參考文獻［7］，并稍加改動。以化學(xué)標(biāo)記的多肽nitroanilide為底物，利用水解后的產(chǎn)物nitroanilide在405nm有特定吸收，通過測定酶反應(yīng)前后光吸收A值的變化，確定HLE酶的活性。反應(yīng)式如下：

HLE

多肽Valnitroanilide多肽+nitroanilide(405nm)

篩選的操作過程為：在96孔板中加入測試樣品，加HLE酶液100μl，再加入2μl的篩選樣品，用DMSO作為空白對照。使用Victor2 1420多標(biāo)記分析儀在405nm波長處讀取每孔A值(樣品本底A)；加入底物100μl，37℃保溫反應(yīng)120min后再次讀取每孔的A值，并計算抑制率。

抑制率(%)=［A2-A1］(對照)-［A2-A1］(樣品)［A2-A1］(對照)-［A2-A1］(空白)×100%

1.4 F02ZA2554的培養(yǎng)

將菌株F02ZA2554斜面接種于種子培養(yǎng)基(淀粉2%，葡萄糖1%，黃豆餅粉0.2%，麥芽粉0.6%，酵母0.5%，CaCO3 0.2%，MgSO4·7H2O 0.1%，NaCl 0.2%，pH7.0)，27℃搖瓶培養(yǎng)3d。按1%接種的量接種發(fā)酵培養(yǎng)基(淀粉1.0%，葡萄糖2%，黃豆餅粉1.3%，酵母粉0.4%，麥芽粉0.8%，NaCl 0.05%，CaCO3 0.15%，pH7.0)27℃振搖培養(yǎng)6d。

1.5 F02ZA2554A的分離純化

F02ZA2554發(fā)酵液1000ml于3000r/min離心15min，分別收集菌體與上清，菌體用1000ml丙酮提取后，蒸去丙酮，用1000ml乙酸乙酯抽提二次，乙酸乙酯層經(jīng)無水Na2SO4脫水，濃縮抽干后得到褐色物質(zhì)2.3g。取1g樣品，用少量甲醇溶解后，使用硅膠柱(2.5cm×25cm)層析進行分離純化，洗脫系統(tǒng)為氯仿∶甲醇，收集合并活性組分，濃縮抽干后得固體62mg。將該活性組分在制備型HPLC(Waters 996 PDA)ODS反相柱(Phenomenex 20mm×250mm，10μm)進行單組分的制備(流動相為50%乙腈，流速6ml/min，檢測波長210nm)，得到橙黃色物質(zhì)F02ZA2554A 7.8mg。

2 結(jié)果與討論

2.1 篩選模型的建立

利用96孔板，在底物終濃度為10mmol/ml的條件下，加入不同稀釋濃度的HLE，測定不同HLE的酶量與A值的關(guān)系。結(jié)果表明在酶量0.5×10-4～8×10-4U/ml范圍內(nèi)與A值之間均呈很好的線形關(guān)系(圖1)。 將模型篩選時每孔的酶量確定為4×10-4U/ml。以烏司他丁注射針劑的原粉作為陽性對照測定對HLE的抑制活性，評價模型的靈敏度和穩(wěn)定性。結(jié)果表明烏司他丁在該模型上表現(xiàn)出強抑制活性，并具有較好的量效關(guān)系(圖2)，其IC50為1.1μmol/L，篩選模型的Z′因子>0.85，信噪比(S/B)>5。

2.2 F02ZA2554A對HLE的抑制活性

取濃度梯度稀釋(1001μmol/L)的F02ZA2554A對HLE進行活性測定，結(jié)果見圖3。該化合物對HLE的抑制作用呈現(xiàn)較好的濃度依賴性的關(guān)系，IC50為32.4μmol/L，具有中等的抑制活性。

2.3 F02ZA2554A的理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)由FABMS的測定顯示該化合物的分子式為C16H12O5，分子量為284。并且對F02ZA2554 A進行了核磁(CD3OD4)1HNMR和13CNMR譜的測定，數(shù)據(jù)見表1。

根據(jù)F02ZA2554 A的理化性質(zhì)、分子量、UVλmax(MeOH)以及在CD3ODd4中的1HNMR及13CNMR數(shù)據(jù)，并結(jié)合文獻檢索［8，9］，最后確定該化合物為蒽醌類的大黃素甲醚，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖4。

