煙草黑脛病診斷值得商榷問題分析
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摘要：隨著煙葉生產(chǎn)中感病特色品種的持續(xù)種植，原有抗病品種抗性喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，煙草黑脛病在局部地區(qū)嚴(yán)重發(fā)生，但其田間診斷技術(shù)難以適應(yīng)防控需求。本文辨析了煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的區(qū)別，提出了還苗期至伸根期黑脛病與青枯病的診斷和處置方法，分析了整株系統(tǒng)性葉片局部枯斑枯焦的病因以及“黑桿”病癥剖析等實例，提出田間癥狀識別等傳統(tǒng)診斷技術(shù)與免疫學(xué)診斷技術(shù)、分子生物學(xué)診斷技術(shù)等專項檢測相結(jié)合，比對與排除獲得診斷結(jié)論是煙草黑脛病診斷的關(guān)鍵技術(shù)與方法。
關(guān)鍵詞：煙草黑脛??；根黑腐?。磺嗫莶。辉\斷
煙草黑脛?。╰obaccoblackshank）是由煙草疫霉（Phytophthoranicotianae）引起的，主要侵染煙草的根和莖基部，也可侵染葉片和幼苗，是煙草病害中僅次于病毒病的第二大類病害。煙草感染黑脛病后，往往會整株凋萎、死亡，對煙葉生產(chǎn)極具毀滅性。盡管一些中抗品種的大面積推廣對抑制黑脛病發(fā)揮了重要作用，但部分煙草種植區(qū)持續(xù)種植感病的特色品種，原有抗病品種抗性逐漸喪失，加之煙苗移栽苗齡小、抗病性弱，導(dǎo)致黑脛病在局部暴發(fā)為害，對煙草生產(chǎn)造成嚴(yán)重威脅。病害的準(zhǔn)確診斷是實施有效防控的先決條件，為此，筆者結(jié)合多年田間實踐經(jīng)歷和病害診斷經(jīng)驗，針對煙草黑脛病診斷中值得商榷的幾個問題提出思考與建議。
1煙草黑脛病重發(fā)的原因
1）感病特色品種的持續(xù)種植。近年來，煙草品種特色化要求維持、加大一些地方特色品種的種植，而部分地方特色品種如云南的紅花大金元、福建的翠碧一號均為感黑脛病的品種。特色感病品種的大面積種植，累積加大了土壤煙草疫霉病原的基數(shù)，煙草黑脛病發(fā)病早、蔓延快、持續(xù)時間長、為害嚴(yán)重、覆蓋范圍廣。2）原有抗病品種抗性喪失。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)栽培技術(shù)的發(fā)展，一些經(jīng)濟(jì)作物如花卉、蔬菜、水果的種植面積逐年增加，煙草作為比較經(jīng)濟(jì)效益低下的作物漸漸向丘陵與山區(qū)集中，有限的耕地制約了煙草的輪作與休耕，連作導(dǎo)致了廣泛種植的中抗品種（如云煙87）慢慢變?yōu)槟筒?、感病?）煙苗移栽的苗齡小，抗病性弱。應(yīng)用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗等技術(shù)，35～45d苗齡的移栽煙苗在膜下生長。由于膜下土壤溫度提高，田間小環(huán)境濕度增大，導(dǎo)致煙株發(fā)病提前、發(fā)病快。4）田間病害診斷困難，延誤防治時期。煙草病害癥狀具有復(fù)雜性，一方面同一種病害表現(xiàn)出多種癥狀，如煙草黑脛病可以表現(xiàn)為根莖部黑脛、地上部莖葉“穿大褂”“腰爛”，葉部“黑膏藥”；另一方面多病原可以引起相同癥狀，如煙草莖“黑桿”癥狀。此外，煙草黑脛病典型癥狀出現(xiàn)存在明顯的滯后性，典型癥狀出現(xiàn)時已經(jīng)進(jìn)入病害的晚期，只能采取拔除煙株、藥劑消毒病灶、改種其他可以防病的作物等措施，以阻止病害的蔓延，但對煙草造成的損失已無可挽回。
2煙草黑脛病診斷中的問題及其解決辦法
2.1明確區(qū)分煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病
