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【關(guān)鍵詞】 螺旋蝸軸動(dòng)脈;交感神經(jīng);酪氨酸單氧化酶;免疫組織化學(xué);豚鼠
【Abstract】 AIM: To investigate the detailed innervation patterns of the sympathetic nerve to the cochlear blood vessels and related neurotransmitters in the guinea pig. METHODS: The spiral modiolar artery(SMA) in guinea pig cochlea was exposed by microsurgery, then the fluorogold(FG) or horseradish peroxidase(HRP) was given around the SMA for retrograde tracing. The bilateral superior cervical ganglia(SCG) and stellate ganglia(STG) were observed to find retrogradely labeled neurons. The neurotransmitters of these sympathetic fibers around SMA were ascertained by using retrograde tracing combined with immunohistochemical doublelabeled technique. RESULTS: Retrogradely labeled neurons with FG or HRP were found in the rostral half of the ipsilateral SCG. No labeled neurons were observed in the contralateral SCG and the bilateral STG. Most of HRPlabeled neurons in SCG were THIR positive and NPYIR positive, while none of them were CGRPor SPpositiue. CONCLUSION: The THIR positive and NPYIR positive neurons in SCG send projections to the ipsilateral cochlear blood vessels. The norepinephrine and NPY may be used by sympathetic nerve to regulate cochlear blood flow.
【Keywords】 spiral modiolar artery; sympathetic nerve; tyrosine 3monoorygenase; immunohistochemistry; guinea pigs
【摘要】 目的: 研究豚鼠耳蝸螺旋蝸軸動(dòng)脈接受交感神經(jīng)支配的具體來(lái)源情況及與該交感神經(jīng)纖維調(diào)節(jié)功能相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì). 方法: 在正常豚鼠單側(cè)耳蝸螺旋蝸軸動(dòng)脈局部滴加逆行追蹤劑辣根過(guò)氧化物酶(HRP)或熒光金(FG),觀(guān)察雙側(cè)交感頸上神經(jīng)節(jié)、星狀神經(jīng)節(jié)內(nèi)HRP或FG逆標(biāo)神經(jīng)元的分布;采用逆標(biāo)與免疫組化相結(jié)合的雙重標(biāo)記方法觀(guān)察追蹤陽(yáng)性神經(jīng)元是否表達(dá)酪氨酸羥化酶(TH)、神經(jīng)肽Y(NPY)、鈣基因相關(guān)肽(CGRP)或P物質(zhì)(SP). 結(jié)果: 同側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)可見(jiàn)逆行追蹤陽(yáng)性神經(jīng)元胞體,對(duì)側(cè)頸上及雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)內(nèi)卻未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞;陽(yáng)性神經(jīng)元多同時(shí)呈TH, NPY陽(yáng)性,但未見(jiàn)CGRP或SP雙標(biāo)的陽(yáng)性神經(jīng)元. 結(jié)論: 豚鼠頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)存在TH及NPY陽(yáng)性神經(jīng)元支配同側(cè)耳蝸血管,去甲腎上腺素和神經(jīng)肽Y可能是交感神經(jīng)節(jié)后纖維調(diào)節(jié)耳蝸血流的遞質(zhì)或調(diào)質(zhì).
【關(guān)鍵詞】 螺旋蝸軸動(dòng)脈;交感神經(jīng);酪氨酸單氧化酶;免疫組織化學(xué);豚鼠
0引言
耳蝸正常的血液供應(yīng)對(duì)維持其生理功能及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要意義,已證實(shí)耳蝸微血管存在復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制,交感神經(jīng)系統(tǒng)、體循環(huán)血壓、局部代謝產(chǎn)物、藥物及血管活性肽等都會(huì)影響耳蝸血流. 現(xiàn)有研究觀(guān)察到哺乳動(dòng)物耳蝸接受豐富的交感神經(jīng)支配[1],且這些交感神經(jīng)纖維大多是去甲腎上腺素能的. Wangemann等[2]在體外實(shí)驗(yàn)觀(guān)察到耳蝸的主要供血?jiǎng)用}如: 基底動(dòng)脈、小腦前下動(dòng)脈及螺旋蝸軸動(dòng)脈的收縮都受到交感神經(jīng)的調(diào)節(jié). 邱建華等[3]觀(guān)察到豚鼠螺旋蝸軸動(dòng)脈及其放射狀動(dòng)脈周?chē)胁煌潭鹊睦野彼崃u化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)纖維的分布. 本研究旨在明確豚鼠耳蝸螺旋蝸軸動(dòng)脈接受交感神經(jīng)節(jié)后纖維支配的具體來(lái)源情況以及與該交感神經(jīng)纖維調(diào)節(jié)功能相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì),為進(jìn)一步研究交感神經(jīng)對(duì)耳蝸血流的調(diào)節(jié)作用奠定基礎(chǔ).
1材料和方法
1.1材料選用健康、耳廓反射靈敏的白色豚鼠12只,由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,體質(zhì)量(280±50) g,雌雄不拘,自由攝取食水. 將豚鼠隨機(jī)分為3組: 辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)追蹤組;熒光金(fluorogold, FG)追蹤組和對(duì)照組. 追蹤用HRP及顯色劑四甲基聯(lián)苯胺(tetramethylbenzidine, TMB)購(gòu)自德國(guó)Roche公司;免疫組織化學(xué)ABC試劑盒、兔抗神經(jīng)肽Y(NPY)及P物質(zhì)(SP)抗體(1∶100)購(gòu)自武漢博士德生物制品有限公司;FG及兔抗TH,鈣基因相關(guān)肽(CGRP)抗體(1∶5000)均購(gòu)于美國(guó)Sigma公司.
1.2方法
1.2.1動(dòng)物模型制作采用20 g/L戊巴比妥鈉(40 mg/kg)肌肉注射麻醉,所有動(dòng)物術(shù)前測(cè)試聽(tīng)覺(jué)腦干反應(yīng)(auditory brainstem response, ABR)均為正常,均選擇右耳手術(shù). 手術(shù)采取右頸側(cè)進(jìn)路,切斷莖突及其附著肌腱后打開(kāi)聽(tīng)泡,暴露耳蝸并拭去底轉(zhuǎn)外側(cè)壁表面黏膜,微型鉆于耳蝸底轉(zhuǎn)行骨壁開(kāi)窗,直徑約1.5 mm,吸除外淋巴液,高倍顯微鏡下去除部分基底膜及骨性螺旋板,仔細(xì)暴露螺旋蝸軸動(dòng)脈(spiral modiolar artery, SMA),將浸有1 μL追蹤劑(300 g/L HRP或30 g/L FG溶于生理鹽水)的明膠海綿微球置于SMA表面,術(shù)中避免追蹤劑流入中耳腔,骨水泥封閉耳蝸骨窗及聽(tīng)泡開(kāi)口,縫合關(guān)閉傷口,應(yīng)用磺胺嘧啶鈉預(yù)防感染. 對(duì)照組使用生理鹽水代替300 g/L HRP溶液.
1.2.2取材、切片HRP追蹤組豚鼠術(shù)后存活48 h,F(xiàn)G追蹤組豚鼠術(shù)后存活7 d. 采用20 g/L戊巴比妥鈉(50 mg/kg)腹腔注射麻醉后,開(kāi)胸經(jīng)心臟升主動(dòng)脈插管灌注生理鹽水200 mL沖出血液,繼之用低溫(4℃)含40 g/L多聚甲醛的0.1 mol/L磷酸緩沖液(pH 7.4)600 mL,緩慢灌注固定2 h. 迅速分離暴露頸交感鏈,取下雙側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)及星狀神經(jīng)節(jié),標(biāo)本用新鮮40 g/L多聚甲醛緩沖液后固定6~8 h,經(jīng)0.01 mol/L PBS漂洗后置入300 g/L蔗糖磷酸緩沖液(pH 7.4,4℃)至沉底. OCT膠包埋后用恒冷箱切片(CM1900, Leica, Heidelberger, Nussloch, Germany),片厚16 μm. FG追蹤組標(biāo)本切片后即可在Olympus熒光顯微鏡下觀(guān)察并照相,激發(fā)光波長(zhǎng)為323 nm.
1.2.3免疫組化實(shí)驗(yàn)HRP追蹤的切片分為5組,采用鎢酸鈉加強(qiáng)的TMB法行HRP顯色反應(yīng),觀(guān)察顯色結(jié)果并照相. 其中4組切片繼續(xù)行TH, NPY, CGRP或SP免疫組織化學(xué)染色.
轉(zhuǎn)貼于
切片經(jīng)0.02 mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH 5.4)漂洗10 min,用含50 mL/L牛血清白蛋白、50 mL/L正常羊血清和4 g/L TritonX100的磷酸鹽緩沖液封閉2 h,清洗后分別加入兔抗TH, CGRP(1∶5000), NPY或SP(1∶100)多克隆抗體,4℃孵育48 h,抗體稀釋液用含10 mL/L牛血清白蛋白、10 mL/L正常羊血清和4 g/L Triton X100的磷酸鹽緩沖液配制. 生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG室溫孵育2 h,ABC復(fù)合液室溫孵育30 min,DAB顯色后,輕微脫水,透明,封片,Olympus光學(xué)顯微鏡觀(guān)察并照相,雙標(biāo)染色過(guò)程中注意漂洗液pH值以避免HRP標(biāo)記產(chǎn)物洗脫.
2結(jié)果
2.1FG逆行追蹤豚鼠耳蝸螺旋蝸軸動(dòng)脈局部滴加FG后7 d,同側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)可見(jiàn)FG標(biāo)記神經(jīng)元,在323 nm激發(fā)光下發(fā)出金黃色熒光. FG標(biāo)記神經(jīng)元數(shù)量約在5~16個(gè),絕大部分位于頸上神經(jīng)節(jié)頭側(cè)或中部,大小不等(圖1). 部分FG標(biāo)記神經(jīng)元可見(jiàn)到明顯的軸突及相對(duì)空白的核區(qū). 對(duì)側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)及雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)未見(jiàn)FG標(biāo)記神經(jīng)元.
2.2HRP逆行追蹤耳蝸螺旋蝸軸動(dòng)脈局部滴加HRP后48 h,經(jīng)鎢酸鈉TMB法呈色,同側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)可見(jiàn)HRP標(biāo)記神經(jīng)元. 標(biāo)記神經(jīng)元呈深藍(lán)綠色,核區(qū)明顯淡染,少數(shù)神經(jīng)元可見(jiàn)突起,高倍鏡下可見(jiàn)胞漿內(nèi)的藍(lán)綠色顆粒(圖2 A);手術(shù)同側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)HRP標(biāo)記神經(jīng)元的數(shù)量約為4~12個(gè),大小不等,形態(tài)各異,其分布與FG追蹤組相似,幾乎全部位于頸上神經(jīng)節(jié)頭側(cè)半,對(duì)側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)及雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)內(nèi)未見(jiàn)HRP標(biāo)記神經(jīng)元. 對(duì)照組雙側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)及星狀神經(jīng)節(jié)切片經(jīng)TMB法染色,均未發(fā)現(xiàn)標(biāo)記神經(jīng)元.