3 討論

據(jù)統(tǒng)計，近幾年來肺部感染的人數(shù)增長幅度較大，已成為繼心腦血管和癌癥之后的第三大致死原因，對急性肺損傷的治療，目前臨床上缺少候選藥，所以開發(fā)HLE抑制劑已經(jīng)成為治療炎癥相關(guān)疾病藥物和抗癌藥物研發(fā)熱點之一。西維來司鈉(sivelestat sodium hydrate)是日本小野公司2002年4月開發(fā)的全球首個治療伴有全身性炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)的急性肺損傷彈性蛋白酶抑制劑藥物［10］。全身性炎癥反應(yīng)綜合征大多是由嚴重感染、嚴重創(chuàng)傷及胰腺炎等誘發(fā)，能引起與重癥 表1

F02ZA2554A的碳譜和氫譜數(shù)據(jù)(DMSOd6)炎癥或局部炎癥無直接關(guān)系的肺、肝臟、腎臟等多臟器功能障礙，病情嚴重時造成死亡，其中中性粒細胞及其釋放的彈性蛋白酶起了重要作用。西維來司鈉能選擇性地抑制中性粒細胞釋放彈性蛋白酶，改善呼吸功能，縮短患者使用呼吸器的時間，降低安裝呼吸器引起的壓力性損傷及呼吸道感染癥的并發(fā)率，改善SIRS及特發(fā)性肺纖維化等引發(fā)的急性肺損傷。另外，西維來司鈉除了在肺部損傷和肺部感染上的用途外，還用于急性胰腺炎、急性腎炎的臨床治療。2002年我國暴發(fā)SARS時期，在治療重癥患者的臨床治療方案中除了抗生素和激素以外，西維來司鈉成為第一個被國家食品藥品監(jiān)督管理局(FSDA)批準(zhǔn)進入臨床試驗的抗非典藥物。

烏司他丁(ulinastain)是從健康成年男性新鮮尿液中分離純化得到的一種分子量66470.7u的糖蛋白，是一種廣譜的蛋白酶抑制劑，對粒細胞彈性蛋白酶、胰蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等多種酶有抑制作用，具有減少組織、細胞的損傷；改善循環(huán)、改善組織灌注；抗炎、抑制過度炎癥反應(yīng)，臨床用于治療急性胰腺炎、休克以及腫瘤化療中預(yù)防腎中毒及肝、腎移植手術(shù)等［11］。本研究利用烏司他丁作為陽性對照，驗證了篩選模型的穩(wěn)定性和靈敏度，具有較好的量效依賴關(guān)系，信噪比高(S/B>5)，Z′因子>0.85，提示該模型可高通量應(yīng)用于篩選［12］。

篩選中得到的活性化合物F02ZA2554A經(jīng)結(jié)構(gòu)解析確定為蒽醌類大黃素甲醚。蒽醌類化合物在植物中分布較廣，并具有多種生物活性，如中藥紫草中的紫草素類化合物具有止血、抗炎、抗菌、抗癌等作用。本研究結(jié)果表明大黃素甲醚對白細胞彈性蛋白酶具有中等的抑制活性(IC50=32.4μmol/L)。Zembower等［13］曾報道他們利用合成方法得到的新的蒽醌類化合物具有抑制HLE的活性(IC50=4～10μmol/L)，由此推測蒽醌類化合物具有的抗炎和抗癌活性的機制之一有可能與其抑制HLE相關(guān)，初步揭示了蒽醌類化合物的藥理機制。

【參考文獻】

［1］ Doring G. The role of neutrophil elastase in chronic inflammation ［J］. Am J Respir Crit Care Med，1994，150(6 Pt 2):114

［2］ Tremblay G M， Janelle M F， Bourbonnais Y， et al. Antiinflammatory activity of neutrophil elastase inhibitors ［J］. Curr Opin Invest Drugs，2003，4(5):556

［3］ Betsuyaku T， Nishimura M， Takeyabu K， et al. Decline in FEV1 in communitybased older volunteers with higher levels of neutrophil elastase in bronchoalveolar lavage fluid ［J］. Respiration，2000，67(3):261

［4］ Steinmeyer G J， Kalbhen D A. The inhibitory effects of antirheumatic drugs on the activity of human leukocyte elastase and cathepsin G ［J］. Inflamm Res，1996，45(7):324