煙草“兩黑病”是煙草黑脛病、根黑腐?。═obaccoblackrootrot）的一種籠統(tǒng)說法，有時候還把青枯病引起的莖稈變黑混到了一起，這是對病害診斷和防治很不確切的提法。煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病的病原有很大的區(qū)別。煙草黑脛病是煙草疫霉引起的，屬于卵菌病害；根黑腐病是由基生根串珠霉（Thielavioisbasicola）引起的，屬于真菌病害；而青枯病則是由青枯雷爾氏菌（Ralstoniasolanacea-rum）引起的，屬于細(xì)菌病害。筆者在多年的云南煙區(qū)田間病害調(diào)查中，極少發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病，這點也被2010—2014年開展的全國煙草有害生物調(diào)查證實，即使在種植感病品種紅花大金元的區(qū)域進(jìn)行的聯(lián)合調(diào)查也極難發(fā)現(xiàn)煙草根黑腐病。也就是說，煙草根黑腐病是偶發(fā)的次要病害，在田間零星發(fā)生，偶爾有成行的幾株呈現(xiàn)出發(fā)病中心的態(tài)勢，其為害可以忽略不計。煙草黑脛病則不同，在田間常年維持在1%左右的發(fā)病率，大面積踏查時，黑脛病引起的凋萎癥狀很易發(fā)現(xiàn)?？偟膩碚f，通常所說的“兩黑病”至少90%以上的概率是發(fā)生了黑脛病。此外，要將近年來越來越嚴(yán)重的青枯病導(dǎo)致的莖稈發(fā)黑的現(xiàn)象，和黑脛病進(jìn)行區(qū)分。以上3種病害，在實驗室可用特異性引物進(jìn)行單個或多重PCR擴(kuò)增檢測進(jìn)行區(qū)分，在田間調(diào)查中，可以根據(jù)侵染時期、為害特點和病征進(jìn)行區(qū)分。①侵染時期。煙草黑脛病在煙草整個生育期均可發(fā)生，在團(tuán)棵期和旺長期有兩個明顯的發(fā)病高峰期。通常發(fā)生面廣，隨著時間推移，病害擴(kuò)散較快，能形成明顯的發(fā)病中心。煙草根黑腐病主要在苗床期、大田前期發(fā)生，多為局部或零星發(fā)病。煙草青枯病在整個大田期均可發(fā)生，病菌侵染集中在伸根期、中耕培土?xí)r，病害發(fā)展相對緩慢，發(fā)病高峰期表現(xiàn)在旺長期、成熟期和采烤后，病害在田間呈條帶或條塊狀分布，且發(fā)生更為普遍、嚴(yán)重。②為害特點。煙草黑脛病主要通過根莖部侵染，病狀主要表現(xiàn)為根莖部變黑，縱向剖開后可見莖髓部褐色碟片；在苗期或漂浮盤上的幼苗受黑脛病侵染會在3～5d的短期引起“猝倒”死亡的嚴(yán)重癥狀，而煙苗移栽大田成活后，若根部受到侵染，遇到連續(xù)干旱病害發(fā)展比較緩慢，至少在20d后才可能在地上部表現(xiàn)凋萎、葉枯等明顯的癥狀，遇到雨季，約7d就可在地上部表現(xiàn)明顯的癥狀。煙草根黑腐病主要侵染根部，病狀表現(xiàn)為根腐爛變褐、變黑，有時會蔓延至根莖部，縱向剖開無褐色碟片，一般發(fā)病煙株矮化、輕度萎蔫，不會死亡。煙草青枯病主要通過根侵染，特別是新生側(cè)根、須根、不定根更容易受到侵染，病狀首先表現(xiàn)在根上，當(dāng)根部受到侵染后，地上部分幾片葉萎蔫下垂，但葉片不變色，橫切病葉主脈，可發(fā)現(xiàn)呈黃褐色至黑褐色的環(huán)狀維管束，挖出完整的根系，把泥土沖洗干凈，可發(fā)現(xiàn)少數(shù)根病變?yōu)楹稚?、黑色；中后期莖上病斑沿莖的一側(cè)向上擴(kuò)展，在莖上形成條斑，病斑一側(cè)的葉片萎蔫，半邊枯萎，俗稱“半邊瘋”，縱剖病莖，髓部不變色、外圍呈蜂窩狀軟腐。發(fā)生根黑腐病、青枯病的煙株根部必然腐爛病變，發(fā)生根黑腐病的煙株整株根系少、在莖基部的四周產(chǎn)生數(shù)量較多的不定根，發(fā)生青枯病的煙株根系較完整、在根發(fā)病的一側(cè)產(chǎn)生較多的不定根，但發(fā)生黑脛病的根不一定腐爛。③病征。取新鮮的病組織進(jìn)行保濕培養(yǎng)，產(chǎn)生白色稀疏菌絲的為煙草疫霉，產(chǎn)生灰色或淺黑色菌絲的為基生根串珠霉，產(chǎn)生黃白色菌膿的為青枯雷爾氏菌。
2.2還苗期至伸根期黑脛病、青枯病的診斷和處置方法