2.3HRP逆標(biāo)與TH, NPY免疫組化染色相結(jié)合的雙重標(biāo)記將部分HRP標(biāo)記的切片繼續(xù)行TH或NPY的免疫組化反應(yīng). 頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)有大量的TH陽(yáng)性神經(jīng)元和NPY陽(yáng)性神經(jīng)元,多數(shù)HRP追蹤陽(yáng)性神經(jīng)元同時(shí)呈TH陽(yáng)性,HRPTH雙標(biāo)神經(jīng)元胞體內(nèi)可同時(shí)見(jiàn)到深藍(lán)綠色顆粒和棕黃染色顆粒(圖2 B,C). 多數(shù)HRP追蹤陽(yáng)性神經(jīng)元也呈NPY陽(yáng)性(圖2 D).
2.4HRP逆標(biāo)與SP, CGRP免疫組化染色相結(jié)合的雙重標(biāo)記將部分HRP追蹤的切片行SP及CGRP免疫組化反應(yīng). 頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)可見(jiàn)CGRP陽(yáng)性神經(jīng)元,數(shù)量明顯少于TH, NPY陽(yáng)性神經(jīng)元;頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)偶可見(jiàn)到SP陽(yáng)性細(xì)胞,但SP陽(yáng)性終末比較密集,未見(jiàn)HRPSP或HRPCGRP雙標(biāo)神經(jīng)元.
3討論
耳蝸的供血主要來(lái)自椎-基底動(dòng)脈系統(tǒng)的小腦前下動(dòng)脈分出的迷路動(dòng)脈、耳蝸總動(dòng)脈、耳蝸主動(dòng)脈及前庭耳蝸動(dòng)脈[4]. 耳蝸主動(dòng)脈沿蝸底向蝸?lái)敵事菪龢幼咝?,形成螺旋蝸軸動(dòng)脈,其在不同位置發(fā)出的各級(jí)動(dòng)脈和放射狀動(dòng)脈提供了包括蝸軸在內(nèi)3/4的耳蝸血流. 已有研究證實(shí),耳蝸螺旋蝸軸動(dòng)脈和骨螺旋板周?chē)嬖诶野彼崃u化酶及多巴胺β羥化酶陽(yáng)性纖維分布,分布于血管周?chē)娜ゼ啄I上腺素能纖維可能參與耳蝸微循環(huán)的調(diào)節(jié).
本研究觀(guān)察到豚鼠耳蝸螺旋蝸軸動(dòng)脈周?chē)o予神經(jīng)逆行追蹤劑后,同側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)可見(jiàn)逆行標(biāo)記神經(jīng)元,而對(duì)側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)及雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)未見(jiàn)逆行標(biāo)記神經(jīng)元. 可見(jiàn)分布于耳蝸血管周?chē)慕桓猩窠?jīng)節(jié)后纖維主要來(lái)源于同側(cè)頸上神經(jīng)節(jié),這與GilLoyzaga等[5]報(bào)導(dǎo)的切除大鼠頸上神經(jīng)節(jié)后同側(cè)耳蝸內(nèi)去甲腎上腺素濃度下降82%相符合. 也有研究報(bào)道星狀神經(jīng)節(jié)對(duì)耳蝸血流的調(diào)節(jié)起主要作用,但本研究未能在雙側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)內(nèi)觀(guān)察到逆標(biāo)神經(jīng)元,這種現(xiàn)象可能與追蹤劑敏感性和動(dòng)物存活時(shí)間有關(guān),也可能因?yàn)樾菭钌窠?jīng)節(jié)發(fā)出的節(jié)后纖維主要分布于椎-基底動(dòng)脈系統(tǒng)的較大分支來(lái)行使其調(diào)節(jié)功能,而位于蝸軸內(nèi)的交感神經(jīng)纖維則主要來(lái)源于同側(cè)頸上神經(jīng)節(jié).
同時(shí)我們還通過(guò)對(duì)逆標(biāo)神經(jīng)元行TH, NPY, CGRP及SP的免疫組化染色觀(guān)察到,這些分布于螺旋蝸軸動(dòng)脈周?chē)慕桓猩窠?jīng)節(jié)后纖維來(lái)源于同側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)內(nèi)的TH陽(yáng)性神經(jīng)元,并且大多同時(shí)呈NYP陽(yáng)性. 這也提示了交感神經(jīng)節(jié)后纖維及其相關(guān)遞質(zhì)對(duì)耳蝸微循環(huán)起重要的調(diào)節(jié)作用,這種調(diào)節(jié)作用可能是通過(guò)去甲腎上腺素、多巴胺及神經(jīng)肽類(lèi)等多種神經(jīng)遞質(zhì)協(xié)同完成,也可能受到SP, CGRP陽(yáng)性的交感神經(jīng)節(jié)前纖維的上位調(diào)控. 目前認(rèn)為耳蝸微血管系統(tǒng)對(duì)機(jī)體灌注壓的改變存在顯著的自身調(diào)節(jié)反應(yīng),以保持耳蝸微循環(huán)的相對(duì)穩(wěn)定. Watanabe等[6]觀(guān)察到貓單側(cè)頸上神經(jīng)節(jié)切除后同側(cè)耳蝸側(cè)壁血管紋處微血管明顯擴(kuò)張,結(jié)合我們的研究結(jié)果可以推測(cè)交感頸上神經(jīng)節(jié)對(duì)耳蝸微血管的神經(jīng)支配參與了維持內(nèi)耳微循環(huán)穩(wěn)定的復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),其具體調(diào)節(jié)機(jī)制以及失交感神經(jīng)支配后耳蝸聽(tīng)覺(jué)生理和血流的變化情況有待深入研究.
參考文獻(xiàn)
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關(guān)鍵詞:動(dòng)物免疫學(xué);自主學(xué)習(xí);教學(xué)改革
中圖分類(lèi)號(hào):G642.0 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):1674-9324(2016)42-0114-02
引言:
《動(dòng)物免疫學(xué)》、《獸醫(yī)免疫學(xué)》是高等院校動(dòng)物醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)極為重要的一門(mén)專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課。免疫學(xué)已滲透到生命科學(xué)的所有學(xué)科,而動(dòng)物免疫學(xué)作為免疫學(xué)的一個(gè)分支,也已滲透到獸醫(yī)學(xué)及生物科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。在獸醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用主要包含:
1.免疫診斷。例如,基于抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù),目前已廣泛應(yīng)用于各種動(dòng)物疫病的診斷。
2.免疫預(yù)防。疫苗免疫已經(jīng)成為防控我國(guó)動(dòng)物傳染病的重要手段。目前,我國(guó)對(duì)豬瘟、口蹄疫、高致病性禽流感以及高致病性豬繁殖與呼吸綜合癥等四種重大動(dòng)物疫病實(shí)行強(qiáng)制免疫。
3.免疫治療。例如,對(duì)發(fā)病個(gè)體進(jìn)行抗血清被動(dòng)免疫的緊急預(yù)防治療。然而,由于《動(dòng)物免疫學(xué)》具有理論抽象難懂、知識(shí)點(diǎn)分散繁多等課程特點(diǎn),加之與《獸醫(yī)傳染病學(xué)》、《動(dòng)物生物化學(xué)》等課程的滲透交叉,是動(dòng)物醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)學(xué)生普遍認(rèn)為較為難學(xué)的一門(mén)課程。
自主學(xué)習(xí)教學(xué)法基于美國(guó)心理學(xué)家Carl R. Rogers非指導(dǎo)性教學(xué)理論,是一種以學(xué)習(xí)者為中心,以人為本,引導(dǎo)學(xué)習(xí)者獨(dú)立、主動(dòng)學(xué)習(xí)的教學(xué)方法。在免疫學(xué)的理論與實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中,我們嘗試通過(guò)引導(dǎo)學(xué)生自主學(xué)習(xí),激發(fā)對(duì)免疫學(xué)的興趣,提高學(xué)習(xí)積極性,從而改善教學(xué)效果。本文作者主要根據(jù)切身經(jīng)歷的中美高校獸醫(yī)學(xué)院《動(dòng)物免疫學(xué)》課程教學(xué),通過(guò)比較探討,總結(jié)出以下幾點(diǎn)建議,為我們《動(dòng)物免疫學(xué)》教學(xué)改革提供參考。
一、通過(guò)采用問(wèn)答教學(xué)方式鼓勵(lì)學(xué)生做好課前預(yù)習(xí)
筆者在美國(guó)堪薩斯州立大學(xué)(KSU)學(xué)習(xí)工作期間,選修過(guò)獸醫(yī)學(xué)院的《獸醫(yī)免疫學(xué)》與生物學(xué)院的《免疫學(xué)》兩門(mén)課程。與國(guó)內(nèi)的《動(dòng)物免疫學(xué)》課程相比,美國(guó)《獸醫(yī)免疫學(xué)》課程,明顯更加強(qiáng)調(diào)互動(dòng)教學(xué)。最簡(jiǎn)單的一點(diǎn),國(guó)內(nèi)上《動(dòng)物免疫學(xué)》時(shí),雖然老師也會(huì)提醒學(xué)生提前預(yù)習(xí)課程內(nèi)容,但是由于傳統(tǒng)教學(xué)方法通常是按教材滿(mǎn)堂灌,學(xué)生預(yù)習(xí)與否對(duì)上課影響不大,因此,造成大多數(shù)學(xué)生都沒(méi)有養(yǎng)成認(rèn)真預(yù)習(xí)的習(xí)慣。然而,在美國(guó)《獸醫(yī)免疫學(xué)》或者《免疫學(xué)》課堂上,主要是進(jìn)行免疫學(xué)相關(guān)問(wèn)題的探討。老師會(huì)通過(guò)連續(xù)問(wèn)問(wèn)題的方式引導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí),而學(xué)生則根據(jù)預(yù)習(xí)所自學(xué)內(nèi)容分析、討論這些問(wèn)題,這一問(wèn)答教學(xué)方式使得課前預(yù)習(xí)變得非常重要。如果沒(méi)有很好的課前預(yù)習(xí),很難跟上教學(xué)進(jìn)程。因此,課前預(yù)習(xí)已成為美國(guó)大學(xué)生最重要的學(xué)習(xí)任務(wù)之一。
二、通過(guò)實(shí)際案例講解增強(qiáng)對(duì)免疫學(xué)理論知識(shí)的理解
美國(guó)本科生學(xué)習(xí)《獸醫(yī)免疫學(xué)》和《免疫學(xué)》課程時(shí),教師主要是通過(guò)實(shí)例教學(xué)完成重點(diǎn)免疫學(xué)知識(shí)講解。常用的實(shí)例來(lái)源包括:
1.最新發(fā)表在免疫學(xué)相關(guān)頂級(jí)雜志上的研究?jī)?nèi)容。通過(guò)最新研究結(jié)果探討,講解課程上要介紹免疫學(xué)知識(shí),以增強(qiáng)學(xué)生對(duì)這一知識(shí)點(diǎn)的興趣并加深理解。