［5］ Sun Z， Yang P. Role of imbalance between neutrophil elastase and alpha 1antitrypsin in cancer development and progression ［J］. Lancet Oncol，2004，5(3):182

［6］ Dona M， Dell′Aica I， Pezzato E， et al. Hyperforin inhibits cancer invasion and metastasis ［J］. Cancer Res，2004，64(17):6225

［7］ Tanaka H， Shimazu T， Sugimoto H， et al. A sensitive and specific assay for granulocyte elastase in inflammatory tissuefluid using LpyroglutamylLprolyl LvalinepNA ［J］. Clin Chim Acta，1990，187(2):173

［8］ 姚新生. 天然藥物化學(xué)［M］. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1997

［9］ 于德泉，楊峻山. 分析化學(xué)手冊第七分冊(核磁共振波譜分析)［M］. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1999

［10］ Naoko O， Yasuyuki K， Takeshi O， et al. Effects of a specific neutrophilelastase inhibitor (sivelestat sodium hydrate) in acute lung injury ［J］. Anesthesiology，2003，99(2):371

［11］ Okuhama Y， Shiraishi M， Higa T， et al. Protective effect of ulinastain against ischemia reperfusion injure ［J］. J Surg Res，1999，82(1):34

第6篇：簡單的美麗范文

然而，這簡單的美卻常被人們忽略了?；蛟S是生活給予的美過多，使人麻木；或許是人們不厭其煩地追求轟轟烈烈的事業(yè)，而忽視路旁悠然開放的野花；或許是人們不斷制造自擾的煩躁和愁緒，而忘記側(cè)耳傾聽身邊微妙的歌聲。那些簡單的美麗，被洞房花燭的歡愉遮蔽了，被久旱甘霖的恩澤湮沒了，可嘆一個個庸人，流連在花團錦簇之中，誤以為自己占有了美麗而沾沾自喜。

殊不知“清水出芙蓉,天然去雕飾”，簡單是一種至高無上的境界。要達到這種境界，需要“梧桐更兼細雨”的細膩，需要“虛懷若谷”、“物我兩忘”的博大，需要“山高月小”、“風(fēng)清云淡”的超脫。暫時放下肩上沉重的擔(dān)子，緩下一刻不曾放慢的腳步，讓心靈重歸自然回復(fù)平和，認真咀嚼生活的每一片葉子，那樸素的葉脈自然會伸展到心靈深處，告訴你簡單就是美的意蘊。

正因為如此，簡單可以成為真誠的老師。不管人類的情感多么復(fù)雜——愛恨情仇、苦澀酸甜，一旦簡單便生真誠，一旦真誠必定簡單。要知道，最簡單的往往來自于心靈的最深處，它真切而不單薄，深沉而不復(fù)雜，在無言之處，于無聲之間，滌蕩虛假的念頭，造就真誠的人生。

那么，為何不留意眼前的簡簡單單的點點滴滴呢？

——在黎明，為一朵牽牛花的初綻而祝福；在深夜，為一顆流星的飛逝而禱告。

第7篇：簡單的美麗范文

因為簡單，我們才能更親近自然、掌握真理。

快樂很簡單，只要我們無求。幸福很簡單，只要我們知足。世界上越是復(fù)雜的問題就越有一個簡單的解，越是大的道理就越簡單、樸素。

記得英國有家報紙舉辦一個有獎?wù)鞔鸹顒?，題目是：一個充氣不足的熱氣球即將墜毀，上面所載的三個科學(xué)家必須扔下一個，要扔哪個？這三個科學(xué)家，一個是環(huán)保專家，他的研究可拯救無數(shù)因環(huán)境污染而陷于絕境的人們；一位是原子專家，他有能力防止全球性的原子戰(zhàn)爭，使地球免遭毀滅；另一位是糧食專家，他能夠使不毛之地生長谷物，讓數(shù)以億計的人們脫離饑餓。許多人費盡心機難以選擇，而最后獲獎的卻是一個小男孩，而他的答案最簡單：把最重的那個扔下去。