不同的病原均會造成煙草幼苗根莖腐爛、整株死亡，而煙農(nóng)對于膜下小苗的感病癥狀普遍存在認(rèn)識誤區(qū)和診斷困難，建議從以下幾方面進(jìn)行排查和辨析。采用膜下小苗或膜下“井窖式”小苗移栽技術(shù)，發(fā)生病害的死苗率往往大于常規(guī)移栽的死苗率。在還苗期至伸根期，幼苗與土壤表層接觸的莖基部出現(xiàn)暗褐色至黑色病斑，病斑再擴(kuò)展環(huán)繞幼莖或底葉受到侵染沿葉柄擴(kuò)展到莖上，引起“猝倒”癥狀，黑脛病、青枯病侵染的概率比較大。由于癥狀不典型，采用傳統(tǒng)病害診斷難下結(jié)論，而移栽季節(jié)的限制又必需及時作出診斷結(jié)論，建議使用疫霉鞭毛、青枯菌一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒，在田間地頭或檢查現(xiàn)場直接確診，以便采取相應(yīng)的預(yù)防補救措施。如果發(fā)病率不超過10%，不論是煙草黑脛病、還是青枯病，均需要在病株周圍土壤撒生石灰拌土，然后進(jìn)行補栽，在補栽當(dāng)日、補栽后10d、20d進(jìn)行化學(xué)防治；如果發(fā)病率超過10%，感染黑脛病的建議換栽抗性更強的品種，感染青枯病的建議改種其他作物，水旱輪作或與禾本科作物實行3年輪作后才可再次種植煙草。
2.3注意區(qū)分持續(xù)干旱與黑脛病造成的整株系統(tǒng)性凋萎
在云南煙區(qū)，煙草團(tuán)棵期往往遇上連續(xù)的干旱時期，導(dǎo)致煙株葉片系統(tǒng)性萎焉，形成日灼斑，即局部枯斑、枯焦；而煙草前期感染黑脛病后，也會整株系統(tǒng)性地表現(xiàn)葉片凋萎，形成局部枯斑、枯焦癥狀。這通常會引起煙農(nóng)的恐慌。持續(xù)干旱與黑脛病引起的系統(tǒng)性凋萎，可采用侵染性病害與非侵染性病害傳統(tǒng)診斷方法或補水治療診斷進(jìn)行區(qū)分。如果該癥狀在田間大面積同時發(fā)生、分布較均勻，且多在頂部心葉的外圍葉片和中、上部葉片的葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是干旱造成的；在田間有明顯的發(fā)病中心、零散不均勻分布，中下部葉葉尖葉邊部分出現(xiàn)癥狀的，則是黑脛病。連續(xù)補水3～5d，萎蔫癥狀消失的，則是干旱造成的，萎蔫癥狀持續(xù)加重的，則是黑脛病。診斷為黑脛病的，在雨季來臨前，進(jìn)行化學(xué)藥劑防治，可以阻止病害的進(jìn)一步發(fā)展。診斷為干旱病因的，能灌溉的要及時補水，無灌溉條件的就等待雨季的來臨。
2.4切勿將“黑桿”癥狀稱為“黑桿病”
“黑桿病”是煙草感病后出現(xiàn)莖稈變黑癥狀的一個通俗說法，但從技術(shù)角度分析則大為不妥，有失嚴(yán)謹(jǐn)。引起煙草黑桿癥狀的病害種類較多，煙草黑脛病、青枯病、空莖?。═obaccohollowstalk）、馬鈴薯Y病毒病（PotatovirusY）、斑萎?。═obaccospottedwilt）等均會導(dǎo)致煙莖變黑。如果是煙株葉片采烤完畢、僅剩煙稈，憑莖變黑的癥狀難以進(jìn)行病害診斷，此時應(yīng)當(dāng)通過現(xiàn)場踏查，進(jìn)行癥狀識別。一般來說，田間零星發(fā)生的，縱剖病莖，髓部空心的是煙草空莖?。惶镩g病害沿行向發(fā)展的，莖上病斑形成黑色條斑，縱剖病莖，髓部呈蜂窩狀軟腐、無碟片、可擠出菌膿，橫切病莖病側(cè)維管束呈黃褐色或黑褐色的是煙草青枯??；田間病害以同心圓發(fā)展的、莖上有圓形病斑的是煙草斑萎??；莖上有凹陷黑色塊狀病斑的是煙草馬鈴薯Y病毒病。此外，若病莖腐爛程度較重，可輔以一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，或在實驗室進(jìn)行病原特異性PCR擴(kuò)增檢測。綜上所述，基層技術(shù)人員和煙農(nóng)在診斷煙草黑脛病時，應(yīng)注意與其他癥狀易混淆的侵染性病害或非侵染性病害進(jìn)行區(qū)別，養(yǎng)成在病害侵染前期系統(tǒng)觀察病癥的習(xí)慣，慎用“兩黑病”、“黑桿病”等模棱兩可的非專業(yè)術(shù)語。對于黑脛病及其近似病害的準(zhǔn)確診斷，仍有賴于DNA分子檢測或快速檢測試劑盒，但是，生產(chǎn)一線缺乏實驗室設(shè)備，而一步法免疫膠體金快速診斷試劑盒目前主要靠進(jìn)口，其使用成本較高，大面積推廣應(yīng)用還不現(xiàn)實。建議進(jìn)一步研發(fā)廉價實用的國產(chǎn)化快速檢測試劑盒，或者是基于感病組織膜電位變化特征的田間植物病害診斷儀、便攜式DNA提取與PCR擴(kuò)增檢測一體儀，也可以應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)遠(yuǎn)程診斷等方式，幫助田間快速診斷。
作者：方敦煌 童治軍 肖炳光 單位：云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院