2.通過(guò)給學(xué)生提前發(fā)放將要講解的知識(shí)點(diǎn)相關(guān)經(jīng)典文獻(xiàn)或者案例供學(xué)生自學(xué),再在課堂上進(jìn)行特定案例探討。
3.通過(guò)介紹由于免疫學(xué)相關(guān)研究而獲得諾貝爾獎(jiǎng)的實(shí)例介紹免疫學(xué)知識(shí)點(diǎn)。具體案例如:(1)在談到先天性免疫缺陷(SCID)時(shí),通過(guò)講述氣泡男孩David Vetter因?yàn)榛加蠸CID,在與世隔絕的氣泡內(nèi)生活了12年的故事,使大家對(duì)SCID留下深刻的印象。(2)在談到疫苗的作用時(shí),通過(guò)講述1979年天花消滅以及2012年牛瘟撲滅的例子,說(shuō)明疫苗免疫在傳染病防控中的重要作用。(3)德國(guó)醫(yī)學(xué)家Emil Von Behring因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)抗體并建立血清療法而在1901年獲得首屆諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。美國(guó)免疫學(xué)家Bruce A. Beutler與法國(guó)生物學(xué)家Jules A. Hoffmann由于在天然免疫功能方面的研究,與加拿大免疫學(xué)家Ralph M. Steinman關(guān)于樹(shù)突狀細(xì)胞在獲得性免疫功能方面的研究,而共同分享了2011年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。通過(guò)介紹這些偉大的科研成就,提高學(xué)生學(xué)習(xí)免疫學(xué)的興趣并鼓勵(lì)學(xué)生積極參與免疫學(xué)相關(guān)的研究工作。
三、通過(guò)任務(wù)安排使學(xué)生自主完成部分教學(xué)內(nèi)容
KSU本科生在《獸醫(yī)免疫學(xué)》、《免疫學(xué)》教學(xué)過(guò)程中,與國(guó)內(nèi)學(xué)生相比,所需自主參與完成的教學(xué)任務(wù)明顯較多。例如,任課教師會(huì)選擇部分重要知識(shí)點(diǎn),根據(jù)班級(jí)學(xué)生人數(shù),安排3―5名學(xué)生為一小組,完成某一知識(shí)點(diǎn)的自主教學(xué)任務(wù),組內(nèi)人員分工完成相關(guān)資料查詢(xún)、教學(xué)課件準(zhǔn)備,并以PPT形式向所有學(xué)生口頭匯報(bào)。其他學(xué)生可在課堂上提問(wèn),由該組學(xué)生解答。任課老師需在他們完成自主教學(xué)過(guò)程中,給予引導(dǎo)、幫助,并做相應(yīng)的補(bǔ)充,以獲得較為良好的教學(xué)效果。此外,學(xué)生需要自主選擇一個(gè)較為感興趣的免疫學(xué)相關(guān)問(wèn)題,通過(guò)查閱文獻(xiàn)書(shū)籍等資料,寫(xiě)一份關(guān)于該問(wèn)題或者知識(shí)點(diǎn)的綜述報(bào)告,老師會(huì)根據(jù)綜述報(bào)告完成情況,給予點(diǎn)評(píng)并打分。自主教學(xué)與綜述報(bào)告都是期末最終考核的重要組成部分。
四、通過(guò)雙語(yǔ)教學(xué)促進(jìn)獸醫(yī)專(zhuān)業(yè)課程教學(xué)與國(guó)際接軌
隨著教育國(guó)際化進(jìn)程的日益推進(jìn),獸醫(yī)專(zhuān)業(yè)本科教育需要積極使用英語(yǔ)等外語(yǔ)進(jìn)行專(zhuān)業(yè)課教學(xué)。特別是近幾年許多高校都從海外引進(jìn)了一批高層次人才,在師資力量上,雙語(yǔ)專(zhuān)業(yè)課教學(xué)已經(jīng)完全可能實(shí)現(xiàn)。為推進(jìn)我校獸醫(yī)專(zhuān)業(yè)本科生的雙語(yǔ)教學(xué)改革,建議先采用小班試點(diǎn)制,對(duì)部分專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課或?qū)I(yè)課進(jìn)行雙語(yǔ)教學(xué)實(shí)踐。雙語(yǔ)專(zhuān)業(yè)課試點(diǎn)班的順利進(jìn)行需滿(mǎn)足如下要求:
1.試點(diǎn)班學(xué)生必須主觀(guān)支持對(duì)《動(dòng)物免疫學(xué)》等專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課進(jìn)行雙語(yǔ)教學(xué)。同時(shí),試點(diǎn)班學(xué)生還應(yīng)該具有較為良好的英語(yǔ)基礎(chǔ)和一定的專(zhuān)業(yè)知識(shí)基礎(chǔ)。
2.專(zhuān)業(yè)課教學(xué)必須采用雙語(yǔ)教材,可以選用較為權(quán)威的英文原版教材為主要教材,并輔以現(xiàn)有的中文教材。
3.試點(diǎn)班任課老師必須同時(shí)具有較高的專(zhuān)業(yè)教學(xué)水平與外語(yǔ)水平,可以側(cè)重在具有海外留學(xué)工作背景的教師中選擇合適的專(zhuān)業(yè)課老師進(jìn)行試驗(yàn)性教學(xué)。
4.要求學(xué)生做好課前預(yù)習(xí)和課后復(fù)習(xí),課堂上教師可多采用問(wèn)答教學(xué)方式,鼓勵(lì)學(xué)生主動(dòng)參與部分教學(xué)工作,調(diào)動(dòng)學(xué)生自主參與的積極性,鼓勵(lì)創(chuàng)造性思考,提高學(xué)習(xí)興趣和教學(xué)質(zhì)量。
五、小結(jié)
有效進(jìn)行問(wèn)答教學(xué)、實(shí)例教學(xué)、自主教學(xué)和雙語(yǔ)教學(xué)等,必將有助于提高《動(dòng)物免疫學(xué)》的教學(xué)效果,但是這一方法的有效實(shí)施要求學(xué)生必須積極配合,也要求學(xué)生具有一定的專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)知識(shí)和較強(qiáng)的自學(xué)能力。同時(shí),對(duì)任課教師自身的水平也有更高的要求。因此,為切實(shí)做好《動(dòng)物免疫學(xué)》教學(xué)改革工作,需要根據(jù)生源水平、師資力量等實(shí)際情況,與中國(guó)學(xué)生目前更加適應(yīng)的傳統(tǒng)教學(xué)法等相互結(jié)合,循序漸進(jìn)地改善《動(dòng)物免疫學(xué)》教學(xué)效果。
參考文獻(xiàn):
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Enlightenment From the Teaching-learning Model of Veterinary Immunology in United States
CHEN Nan-hua,ZHU Jian-zhong *
(College of Veterinary Medicine,Yangzhou University,Yangzhou,Jiangsu 225009,China)
【關(guān)鍵詞】中草藥;免疫功能;探討
【中圖分類(lèi)號(hào)】R722.12 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949(2014)01-0241-01
免疫學(xué)是主要是研究免疫功能的一門(mén)學(xué)科,而免疫功能是對(duì)疾病抵抗力較強(qiáng)的一種狀態(tài),然而現(xiàn)代免疫學(xué)的觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為凡是研究人類(lèi)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫反應(yīng)均屬之。免疫系統(tǒng)的基本作用是抵抗微生物和化學(xué)因子的侵犯以保護(hù)機(jī)體的完整性。而祖國(guó)醫(yī)學(xué)強(qiáng)調(diào)人體自身防御機(jī)能,以及扶正培本的辨證論治,與免疫學(xué)的雙相調(diào)節(jié)觀(guān)點(diǎn)有著很密切的關(guān)系。近幾年來(lái),國(guó)內(nèi)外學(xué)者從不同角度研究中藥對(duì)人體免疫功能的調(diào)節(jié)作用,均取得可喜的進(jìn)展,故本文將有關(guān)研究中藥免疫功能的資料作以綜述,以饗同道。
1單味中藥對(duì)免疫的作用
現(xiàn)代科學(xué)已經(jīng)證實(shí),幾乎所有的滋補(bǔ)中藥都具有免疫功能,它們所含的稀有元素具有調(diào)節(jié)體內(nèi)電子的作用,能充實(shí)細(xì)胞內(nèi)氧的成分。對(duì)人體的免疫功能有著不同的調(diào)節(jié)作用。常用能促進(jìn)血液中白細(xì)胞數(shù)量增加的中藥有人參、黨參、苦參、漢防己、青本香、夏枯草、黃芪、金銀花、麥冬、黃芩、生地、紫花地丁、女貞子、板蘭根、山茱萸、枸杞子、補(bǔ)骨脂、大棗、丹參、靈芝等;能促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能增強(qiáng)的中藥有人參、白術(shù)、夏枯草、靈芝、豬苓、香菇、當(dāng)歸、牛黃、蒲公英、黃芪、桑寄生、青蒿、水牛角.茯苓、王米須等;能促進(jìn)T細(xì)胞數(shù)量增加、淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化的中藥有人參、丹參、川芎、靈芝、何首烏、白術(shù)、五味子、當(dāng)歸、黃精、薏苡仁、天門(mén)冬,女貞子、羊蓬、枸杞、黨參等:能對(duì)干擾素有誘生作用的中藥有黃芪、紅花、冬瓜子、白芷、當(dāng)歸、艾葉、川芎,桑枝,蘇葉、柴胡、天麻、半夏、車(chē)前子、漢防已、青蒿、玉米須等;能促進(jìn)抗體產(chǎn)生的中藥有人參、何首烏、柴胡、紫河車(chē)、地黃、羊霍等;能參與預(yù)防腫瘤免疫反應(yīng)的中藥有人參、豬苓、仙鶴草、白茅根、大棗、靈芝、桂枝、柴胡、當(dāng)歸、甘草、白術(shù)、天門(mén)冬、薏苡仁、茯苓、黃苠、白花蛇舌草、山慈菇等。國(guó)外發(fā)現(xiàn)腫瘤全消退率以當(dāng)歸為最高,可達(dá)88.9%其次為柴胡、掛枝可達(dá)66。7%,豬苓可達(dá)42.7%[1]
2 中藥提取成分對(duì)免疫的作用
靈芝具有“安神、保神”、“入心生血、助心充脈”“久服輕身不老,延年神仙”。現(xiàn)代藥理和臨床研究證明,靈芝具有多方面生理活性和藥理作用。經(jīng)何慶云等研究發(fā)現(xiàn)靈芝多糖 體為扶正固本的有效成分。其不僅對(duì)正常小鼠睥淋巴細(xì)胞生殖反應(yīng)有促進(jìn)作用,而且能促進(jìn)老年小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖,對(duì)免疫低下的老年小鼠抗體形細(xì)胞(PFc)的產(chǎn)生有促進(jìn)作用[2]。眾所周知,白細(xì)胞介素2(II一2)具有廣泛的免疫活性,已在多種免疫缺陷性疾病和腫瘤免疫治療中得到廣泛的應(yīng)用。