這個答案似乎出乎大多數(shù)人的意料，然而這個答案就是這么簡單。世界上的好多事情本來就是簡單的，是我們自己把它弄復(fù)雜了。

其實任何事情都很簡單。成佛，很簡單：心寬。上天堂很簡單：善良。佛教很簡單：性空。儒教很簡單：仁?；浇毯芎唵危簮?。這世上，還有什么事情，不簡單呢？

人生很簡單：順其自然。人生的最高境界便是擁有一顆自然之心，永葆初心，這才是人生的智者。

科學(xué)很簡單：幾個公式便可以解決一大堆問題。看似復(fù)雜的現(xiàn)象，往往由幾個看似平凡無奇的公式便能引出無數(shù)奇妙的“大道”。

自然很簡單：水澤被萬物而甘居最下，陽光照耀萬物而不分貴賤。

簡單的人正直真誠；簡單的世界自然和諧；簡單是美好的，是最具智慧的。

簡單，近乎無求。無求才有所得。一心想著成功，必定失?。灰恍淖冯S欲望，必定會成為欲望的奴隸。

簡單，是回歸自然，是回歸最純樸的生活，最簡單的心境。簡單是經(jīng)歷過繁復(fù)之后的超然與豁達。

簡單，是一種美，是一種無為而又有為的美，是一種形而上的美。

【點評】

升格之后，我們讀一下文章，就可以感覺到氣勢明顯增強，各種排比句明顯增多，整句、散句有機結(jié)合、錯落有致，文氣連貫而豐足，具有較強的說服力和感染力。作者從材料的主旨切入，把對生命與生活的思考化為筆端的清泉，汩汩流淌于字里行間。開頭引用老子名言，點明題旨“越是簡單就越美麗”，接著多角度、多側(cè)面、多層次地闡述簡單的各種表現(xiàn)形式以及簡單的深刻內(nèi)涵，作者對“簡單”的感受既是生活的，又是文化的，也是哲理的。

第8篇：簡單的美麗范文

一個作業(yè)繁多的周末，推開手頭的一堆作業(yè)，賴在床上不肯起來，盡情享受被臥中軟綿綿的溫暖，暫時忘記作業(yè)的困擾，這就是我的快樂。

一個無所事事的一天，什么事都不做，就站在陽臺上傻傻地看著天空，什么都不想，腦子里空空的，慢慢打發(fā)著時間，這也是我的快樂。

一個透明的大金魚缸，幾條快樂的小金魚在水中游來游去，我出神地看著它們，目光隨著它們而移動。看著看著，我又感覺到了快樂。

一支色彩鮮艷的水彩筆，一張白紙，抓起筆在紙上亂寫亂畫，呵呵，一幅涂鴉作品就出現(xiàn)了。你一定想得到――這也是我的快樂！

第9篇：簡單的美麗范文

生活可以簡單的像一杯水，不需再要些什么，只是這樣簡單的，清澈著人們的心。生活，無非是“舒服不過躺著，好吃不過餃子”。而中國人如今追求的不就是簡簡單單么？不過只是平凡的生活么？

你不必去把生活想得太復(fù)雜，只要簡簡單單的想著這生活是美好的，年輕人，每天工作而已罷了。老年人，每天不過享受著兒女們帶來的晚年之樂罷了。小孩子，不過是簡簡單單的上學(xué)罷了。不要去追求太多，不要去讓自己有做不完的事情，務(wù)必記住，生活只要簡簡單單，便是美好的。

也許在以后的某一天中，你會突然覺得這生活索然無味，不要氣餒，不要傷心。鼓起勇氣向前走去，前方還有美麗的風(fēng)景，還有給我們帶來賞心悅目的風(fēng)景，還有那孤單旅途之后的繁榮與美麗。所以，請高高的昂起頭，向前走去，前方還有美麗的風(fēng)景。

生活簡單的不過是你可以看清它的底，即使接下來你不知道要做什么，走哪條路，請你去思考，用自己的腦子好好的想想到底該是怎樣的。不過是這樣簡單，僅此而已。

生命總有一天會終結(jié)，那一天你會留戀許多事情。所以，在生前把要做的事情做好，到最后，你便可以問心無愧的說“我已經(jīng)盡我所能了”

人生路漫漫，卻有幾時能有幾個真正的朋友，到最后看清你的缺點，還一樣能夠抓緊你的手，在你最為難的時候?qū)δ阏f“還有我們”呢？

人生的路或許還有很長，或許還只有那么僅僅的一瞬間，我們誰都無法預(yù)測下一秒鐘要發(fā)生什么，所以只能在有可能是生命中的最后一秒鐘，做好自己想做的事情，然后抓住朋友的手，對他們說，來生我們還是朋友。