急性白血病細胞流式細胞術檢測情況分析
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摘要：評估流式細胞術(FCM)檢測外周血白血病細胞在急性白血病患者的應用價值。方法：2017年1-12月收治急性白血病患者130例，其中急性髓系白血病80例，急性淋巴白血病50例。采集所有患者血液樣本，通過FCM檢測外周血白血病細胞。分析檢驗結(jié)果，評估預后。結(jié)果：FCM檢測急性髓系白血病的敏感性、陰性預測值顯著高于急性淋巴白血病，特異性低于急性淋巴白血病，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。MRD陽性患者復發(fā)率高于陰性患者，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論：急性白血病患者外周血白血病細胞臨床檢測中，流式細胞術具有較高敏感性與特異性，可作為評估患者預后的參考指標。
關鍵詞：急性白血??；外周血白血病細胞；流式細胞術；預后
急性白血病的發(fā)生與環(huán)境污染、遺傳、生活方式等各種因素有關[1]，是一種臨床發(fā)病率較高的非實體腫瘤，嚴重影響患者生活質(zhì)量，同時也給家庭造成沉重經(jīng)濟負擔。隨著近年來臨床對白血病研究的深入，越來越多先進治療方案得以落實，如果白血病患者能夠在發(fā)病早期得到有效治療，仍有相當高緩解率，但同時也伴有較大復發(fā)風險。資料表明[2]，急性白血病患者主要復發(fā)原因是體內(nèi)腫瘤細胞沒有被完全清除，機體內(nèi)仍存在微小殘留病變(MRD)，如果殘留的腫瘤細胞持續(xù)增殖，就會導致疾病復發(fā)。白血病細胞表型與異常光散射的特點非常突出[3]，屬于表面抗原，因此臨床主張采用FCM識別不同抗原的熒光信號，以提高臨床診斷準確率。本研究采集急性白血病患者外周血樣本130例，應用FCM技術檢測白血病細胞，現(xiàn)報告如下。
資料與方法
2017年1-12月收治急性白血病患者130例，男73例，女57例；年齡21～67歲，平均(37.69±2.46)歲；病理分型：急性髓系白血病80例，急性淋巴白血病50例。所有患者均符合《血液病診斷及療效標準》中相關診斷標準[4]，所有患者及家屬均簽署知情同意書。排除依從性差、無法完成隨訪、急性早幼粒細胞白血病、精神疾病。方法：采集患者空腹狀態(tài)下的外周靜脈血3mL，乙二胺四乙酸二鉀抗凝處理后，將1×106的有核細胞加入試管中，選擇與患者病情特點相符的熒光素標記的單克隆抗體，按照說明書進行規(guī)范操作。應用FACSCalibur流式細胞儀收集具有分析價值的有核細胞10萬個以上，并用配套軟件分析。MRD的判定參考原始細胞抗原有無跨系表達、表達是否同步、表達是否丟失、表達的強弱等因素，MRD陽性的判定標準為≥0.01%，否則可判定為陰性。對130例患者骨髓細胞進行6～8張骨髓液涂片，經(jīng)吉姆薩-瑞士染色處理后，在顯微鏡油鏡下對200個細胞進行分類，對參考細胞形態(tài)進行分類計數(shù)，將《血液病診斷及療效標準》作為是否復發(fā)的判斷依據(jù)。觀察指標[5]：比較FCM檢測急性髓系白血病與急性淋巴白血病的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值。統(tǒng)計隨訪12～18個月MRD陽性和陰性患者復發(fā)情況。WHO明確提出，將骨髓細胞形態(tài)學的檢測結(jié)果作為臨床診斷的金標準，增生Ⅰ～Ⅱ級；原始細胞增多≥20%。統(tǒng)計學處理：數(shù)據(jù)應用SPSS19.0軟件處理；計數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
結(jié)果
FCM檢測急性白血病的敏感性、特異性比較：FCM檢測對急性髓系白血病的敏感性和陰性預測值顯著高于急性淋巴白血病，特異性低于急性淋巴白血病，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。兩種病理分型陽性預測值比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表1。MRD與復發(fā)之間關系：MRD陽性104例，復發(fā)77例，復發(fā)率為74.04%；MRD陰性26例，復發(fā)6例，復發(fā)率為23.08%。MRD陽性患者復發(fā)率高于陰性患者，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
討論
急性白血病除發(fā)病率較高之外，治療后還存在相當大復發(fā)風險。急性白血病發(fā)生機制為造血干細胞出現(xiàn)異常增殖，長時間在骨髓中大量累積，最終阻斷骨髓造血功能。白血病細胞主要是以單細胞形式存在，屬于天然單細胞懸液，F(xiàn)CM技術針對的正是單個散在細胞，因此可用于白血病細胞檢測。FCM通過熒光對單克隆抗體進行標記，分析細胞表面或內(nèi)部成分，還可以通過核酸染料對細胞內(nèi)部RNA、DNA進行檢測，從而分析細胞pH值、鈣離子濃度及細胞的攝取、吞噬功能，還能夠檢測細胞培養(yǎng)液及血清中可溶性成分。骨髓形態(tài)學檢查是評估急性白血病患者臨床療效重要依據(jù)，但該檢測結(jié)果具有局限性，如果只能體現(xiàn)一部分骨髓情況，那么只有在患者機體內(nèi)白血病細胞的比例＞1%的情況下才能檢測出來，患者也很難耐受反復的穿刺。因此FCM成為檢測MRD的主要方法。研究發(fā)現(xiàn)[6]，一部分急性白血病患者在經(jīng)過放療治療后，盡管能夠殺死白血病細胞，但無法達到根治效果，仍有患者因存在MRD陽性而復發(fā)，因此，完全緩解的時期與程度是影響患者預后的重要參考指標。本研究中，F(xiàn)CM對急性髓系白血病的敏感性達到97.38%，對急性淋巴白血病的特異性為45.83%。提示FCM檢測結(jié)果可作為急性白血病患者預后評估的指標水平。同時，MRD陽性患者復發(fā)率要顯著高于陰性患者，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。臨床應參考多方面檢測指標和結(jié)果，對患者采取個性化的治療措施。
參考文獻
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作者：胡紅波 彭敏源 劉蘇 單位：415000湖南省常德市第一人民醫(yī)院檢驗科