而靈芝多糖體能顯著增加正常小鼠脾臟細(xì)胞 IL一2的產(chǎn)生!并可恢復(fù)年老小鼠細(xì)胞分泌IL,-2的能力,對(duì)氫化可的松或環(huán)孢素A抑制的小鼠脾細(xì)胞IL…2的產(chǎn)生表現(xiàn)部分拮抗作用。因此,靈芝多糖體的免疫調(diào)節(jié)作用不僅促進(jìn)正常小鼠的細(xì)胞免疫和體液免疫,而且對(duì)免疫抑制劑表現(xiàn)有拮抗的作用,對(duì)老年小鼠低下的免疫功能有恢復(fù)作用,為延緩衰老延年益壽的有效成分。黃芪“甘溫純陽(yáng)”,具有補(bǔ)氣升陽(yáng),益衛(wèi)固表之功。據(jù)現(xiàn)代藥理分析,黃芪含有豐富的硒(Se)元素,它是介于金屬與非金屬之間的化學(xué)元素。它對(duì)維生素A、C、E、K的吸收與消耗進(jìn)行調(diào)節(jié),也是構(gòu)成人體內(nèi)谷胱甘肽過(guò)氧化酶的重要成分,參與人體的新陳代謝。對(duì)機(jī)體的免疫有促進(jìn)怍用,對(duì)各種金屬等造成的致癌物質(zhì)有抑制作用,對(duì)細(xì)胞膜有保護(hù)作用。中國(guó)醫(yī)科院腫瘤研究所在黃芪各種有效成分中篩選出F3,該成分在體外異種移植物抗宿主反應(yīng)的試驗(yàn)中顯示對(duì)癌證患者淋巴細(xì)胞功能有完全性免疫恢復(fù)作用。在進(jìn)一步研究中發(fā)現(xiàn)F3可提高淋巴因子IL一2激活殺傷(LAK)細(xì)胞,以提高腫瘤的殺傷效應(yīng)[3]。儲(chǔ)大同等研究也表明,黃芪F3在體外與低劑量的ril一2(100u/ml);合用所產(chǎn)生的,
總之,許多中藥具有免疫調(diào)節(jié)劑的性能,其主要作用是調(diào)動(dòng)整體的非特異性抵抗力,這和西藥的特導(dǎo)性是互補(bǔ)的。因此。運(yùn)用中藥必須宏觀(guān)著眼,研究中藥必須微觀(guān)著手,進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)中藥免疫功能的研究,讓中藥在過(guò)繼免疫治療中發(fā)揮其獨(dú)特的作用。
參考文獻(xiàn)
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【關(guān)鍵詞】 變態(tài)反應(yīng)和免疫學(xué);教學(xué)方法;教育改革
醫(yī)學(xué)免疫學(xué)作為生命科學(xué)發(fā)展的前沿學(xué)科,以其廣度的多交叉性和深度的多層次性,成為溝通基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)無(wú)可替代的橋梁學(xué)科。在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)等多學(xué)科的滲透下,當(dāng)代醫(yī)學(xué)免疫學(xué)的發(fā)展日新月異,并顯示出和臨床疾病的發(fā)生、發(fā)展、診斷、治療以及預(yù)防等諸多環(huán)節(jié)息息相關(guān),和生物技術(shù)的發(fā)展及產(chǎn)業(yè)化緊密聯(lián)系等一系列特點(diǎn),加之免疫學(xué)理論具有相對(duì)獨(dú)立性,名詞新穎概念繁多,內(nèi)容比較深?yuàn)W抽象,學(xué)生初次接觸時(shí),覺(jué)得學(xué)習(xí)較為困難。因此,如何適應(yīng)當(dāng)代醫(yī)學(xué)免疫學(xué)發(fā)展的時(shí)代要求,針對(duì)免疫學(xué)知識(shí)體系的特點(diǎn),有效提高醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)質(zhì)量,成為醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)的關(guān)鍵。幾年來(lái),我們?cè)诿庖邔W(xué)教學(xué)中,注重加強(qiáng)教學(xué)改革,對(duì)學(xué)生在知識(shí)、能力和素質(zhì)三方面進(jìn)行培養(yǎng),收到良好效果,現(xiàn)總結(jié)如下:
1 優(yōu)化免疫學(xué)理論課教學(xué)內(nèi)容,培養(yǎng)學(xué)生的主動(dòng)學(xué)習(xí)能力
免疫學(xué)理論具有相對(duì)獨(dú)立性,內(nèi)容比較抽象,新理論、新知識(shí)、新技術(shù)較多,在教學(xué)上歷來(lái)存在內(nèi)容多而課時(shí)少的矛盾,如果教師為完成教學(xué)內(nèi)容而滿(mǎn)堂灌,就會(huì)造成教師講的越多,學(xué)生得到的越少;教師面面俱到,重點(diǎn)不突出、難點(diǎn)講不透,學(xué)生的印象模糊不清,結(jié)果事倍功半,事與愿違。因此,在教學(xué)中必須從分析知識(shí)的內(nèi)在聯(lián)系和教材內(nèi)容的前后聯(lián)系出發(fā),把握教學(xué)重點(diǎn),找出難點(diǎn)和關(guān)鍵。并對(duì)知識(shí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行重新優(yōu)化組合,使之成為能為學(xué)生接受的知識(shí)框架,例如免疫應(yīng)答是基礎(chǔ)免疫學(xué)的核心內(nèi)容,以往學(xué)生反映本章理論深?yuàn)W,難以掌握,為此我們?cè)诮虒W(xué)時(shí),將每一種應(yīng)答的基本內(nèi)容設(shè)計(jì)為圖表進(jìn)行歸納,把繁雜的文字?jǐn)⑹鎏釤挒橹R(shí)點(diǎn)串聯(lián)起來(lái)的框架,提供給學(xué)生最簡(jiǎn)單、最有效的知識(shí)養(yǎng)分。在課堂上主要講解重點(diǎn)和難點(diǎn)內(nèi)容,而對(duì)其他次要內(nèi)容或比較容易理解的內(nèi)容則略講或讓學(xué)生自學(xué)。根據(jù)學(xué)生情況,推薦一些新版專(zhuān)著及相關(guān)的綜述文章作為參考,以開(kāi)闊其思路和視野。這樣,一方面在不失全面性、系統(tǒng)性的基礎(chǔ)上,緊扣重點(diǎn)、突破難點(diǎn),精辟講解,使學(xué)生學(xué)得懂,學(xué)得精;另一方面也培養(yǎng)了學(xué)生學(xué)習(xí)和掌握新知識(shí)的能動(dòng)性。
2 改革免疫學(xué)理論課教授方法,注重知識(shí)傳授與能力培養(yǎng)
2.1 運(yùn)用啟發(fā)式教學(xué),提高學(xué)生學(xué)習(xí)興趣[1] 醫(yī)學(xué)免疫學(xué)概念多、抽象、不易理解,如果教學(xué)方法不當(dāng),很容易使學(xué)生產(chǎn)生疲勞感。因此,在教學(xué)過(guò)程中,教師要按照科學(xué)發(fā)展的規(guī)律、知識(shí)結(jié)構(gòu)相互依存關(guān)系,由淺入深、由表及里,由特殊到一般地展現(xiàn)知識(shí),啟迪學(xué)生在理解的基礎(chǔ)上掌握知識(shí),加強(qiáng)記憶,舉一反三,觸類(lèi)旁通。我們經(jīng)常運(yùn)用提問(wèn)方式,把要講的內(nèi)容以問(wèn)題的形式提出,引導(dǎo)學(xué)生積極思考,然后圍繞問(wèn)題以解答的方式授課;或者有的問(wèn)題問(wèn)而不答,讓學(xué)生自己思考、討論,激勵(lì)學(xué)生大膽質(zhì)疑,老師學(xué)生共同解疑。比如在講免疫學(xué)緒論時(shí),我們采用提問(wèn)方式激發(fā)學(xué)生的興趣,如:首先提出青霉素過(guò)敏性休克是如何發(fā)生的?乙型肝炎如何預(yù)防等,然后簡(jiǎn)單回答,最后小結(jié)免疫學(xué)與疾病的發(fā)生、診斷、預(yù)防、治療等息息相關(guān),以此說(shuō)明免疫學(xué)的重要性和激發(fā)學(xué)生對(duì)免疫學(xué)學(xué)習(xí)的興趣。
2.2 利用多媒體教學(xué),加深學(xué)生對(duì)知識(shí)的理解[2] 計(jì)算機(jī)多媒體技術(shù)將文字、圖像、聲音等多種載體結(jié)合在一起,具有信息載體多樣性、集成性和交互性等特點(diǎn),它改變了“一本書(shū)、一張嘴、外加板書(shū)和掛圖”的傳統(tǒng)教學(xué)模式。近年來(lái),我們?cè)诿庖邔W(xué)教學(xué)中應(yīng)用多媒體進(jìn)行教學(xué),深受學(xué)生的歡迎,應(yīng)用多媒體教學(xué),省去了教師板書(shū)的時(shí)間,可以講授更多學(xué)生感興趣的問(wèn)題,擴(kuò)展學(xué)生的知識(shí)面,拓寬學(xué)生獲得知識(shí)的時(shí)間和空間范圍。此外,多媒體教學(xué)應(yīng)用視聽(tīng)結(jié)合方式表達(dá)授課內(nèi)容,充分調(diào)動(dòng)視覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)兩種功能的作用,為學(xué)生提供直觀(guān)、生動(dòng)的感性認(rèn)識(shí),化深?yuàn)W為簡(jiǎn)易,化抽象為具體,化靜態(tài)為動(dòng)態(tài),使過(guò)于理論化、抽象的免疫學(xué)理論得到更形象、直觀(guān)的闡述,從而激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,提高了學(xué)習(xí)效率。如在講解抗原提呈細(xì)胞章節(jié)時(shí),可用幾幅帶有動(dòng)畫(huà)效果的畫(huà)面,通過(guò)顏色和不同畫(huà)面出現(xiàn)的時(shí)間差的變化,比較形象地把抗原提呈細(xì)胞對(duì)抗原的攝取、加工處理及提呈過(guò)程展現(xiàn)給學(xué)生,收到事半功倍的效果。
2.3 對(duì)學(xué)生進(jìn)行學(xué)習(xí)方法指導(dǎo)[3] 古人曰:“授人以魚(yú),一食之需,授人以漁,終身受用”。作為身心均發(fā)育成熟的大學(xué)生,其“會(huì)學(xué)”比“學(xué)會(huì)”更重要,又由于免疫學(xué)對(duì)初學(xué)者而言需要接受、理解、記憶的基本概念和基本理論太多,因此,指導(dǎo)學(xué)習(xí)方法是必需的。我們認(rèn)為給學(xué)生有意識(shí)地介紹學(xué)習(xí)方法,對(duì)幫助其學(xué)好免疫學(xué)非常重要。在免疫學(xué)學(xué)習(xí)過(guò)程中,第一是要求學(xué)生上課時(shí)注重對(duì)問(wèn)題的理解。在理解的基礎(chǔ)上,才能記住相應(yīng)的知識(shí),切忌上課當(dāng)“打字機(jī)”。第二是要求做好筆記。因我們所選教材的內(nèi)容豐富、繁雜,有時(shí)一次課涉及多個(gè)章節(jié)內(nèi)容,如果學(xué)生上課時(shí)不做筆記,或做得不好,課后將難以把握本次課的主要內(nèi)容和重點(diǎn)難點(diǎn),這就要求學(xué)生邊聽(tīng)邊在重點(diǎn)部分做符號(hào),重點(diǎn)內(nèi)容重點(diǎn)記,一般內(nèi)容略記。重點(diǎn)的內(nèi)容提示學(xué)生先理解聽(tīng)懂,再留時(shí)間做筆記。第三是課后要求及時(shí)復(fù)習(xí)。因免疫學(xué)內(nèi)容抽象,要理解的內(nèi)容多,如不及時(shí)復(fù)習(xí)就容易忘記,而理不清其內(nèi)在邏輯關(guān)系,學(xué)生不能在理解基礎(chǔ)上記憶就會(huì)感到難以記住。第四是要求階段小結(jié)。因?yàn)槊庖邔W(xué)前后章節(jié)聯(lián)系緊密,前邊所學(xué)內(nèi)容進(jìn)一步為后邊的內(nèi)容打下基礎(chǔ),如果前邊的內(nèi)容沒(méi)學(xué)好,學(xué)習(xí)“欠帳”越多,后邊的內(nèi)容理解就越困難。因此,要求學(xué)生對(duì)前邊所學(xué)的內(nèi)容要進(jìn)行階段小結(jié),并布置一定量的思考題;第五是指導(dǎo)記憶方法。因免疫學(xué)內(nèi)容繁多,不好記憶,根據(jù)不同章節(jié)指導(dǎo)學(xué)生應(yīng)用圖示、提綱、列表、對(duì)比等方法,通過(guò)這些方法的介紹,不僅讓學(xué)生獲得了相應(yīng)知識(shí),而且提高了學(xué)生獲取知識(shí)的能力。
2.4 引入PBL教學(xué)法,提高學(xué)生獨(dú)立思考、發(fā)現(xiàn)問(wèn)題、分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力 對(duì)臨床免疫學(xué)的內(nèi)容,如超敏反應(yīng)、免疫缺陷病、自身免疫性疾病、移植免疫、腫瘤免疫等,在學(xué)生對(duì)免疫學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)有一定熟悉和掌握的基礎(chǔ)上,我們采用PBL教學(xué)法[4],進(jìn)行病例討論。討論課前將病例及問(wèn)題發(fā)給學(xué)生,比如“急性腎小球腎炎”病例,列出“初步考慮病人患何病?”、“發(fā)生機(jī)理如何?”、“如何進(jìn)一步明確診斷?”、“如何預(yù)防?”等問(wèn)題。讓學(xué)生查閱資料,預(yù)習(xí)相關(guān)的知識(shí)點(diǎn),自學(xué)總結(jié),準(zhǔn)備小組討論提綱。在PBL教學(xué)課中,圍繞病例所提出的問(wèn)題,首先由組長(zhǎng)作中心發(fā)言,然后由其他同學(xué)進(jìn)行補(bǔ)充或修正。再由教師提出新問(wèn)題,讓作中心發(fā)言的學(xué)生解答,或由他人回答。若問(wèn)題比較難,學(xué)生解決不了時(shí),教師可做適當(dāng)啟發(fā)和引導(dǎo),如果仍不能解決,則由教師解答。PBL教學(xué)課結(jié)束前幾分鐘內(nèi),教師做總結(jié)歸納,強(qiáng)調(diào)一下重點(diǎn)和難點(diǎn)。此外,課堂討論前,教師應(yīng)隨機(jī)地檢查學(xué)生的預(yù)習(xí)筆記,了解學(xué)生的主動(dòng)學(xué)習(xí)情況。課后,教師根據(jù)學(xué)生的討論中的表現(xiàn),實(shí)事求是,客觀(guān)地做出評(píng)定。這種教學(xué)方法,提高了學(xué)生的收集信息、處理信息的能力,獨(dú)立思考、發(fā)現(xiàn)問(wèn)題、分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力,自主學(xué)習(xí)和終生學(xué)習(xí)的能力。
3 改進(jìn)實(shí)驗(yàn)課教學(xué),提高學(xué)生動(dòng)手能力,培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新能力
免疫學(xué)是一門(mén)實(shí)踐性很強(qiáng)的學(xué)科,因此,實(shí)驗(yàn)的開(kāi)設(shè)很重要。實(shí)驗(yàn)課不僅可以驗(yàn)證學(xué)生在理論課學(xué)到的理論知識(shí),而且還能訓(xùn)練學(xué)生的基本實(shí)驗(yàn)技能、培養(yǎng)其科學(xué)思維能力。為此,我們?cè)黾恿藢?shí)用性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn),并注重對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的整體安排。另外,對(duì)學(xué)有余力的學(xué)生,我們開(kāi)展課外科研興趣小組活動(dòng),以問(wèn)題為中心,讓學(xué)生圍繞某一問(wèn)題查找文獻(xiàn),收集資料,在老師指導(dǎo)下設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃,親自動(dòng)手完成相關(guān)實(shí)驗(yàn),分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,寫(xiě)成論文。比如以免疫球蛋白的分離、純化、鑒定為主線(xiàn),安排了血清IgG的提純、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、免疫印跡等一系列實(shí)驗(yàn)。這樣做不僅訓(xùn)練了學(xué)生的基本實(shí)驗(yàn)操作技能,同時(shí)還培養(yǎng)了他們的創(chuàng)造性思維習(xí)慣和對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀(guān)察、分析和表達(dá)能力,這對(duì)日后進(jìn)一步深造及科研創(chuàng)新打下了良好的基本功。
4 利用網(wǎng)絡(luò)資源,開(kāi)展高效輕松的課后復(fù)習(xí)方式,提高學(xué)習(xí)效果
醫(yī)學(xué)免疫學(xué)的內(nèi)容需要反復(fù)理解和記憶,我們利用學(xué)院網(wǎng)絡(luò)資源,建設(shè)網(wǎng)絡(luò)課程,讓學(xué)生在課余時(shí)間上網(wǎng)自學(xué)和復(fù)習(xí)。學(xué)生可以通過(guò)終端與網(wǎng)絡(luò)中心連接,將課堂上講解的多媒體課件再?gòu)慕虒W(xué)資料中心的服務(wù)器中讀取,對(duì)不理解的環(huán)節(jié)可反復(fù)觀(guān)看。同時(shí),可以利用網(wǎng)上提供的練習(xí)題進(jìn)行自我測(cè)驗(yàn),檢查學(xué)習(xí)效果。對(duì)還沒(méi)有掌握的內(nèi)容再進(jìn)行學(xué)習(xí)。這種做法,不僅降低了教師工作強(qiáng)度,而且提高了學(xué)生學(xué)習(xí)興趣和學(xué)習(xí)效果[5]。2006級(jí)學(xué)生醫(yī)學(xué)免疫學(xué)期考成績(jī)?yōu)椋?0.32±16.46)分,2005級(jí)學(xué)生期考成績(jī)?yōu)椋?2.78±21.75)分,統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異有顯著性(t=6.18,P<0.01),2006級(jí)學(xué)生醫(yī)學(xué)免疫學(xué)期考成績(jī)比2005級(jí)學(xué)生有明顯提高。
綜上所述,我們根據(jù)免疫學(xué)的學(xué)科特點(diǎn),對(duì)免疫學(xué)課程從教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)方法等多方面進(jìn)行了改革,激發(fā)了學(xué)生主動(dòng)學(xué)習(xí)的熱情,取得了良好的教學(xué)效果。
參考文獻(xiàn)
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關(guān)鍵詞:檢測(cè);學(xué)習(xí)教學(xué)
一、改革的方法
(1)基本理論和技能的訓(xùn)練基地的建立。重點(diǎn)訓(xùn)練生化檢駐技術(shù)、免疫檢驗(yàn)技術(shù)、血液檢驗(yàn)技術(shù)、細(xì)胞檢驗(yàn)技術(shù)、徽生物檢驗(yàn)技術(shù)等不僅每所教學(xué)醫(yī)院有帶教教師,還由檢驗(yàn)系選派基礎(chǔ)理論和基本技能扎實(shí)的青年教師帶教(彌補(bǔ)各醫(yī)院帶教教師理論知識(shí)的不足),隨時(shí)解決實(shí)習(xí)中所遇到的理論和技術(shù)方面的問(wèn)題聯(lián)系實(shí)際,及時(shí),記憶深刻,易消化課堂知識(shí)。強(qiáng)化專(zhuān)業(yè)各學(xué)科基礎(chǔ)理論和基本技能,按教學(xué)計(jì)劃開(kāi)展各學(xué)科專(zhuān)題講座(不少于80學(xué)時(shí)),參加各種國(guó)際、國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)會(huì)議。見(jiàn)多識(shí)廣,熟悉國(guó)內(nèi)現(xiàn)有較新、精、先連儀器的原理,掌握使用方法,學(xué)會(huì)診斷程亭,設(shè)計(jì)小型畢業(yè)科研課題,完成論文。由于各教學(xué)醫(yī)院帶教教師認(rèn)真負(fù)責(zé)。
(2)外語(yǔ)能力訓(xùn)練的課程建設(shè)。除學(xué)習(xí)基礎(chǔ)外,增設(shè)醫(yī)學(xué)英語(yǔ)12時(shí)(使用六年制的英語(yǔ)教材)編寫(xiě)了《免疫學(xué)基礎(chǔ)》、《免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》(英語(yǔ)教材),開(kāi)沒(méi)丁《免痙學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)》的英語(yǔ)專(zhuān)業(yè)授課的新課程. 共計(jì)108學(xué)時(shí)填補(bǔ)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)本科生的專(zhuān)業(yè)課用英語(yǔ)講授的空自。大大提高了學(xué)生的寫(xiě)、聽(tīng)、閱讀、說(shuō)和水平,使補(bǔ)語(yǔ)能力增強(qiáng),摸索出一套外語(yǔ)教學(xué)的方法,促進(jìn)了教學(xué)水平的提高,培養(yǎng)出專(zhuān)業(yè)英語(yǔ)教師。為臨床實(shí)習(xí)及文獻(xiàn)查閱、綜述撰寫(xiě)打下良好基礎(chǔ)。
(3)科研能力的訓(xùn)練及課程建設(shè)。科研能力是非常重要的能力培養(yǎng)內(nèi)容,是完成培養(yǎng)目標(biāo)的關(guān)鍵。我們編寫(xiě)了《簡(jiǎn)明科學(xué)學(xué)》(即將出版),設(shè)置《科學(xué)學(xué)》課程(54學(xué)時(shí),包括科研實(shí)踐)和《文獻(xiàn)檢索》課程(2O學(xué)時(shí))較系統(tǒng)學(xué)習(xí)了現(xiàn)代科學(xué)學(xué)的理論,了解邊緣學(xué)科、橫向?qū)W科、綜合學(xué)科的相互聯(lián)系和科學(xué)學(xué)體系、發(fā)展趨勢(shì),基本掌握科研方法和文獻(xiàn)查閱的途徑重點(diǎn)實(shí)施科研實(shí)踐。通過(guò)《文獻(xiàn)檢索》、《科學(xué)學(xué)》的學(xué)習(xí),理論聯(lián)系實(shí)際。其步驟是,2~4名學(xué)生由一位具中級(jí)以上職稱(chēng)的中青年教師指導(dǎo)。導(dǎo)師(其中有碩士、博士或留國(guó)研修生)有較強(qiáng)專(zhuān)業(yè)能力,年富力強(qiáng)勇于刨新,常是省級(jí)以上課題的負(fù)責(zé)人或?qū)W科骨干。指導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行文獻(xiàn)資料的查閱、選擇綜違的立飚及綜述撰寫(xiě)(30篇左右,外文不少于I5篇),最后評(píng)價(jià)綜述和答辯《科學(xué)學(xué)》和《文獻(xiàn)檢索撇為限定選修課進(jìn)行考棱。綜述答辯做為科研實(shí)踐能力檢測(cè)方式??己嗽u(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)由立題、前言、標(biāo)題、結(jié)論、文獻(xiàn)量、科學(xué)性、價(jià)值、表達(dá)能力、應(yīng)變能力、綜合能力等指標(biāo)組成,將成績(jī)做為畢業(yè)成績(jī)之一??蒲袑?shí)踐的延伸是在畢業(yè)實(shí)習(xí)中完成的,為畢業(yè)成績(jī)另一部分。學(xué)生以綜述為“背景,根據(jù)實(shí)習(xí)基地條件,修訂方案,設(shè)計(jì)較易完成的科研小課題。待實(shí)習(xí)結(jié)束,完成論文,答辯通過(guò)。
二、改革的初步效果
總的看來(lái)(分析88~90級(jí)3屆學(xué)生),從培養(yǎng)基本技能、能力和科研能力入手,進(jìn)行教學(xué)改革初顯成效表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面基礎(chǔ)理論和基本技術(shù)進(jìn)一步鞏固,基礎(chǔ)扎實(shí)。兩處實(shí)習(xí)基地反映一致,認(rèn)為學(xué)生手技較好,操作熟練,接受力強(qiáng)。愛(ài)提同,積極參加教學(xué)與科研活動(dòng),理論知識(shí)掌握較牢。從實(shí)習(xí)評(píng)分表和評(píng)語(yǔ)”中看到,幾屆學(xué)生平均成績(jī)達(dá)到良好,并呈提高趨勢(shì)。畢業(yè)成績(jī)(科研實(shí)踐、畢業(yè)論文、畢業(yè)專(zhuān)業(yè)考試)較好,提高明顯的為科研實(shí)踐的綜述答辯成績(jī)(平均8O分以上),畢業(yè)論文成績(jī)參差不齊(或有的由于醫(yī)院條件的限制而缺少)影響總成績(jī)。實(shí)習(xí)學(xué)生受到各實(shí)習(xí)醫(yī)院好評(píng),特別以醫(yī)院教授評(píng)價(jià)為代表,他認(rèn)為,我院學(xué)生學(xué)習(xí)態(tài)度端正,肯鉆研,能吃苦,基本技能較好,有后勁。平均兩年為醫(yī)院輸送1名畢業(yè)生。近三年來(lái)已先后有三十多名學(xué)生分配到各大醫(yī)院及醫(yī)療衛(wèi)生部門(mén)外語(yǔ)水平穩(wěn)步提高四、六緞考試通過(guò)宰連年提高(這對(duì)生源較多的情況是不易的)。在實(shí)習(xí)醫(yī)院科研過(guò)程,了大量的文獻(xiàn)資料和儀器使用說(shuō)明書(shū),受到帶教教師的好評(píng)。已有綜述在省級(jí)以上雜志發(fā)表(6篇)。與國(guó)內(nèi)重點(diǎn)院校檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)的外語(yǔ)差距有所減小,其中,外語(yǔ)水平較高者已留校任教,充實(shí)教學(xué)第一線(xiàn)。
科研能力大大增強(qiáng)。鐵路中心醫(yī)院檢驗(yàn)科檢驗(yàn)醫(yī)師(我院畢業(yè)生),首次發(fā)現(xiàn)新菌種,以其名命名,破格晉升。參加和參與科研工作的人數(shù)增多其中參加項(xiàng)目有的已通過(guò)省級(jí)鑒定或獲得專(zhuān)利和獎(jiǎng)勵(lì)。開(kāi)始在各醫(yī)院的檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)中嶄露頭角。綜合培養(yǎng)使能力提高,有的巳成為學(xué)科組組長(zhǎng),或?qū)W科帶頭人的培養(yǎng)對(duì)象,做為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)事業(yè)的后備力量,有的向更高的層次(博士生)選?。ǖ谝粋€(gè)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)博士生為我院畢業(yè)生)。
三、改革的體會(huì)
(1)基本技能、外語(yǔ)能力、科研能力三位一體的訓(xùn)練方式是打破傳統(tǒng)臨床實(shí)習(xí)教學(xué)模式的行之有效的改革方法。具有醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)臨床實(shí)習(xí)特點(diǎn)(突出臨床實(shí)踐與綜違論文相聯(lián)系的特性)。雖然科研課題小,但包含了科全過(guò)程,使學(xué)生綜合能力得到鍛煉與提高
(2)臨床實(shí)習(xí)教學(xué)改革不僅體現(xiàn)在畢業(yè)實(shí)習(xí)環(huán)節(jié)上。還需提前到專(zhuān)業(yè)課(專(zhuān)業(yè)課)和課間實(shí)習(xí)中。使臨床實(shí)習(xí)教學(xué)改革具有系統(tǒng)性。
關(guān)鍵詞:T細(xì)胞;E-玫瑰花環(huán);尼龍毛柱;免疫磁珠;流式細(xì)胞術(shù)
中圖分類(lèi)號(hào):Q819 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1674-0432(2011)-03-0062-2
T細(xì)胞是介導(dǎo)特異性免疫的核心細(xì)胞,對(duì)其功能及活化機(jī)制等方面的研究一直是免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)和前沿,對(duì)T細(xì)胞的分離純化可滿(mǎn)足深入研究其生物學(xué)特性、功能及其表面抗原表位、受體作用的要求。根據(jù)T細(xì)胞表面不同的標(biāo)志(主要是表面抗原和表面受體),目前人們已建立多種分離方法并在實(shí)際研究中廣泛加以應(yīng)用。
1 E-玫瑰花環(huán)形成分離法
玫瑰花環(huán)試驗(yàn)是體外檢測(cè)人和動(dòng)物細(xì)胞免疫功能的一種試驗(yàn)方法。玫瑰花結(jié)是1970年Coombs等人在研究淋巴細(xì)胞表面抗原或抗原抗體復(fù)合物的受體時(shí)發(fā)現(xiàn)的,他們觀(guān)察到在自然情況下,人體淋巴細(xì)胞能與綿羊紅細(xì)胞粘附而形成玫瑰花樣細(xì)胞,因涂片瑞氏染色后,淋巴細(xì)胞被染成藍(lán)紫色猶如花芯,而粘附于淋巴細(xì)胞周?chē)木d羊紅細(xì)胞被染成紅色類(lèi)似花瓣,整個(gè)形狀如上衣上的裝飾品――玫瑰花別針,故稱(chēng)此種細(xì)胞為玫瑰花結(jié)。1973年國(guó)際免疫學(xué)會(huì)已公認(rèn)這是T細(xì)胞的特征標(biāo)志之一。
原理是動(dòng)物外周血液中有T細(xì)胞和B細(xì)胞。T細(xì)胞表面具有紅細(xì)胞受體,同種或異種動(dòng)物紅細(xì)胞與之相遇后、結(jié)合,并圍繞于T細(xì)胞周?chē)帕谐蔀槊倒寤ōh(huán)狀。B細(xì)胞表面沒(méi)有紅細(xì)胞受體,則不能形成玫瑰花環(huán)。
E-玫瑰花環(huán)在免疫學(xué)上的意義及影響、形成的各種因素等等越來(lái)越受到學(xué)者們的重視。國(guó)內(nèi)外先后報(bào)道的有馬、牛、驢、雞、豬、耗牛等[1]十多種動(dòng)物的E-玫瑰花環(huán)試驗(yàn),其在腫瘤、藥物檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域正在逐漸地增加。
E-玫瑰花環(huán)形成法需要綿羊紅細(xì)胞,不但分離效率低,而且需低滲清除紅細(xì)胞,這對(duì)淋巴細(xì)胞本身的活性就有較大的影響。另外,其他影響因素仍然較多,比如溫度、淋巴細(xì)胞的濃度、紅細(xì)胞是否新鮮和濃度大小、小牛血清、酶、植物血凝素及一些不定因素。
Bernier等[2]的報(bào)道中指出在獲得純化的T細(xì)胞方面,綿羊紅細(xì)胞玫瑰花環(huán)實(shí)驗(yàn)給出的結(jié)果不可靠。Indiveri等[3]利用綿羊紅細(xì)胞的玫瑰花環(huán)法和尼龍毛柱法分離人的T細(xì)胞并進(jìn)行了對(duì)比,發(fā)現(xiàn)兩種方法的回收率和純度相似。Chollet等[4]利用尼龍毛柱和綿羊紅細(xì)胞的玫瑰花環(huán)方法分離淋巴細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞電泳,結(jié)果證明,天然T細(xì)胞移動(dòng)速率較快,天然B細(xì)胞移動(dòng)速率較慢。
2 尼龍毛柱分離法
Julius等[5]最早建立了一種快速分離T細(xì)胞的方法,他們把鼠的脾細(xì)胞和淋巴結(jié)細(xì)胞懸液加到尼龍毛柱中,37℃,45min,最后獲得的T細(xì)胞含量在84-91%之間,回收率在50-89%之間。
原理是T細(xì)胞表面較光滑,而B(niǎo)細(xì)胞表面絨毛較多,混合的淋巴細(xì)胞懸液在通過(guò)尼龍毛柱時(shí),B細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核細(xì)胞和一些輔助細(xì)胞被選擇性粘附于尼龍毛上,需用冷洗脫和擠壓尼龍棉的方法才可獲得,而多數(shù)T細(xì)胞則通過(guò)尼龍毛柱從尼龍毛上洗脫下來(lái)。
該方法操作簡(jiǎn)便易行,無(wú)需特殊儀器,對(duì)細(xì)胞損傷小,重復(fù)性好,適合在一般實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。但有研究結(jié)果表明分離后T細(xì)胞的純度不高,由于尼龍毛柱上可能會(huì)選擇性滯留某些T細(xì)胞亞群,使其回收率較低、而且操作繁瑣,要時(shí)刻注意細(xì)胞懸液的流速,過(guò)快便會(huì)造成其他淋巴細(xì)胞的混入,降低T細(xì)胞的純度。目前國(guó)內(nèi)現(xiàn)有條件下尼龍毛來(lái)源少,不易購(gòu)得,進(jìn)口的尼龍毛又非常昂貴,不易于推廣,有學(xué)者嘗試用脫脂棉代替尼龍毛來(lái)分離T、B淋巴細(xì)胞。
繼Julius等的工作之后,國(guó)外一些學(xué)者[6-9]利用此方法對(duì)雞的脾淋巴細(xì)胞、貓的外周血單核細(xì)胞、鼠脾細(xì)胞、人的扁桃體進(jìn)行了分離。Antonia Corrigan等[10]對(duì)脾淋巴細(xì)胞進(jìn)行了T細(xì)胞分離,發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞膜上的磷脂、膽固醇、唾液酸在細(xì)胞水平上有所衰退,指出尼龍毛柱分離技術(shù)不適用于淋巴細(xì)胞的生化學(xué)檢查。國(guó)內(nèi)一些學(xué)者如:姜曼和謝克儉等[11-12]都用脫脂棉柱和尼龍毛柱分離純化人外周血T細(xì)胞并進(jìn)行了比較,結(jié)果兩種方法分離的T細(xì)胞純度差別不大,對(duì)純化T細(xì)胞的活力影響較小,兩者比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)。
3 免疫磁珠分離法
免疫磁珠分離法是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究比較熱門(mén)的一種新的免疫學(xué)技術(shù),應(yīng)用廣泛。免疫磁珠最早是由John Ugelstad[13]等于1979年代制備出的一種與抗體相連的磁化聚苯乙烯微粒,從此被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)衛(wèi)生領(lǐng)域的許多方面。
原理是免疫磁珠既可結(jié)合活性蛋白質(zhì)(抗體),又可被磁鐵所吸引。經(jīng)過(guò)一定處理可將抗體結(jié)合在磁珠上,使磁珠作為抗體載體與抗原物質(zhì)結(jié)合,形成抗原-抗體-磁珠免疫復(fù)合物,在磁鐵磁力的作用下,這種復(fù)合物發(fā)生力學(xué)移動(dòng),使復(fù)合物與其他物質(zhì)分離,從而達(dá)到分離特異性抗原的目的。
王百林等[14]利用免疫磁珠法對(duì)皮膚移植小鼠進(jìn)行Tm細(xì)胞的分離,最后得到CD8+CD4+ 細(xì)胞比例占(97.75±0.9)%,CD8+CD4- 細(xì)胞比例占(96.0±1.02)%,而CD8+Tm的活細(xì)胞百分率為98.5%,得到高純度的CD8+Tm細(xì)胞。
此法具有操作簡(jiǎn)單、快捷、穩(wěn)定、重復(fù)性好、分離純度高、保留細(xì)胞活性等諸多優(yōu)點(diǎn),但也存在一定的問(wèn)題,不同的細(xì)胞其表面物質(zhì)也不同,這會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的不確定性,進(jìn)而影響其在臨床中的應(yīng)用。而且需要昂貴的標(biāo)記好的特異性第二抗體,目前尚難以推廣應(yīng)用,且不同抗體濃度包被的免疫磁珠進(jìn)行免疫檢測(cè)時(shí)效果差異較大。
4 流式細(xì)胞儀分離法
流式細(xì)胞技術(shù)是上世紀(jì)七十年展起來(lái)的,利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行一種單細(xì)胞定量分析和分選的技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)集合了眾多學(xué)者們的心血,1953年P(guān)arker 和Horst 描述一種全血細(xì)胞計(jì)數(shù)器裝置,成為流式細(xì)胞儀的雛形。1967年Kamemtsky 和Melamed 在Moldaven的方法的基礎(chǔ)上提出了細(xì)胞分選的方法。1969年Van Dilla,F(xiàn)ulwyler及其同事發(fā)明了第一臺(tái)熒光檢測(cè)細(xì)胞計(jì)。1973年BD公司與美國(guó)斯坦福大學(xué)合作,研制開(kāi)發(fā)并生產(chǎn)了世界第一臺(tái)商用流式細(xì)胞儀FACS I。
原理是:當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細(xì)胞懸液放入樣品管中,被高壓壓入流動(dòng)室內(nèi)。流動(dòng)室內(nèi)充滿(mǎn)鞘液,在鞘液的包裹和推動(dòng)下,細(xì)胞被排成單列以一定速度從流動(dòng)室噴口噴出。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻的壓電晶體,充電后振動(dòng)使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,待測(cè)細(xì)胞就分散在這些液滴中。將這些液滴充以正負(fù)電荷,當(dāng)液滴流經(jīng)過(guò)帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時(shí),在高壓電廠(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn)落入各自的收集容器中,沒(méi)有充電的液滴落入中間的廢液容器,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。
孟博等[15]采用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)妊娠期高血壓疾病(PIH)患者外周血CD4+T細(xì)胞凋亡率對(duì)眼底病變的影響進(jìn)行了檢測(cè),表明外周血CD4+T細(xì)胞凋亡對(duì)PIH的發(fā)生發(fā)展有一定的預(yù)警意義。肖莉[16]利用流式細(xì)胞儀對(duì)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞水平的變化進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)NSCLC組外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞水平明顯高于健康對(duì)照組,且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可作為評(píng)估肺癌患者愈后的一項(xiàng)指標(biāo)。宋海澄等[17]采用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)原發(fā)性肝癌患者外周血中的CD3+CD56+T細(xì)胞、CD3+CD56-T細(xì)胞、CD3-CD56+NK細(xì)胞進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)CD3+CD56+T細(xì)胞在原發(fā)性肝癌患者外周血中增生活躍。
流式細(xì)胞儀以其快速、準(zhǔn)確、靈活、大量、多參數(shù)同時(shí)分析等優(yōu)點(diǎn),已成為免疫學(xué)研究領(lǐng)域中無(wú)可替代的重要工具。但是流式細(xì)胞儀分離法也存在費(fèi)用高、操作費(fèi)時(shí)、甚至有時(shí)可能影響細(xì)胞的活性,對(duì)細(xì)胞損傷較大、且無(wú)菌操作難以實(shí)現(xiàn),可能會(huì)對(duì)分選出來(lái)的細(xì)胞造成污染而無(wú)法進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)等確定。
5 結(jié)語(yǔ)
在免疫學(xué)研究中,T細(xì)胞有效分離方法的不斷涌現(xiàn),極大地豐富了免疫學(xué)研究?jī)?nèi)容,拓寬了研究的深度和廣度,同時(shí)提高了科研的水平和層次。隨著科技水平的不斷發(fā)展,相信在未來(lái)的免疫學(xué)領(lǐng)域,各種T細(xì)胞分離方法的應(yīng)用范圍也會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大,應(yīng)用深度也會(huì)進(jìn)一步加強(qiáng)。
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1 近視與其相關(guān)抗原
1.1 ABO抗原 近年來(lái),ABO抗原已被用于免疫遺傳性疾病的研究上,已知的可能與ABO抗原有關(guān)的眼病有原發(fā)性閉角型青光眼、近視性屈光不正、老年性白內(nèi)障及視網(wǎng)膜色素變性[3]。
有關(guān)近視的遺傳方式看法不一,主要觀(guān)點(diǎn)有多因子遺傳、隱性遺傳、常染色體隱性遺傳、單因子遺傳、常染色體顯性遺傳等。胡誕寧等[1]對(duì)近視眼患者家族的社會(huì)調(diào)查結(jié)果顯示,父母雙方均為高度近視者,子代100%為高度近視。而有的資料卻表明,雙親單純性近視或變性近視,子代不一定都出現(xiàn)近視。孫成甲[4]在臨床研究中發(fā)現(xiàn),父母都有近視而其子女患近視的不足半數(shù)。還有人認(rèn)為中低度近視的發(fā)病有肯定的家族傾向性,與遺傳密切相關(guān)[5]。另外,通常人眼各部分遺傳性不同,軸長(zhǎng)、角膜曲率及晶狀體后曲率遺傳性大,而晶狀體厚度及前曲率與遺傳無(wú)關(guān),Sorsby[4]認(rèn)為決定近視眼遺傳的主要成分是軸長(zhǎng)。
1.2 HLA抗原 HLA是比ABO血型系統(tǒng)更為復(fù)雜和重要的強(qiáng)抗原系統(tǒng)。HLA抗原稱(chēng)人類(lèi)組織相容性抗原,又稱(chēng)人類(lèi)白細(xì)胞抗原,是具有極高度遺傳性的多型性膜抗原[6]。HLA抗原根據(jù)其構(gòu)造、機(jī)能,分為Ⅰ類(lèi)和Ⅱ類(lèi)抗原。
目前已知有20多種眼病與HLA抗原有關(guān)[7]。1983年王蓉芳等人[8]發(fā)現(xiàn)HLA-B8陽(yáng)性者易患高度近視,而HLA-B15陽(yáng)性者不易患高度近視。Пучковская[9]發(fā)現(xiàn),先天性近視與HLA-B7和HLA-B12是有聯(lián)系的,當(dāng)近視患者同時(shí)有HLA-B7和HLA-B8抗原時(shí),發(fā)生視網(wǎng)膜脫離的危險(xiǎn)性升高。
至于HLA與疾病相關(guān)的機(jī)理目前學(xué)說(shuō)較多,有擬態(tài)學(xué)說(shuō)、受體學(xué)說(shuō)、免疫應(yīng)答基因、抑制基因?qū)W說(shuō)、連鎖不平衡學(xué)說(shuō)等[10]。目前較為關(guān)注的假說(shuō)是疾病易感基因?qū)W說(shuō)。有人發(fā)現(xiàn),自身免疫病的易感基因不僅與HLA關(guān)聯(lián),而且與一個(gè)特定的HLA單位體關(guān)聯(lián)[11]。
1.3 S抗原 S抗原即視網(wǎng)膜可溶性抗原。S抗原具有強(qiáng)烈的抗原性和致色素膜炎活性[12],它能誘發(fā)產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)性葡萄膜炎和實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜色素變性已被許多學(xué)者所證實(shí),而有關(guān)近視與S抗原的關(guān)系,目前報(bào)道很少。Стукалов[13]在對(duì)有并發(fā)癥的高度近視患者進(jìn)行免疫研究時(shí)發(fā)現(xiàn),視網(wǎng)膜抗原的白細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn)的移動(dòng)指數(shù)降低到0.52±0.1。根據(jù)免疫學(xué)理論,如果移動(dòng)指數(shù)等于1或接近1,說(shuō)明機(jī)體對(duì)此抗原無(wú)特異性免疫作用;如果移動(dòng)指數(shù)明顯<1,表示機(jī)體對(duì)此抗原有特異性免疫作用。這就初步證明了有并發(fā)癥的高度近視患者的機(jī)體對(duì)視網(wǎng)膜抗原有過(guò)敏作用。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)[13],眼底嚴(yán)重的變性改變不僅見(jiàn)于有并發(fā)癥的高度近視患者,而且也見(jiàn)于中度甚至輕度近視,眼底的中央及周邊都有變性改變,這些都不排除在屈光指數(shù)穩(wěn)定的前提下,近視患者眼底并發(fā)癥的出現(xiàn)與自身免疫性損傷有關(guān)。
1.4 膠原(collagen) 膠原是組織中主要結(jié)構(gòu)蛋白。現(xiàn)已證實(shí),膠原與組織的增生、分化、粘附與運(yùn)動(dòng)以及關(guān)節(jié)、電解質(zhì)平衡等都有密切關(guān)系[14]。
膠原是一個(gè)非常特別的纖維蛋白群體,它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)、功能和組織分布上相互間有差異。在眼組織中,只有Ⅰ~I(xiàn)X型膠原被定位。在所有含有膠原纖維的結(jié)締組織中都含有Ⅰ型膠原[15],Ⅰ型膠原的功能是給組織以抗張強(qiáng)度。
人眼的鞏膜組織由纖維結(jié)締組織構(gòu)成,而每個(gè)纖維束又由膠原纖維組成。在生化研究中發(fā)現(xiàn),Ⅰ型膠原位于眼球的赤道部和后極部之間[16]。Marshall等[17]對(duì)老年人鞏膜的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行免疫金染色,結(jié)果表明,Ⅰ、Ⅲ和Ⅴ型膠原在鞏膜中是存在的,并且在單個(gè)的膠原纖維內(nèi)聯(lián)結(jié)得很緊密。
鞏膜膠原纖維的直徑范圍很寬,大的和小的纖維可能有不同的功能,這些功能決定了鞏膜的生化特性[15]。大纖維在膠原分子間交叉連接的密度大,所能承受的張力大,而小纖維與周?chē)|(zhì)之間的接觸面積大,纖維間相互作用強(qiáng)[18]。
然而,當(dāng)患近視時(shí),鞏膜膠原結(jié)構(gòu)發(fā)生了顯著的變化,特別是眼球后極部發(fā)生了明顯改變,引起近視程度的加深[19]。Curtin等[20]用電鏡觀(guān)察了高度近視患者的鞏膜結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)高度近視患者鞏膜纖維多為板層結(jié)構(gòu)且變薄,交織狀態(tài)變少,纖維直徑明顯變細(xì),纖維橫斷面中異常的鋸齒樣、星狀纖維明顯增多。以上情況造成了膠原纖維更大的可伸展性,并減弱了膠原纖維之間的穩(wěn)定性,使得鞏膜后極部纖維的周期性波動(dòng)范圍擴(kuò)展到62~70nm[19]。Лазук等[19]認(rèn)為鞏膜膠原抗原結(jié)構(gòu)破壞及改變的原因可能是自身免疫反應(yīng),為此研究了各種類(lèi)型進(jìn)展性近視患者的血清和淚液中的膠原抗體。結(jié)果50%~70%的患者在血清中發(fā)現(xiàn)了膠原抗體,對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)。在評(píng)價(jià)免疫應(yīng)答程度時(shí)發(fā)現(xiàn),良性近視患者血清中膠原抗體濃度較高,特別是學(xué)齡期后天性且無(wú)并發(fā)癥的近視患者指標(biāo)最高,而在并發(fā)有混合型周邊玻璃體脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜變性的快速(年改變率>1.0D)進(jìn)展性近視患者,包括視網(wǎng)膜漆裂、格子樣變性和視網(wǎng)膜裂孔,在血清中“缺乏”膠原抗體。因此確定,患中、高度近視的兒童和青少年,形成了對(duì)膠原系統(tǒng)的免疫應(yīng)答。可以初步推測(cè),對(duì)于中、高度進(jìn)展性近視患者來(lái)說(shuō),對(duì)膠原產(chǎn)生的自身免疫反應(yīng)和血液中循環(huán)免疫復(fù)合物的堆積,造成了鞏膜的損傷,切斷了鞏膜內(nèi)分子間與分子內(nèi)的聯(lián)系,引起膠原免疫遺傳基因的改變,使得近視得以進(jìn)行性發(fā)展,而當(dāng)對(duì)膠原的自身免疫反應(yīng)“起動(dòng)”時(shí),血清中膠原抗體的存在是確定的保護(hù)因素,因此可以說(shuō),血液中膠原抗體的含量相對(duì)少時(shí),特別是在眼底有不同程度的改變時(shí),這種相對(duì)低濃度的抗體可以成為鞏膜免疫病理學(xué)改變的標(biāo)志,這種改變也是對(duì)惡性近視的預(yù)報(bào)。
2 近視患者的體液免疫狀況
Пучковская等[9]對(duì)56名年輕的近視患者進(jìn)行了免疫學(xué)研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)IgG含量升高,IgM含量下降。而Казанец等[2]的研究結(jié)果是近視患者眼局部和全身IgM水平升高,以局部IgM的升高更為顯著,而IgG變化很小。Стукалов等[13]發(fā)現(xiàn),有并發(fā)癥的高度近視患者血清中IgG降低,IgM升高,免疫復(fù)合物增加到98%±5%.對(duì)于不同類(lèi)型近視患者的體液免疫狀況還有待進(jìn)一步的研究。
3 近視患者的細(xì)胞免疫狀況
Пучковская等[9]的研究結(jié)果顯示,進(jìn)展性近視患者外周血中淋巴細(xì)胞含量較正常人低,T淋巴細(xì)胞的相對(duì)數(shù)和絕對(duì)數(shù)明顯降低。Стукалов等[13]對(duì)有并發(fā)癥的高度近視患者的免疫學(xué)研究結(jié)果顯示,T淋巴細(xì)胞、輔T細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞以及B淋巴細(xì)胞的含量明顯降低。可以推測(cè),細(xì)胞免疫功能缺陷與近視發(fā)病可能有關(guān)。Пучковская等[9]的實(shí)驗(yàn)性研究也證明了這一點(diǎn)。他以65只新生家鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,用X射線(xiàn)照射家鼠的胸腺部位,結(jié)果損害了鞏膜組織的正常發(fā)育,導(dǎo)致鞏膜組織中發(fā)生變性改變以及膠原纖維的斷裂,影響了鞏膜的生物力學(xué)特性,成為了軸性近視發(fā)展的基礎(chǔ),而細(xì)胞免疫即是在胸腺的控制下形成的。
4 結(jié)論
綜上所述,機(jī)體免疫狀況的改變?cè)诮暤陌l(fā)病機(jī)理中起著一定的作用。近視患者,尤其是有并發(fā)癥的高度近視患者的細(xì)胞免疫和體液免疫狀況與自身免疫性疾病患者的免疫反應(yīng)指標(biāo)相似。對(duì)于不同類(lèi)型近視患者的細(xì)胞、體液免疫狀況,ABO抗原、S抗原,以及不同類(lèi)型的HLA抗原、不同亞型的膠原抗原與近視發(fā)病的關(guān)系,還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)和臨床研究,這無(wú)論對(duì)近視病因的理解,還是在臨床中用免疫方法預(yù)防、預(yù)測(cè)和治療近視都將是有益的。
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急性腦出血腦血管疾病包括短暫性腦缺血發(fā)作、腦血栓形成和腦栓塞。但是腦血管疾病是嚴(yán)重危害人類(lèi)生命的三大疾病之一,其中,缺血性腦血管疾病的發(fā)病率占75%,是中老年的常見(jiàn)病和多發(fā)病,具有起病急驟,病情危重,變化多端,復(fù)發(fā)率高以及治愈率低等特點(diǎn),嚴(yán)重危害人類(lèi)健康,目前對(duì)該病的防治已成為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的重要課題。既往的研究資料已從臨床和實(shí)驗(yàn)研究的方面證實(shí):針刺對(duì)急性缺血性腦損傷保護(hù)作用機(jī)制的研究方面也取得了可喜的進(jìn)展,現(xiàn)在從整體水平深入到細(xì)胞和分子水平?,F(xiàn)將近年來(lái)有關(guān)針刺對(duì)急性腦出血腦損傷保護(hù)作用機(jī)制方面的文獻(xiàn),從改善神經(jīng)調(diào)節(jié)、增加腦血流量、提高免疫系統(tǒng)功能、抑制自由基生成、調(diào)節(jié)NO和ET、抗腫瘤壞死因子、抗腦細(xì)胞凋亡、保護(hù)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子等方面綜述如下。
1 改善神經(jīng)調(diào)節(jié)
針灸對(duì)急性腦出血腦損傷保護(hù)作用神經(jīng)通路可能為多種神經(jīng)、體液通路相互作用的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)證實(shí)了[1]電針刺激腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)干,可顯著增強(qiáng)其缺血側(cè)腦皮質(zhì)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,可能是電針刺激發(fā)揮腦保護(hù)效應(yīng)的重要機(jī)制之一。脈沖磁針和電針一樣能改善善腦缺血大鼠的神經(jīng)功能,并可降低血漿ET含量。脈沖磁針儀對(duì)腦缺血損傷模型,具有減輕其神經(jīng)元損傷和增強(qiáng)損傷修復(fù)、提高存活率有其重要作用,且可促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)因子產(chǎn)生并延長(zhǎng)神經(jīng)生長(zhǎng)因子產(chǎn)生時(shí)限,以及對(duì)腦缺血損傷后肢體功能恢復(fù)。
2增加腦血流量
針刺對(duì)血液流變學(xué)[2]、血脂質(zhì)等指標(biāo)均有不同程度的改善作用。電針能夠降低血管阻力,緩解血管痙攣狀態(tài),增強(qiáng)缺血部血管代償能力,調(diào)整腦血流的低灌狀態(tài),從而增加腦血流量。能明顯改善其血瘀癥狀和體征;改善血液流變性,調(diào)整微循環(huán)狀況;通過(guò)改善脂質(zhì)代謝,軟化動(dòng)脈血管。
3提高免疫系統(tǒng)功能
針刺能升高CD3、CD4/CD8水平,降低Ca水平,臨床和實(shí)驗(yàn)研究[3]證明針刺能明顯地改善病人的免疫功能,提高機(jī)體的免疫水平,而且成為治療急性腦卒中的有效治療手段。
4抗腦細(xì)胞凋亡
細(xì)胞凋亡(apoptosis)是一種生理?xiàng)l件下的細(xì)胞死亡模式,有核細(xì)胞在一定條件下通過(guò)啟動(dòng)自身內(nèi)部機(jī)制激活內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶而發(fā)生細(xì)胞自然死亡[4]。局灶性腦缺血后,既有細(xì)胞壞死的存在,又有細(xì)胞凋亡的發(fā)生,即凋亡與壞死并存。
5抑制氧自由基生成
自由基誘導(dǎo)的腦損傷機(jī)制[5]為自由基產(chǎn)生過(guò)量能引起脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸的過(guò)氧化,使膜結(jié)構(gòu)遭到破壞、蛋白降解、核酸主鏈斷裂、透明質(zhì)酸解聚、細(xì)胞崩解、線(xiàn)粒體變性,細(xì)胞發(fā)生不可逆改變,最終死亡。
6調(diào)節(jié)一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素(ET)
NO和ET是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的血管活性物質(zhì)中的兩個(gè)最主要因子。NO是在一氧化氮合成酶(NOS)催化下,由L-精氨酸氧化產(chǎn)生的一種氣體活性物質(zhì),血管內(nèi)皮質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元及皮質(zhì)細(xì)胞均可產(chǎn)生NO,具有強(qiáng)烈的舒張血管、抗血小板聚集及抑制中性白細(xì)胞聚集和黏附作用。ET是至今發(fā)現(xiàn)[6]的最強(qiáng)、持續(xù)最久的內(nèi)源性血管收縮肽,主要分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞和中樞神經(jīng)之內(nèi)。
7抗腫瘤壞死因子生成
腫瘤壞死因子(TNF) [7]是由多種細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的炎性細(xì)胞因子,腦缺血及再灌注后腦內(nèi)TNF-α水平升高,與其他炎性細(xì)胞因子相互作用,可通過(guò)誘導(dǎo)腦缺血再灌注時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)促進(jìn)炎癥反應(yīng)及血栓形成。
8保護(hù)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子
腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF) [8]是神經(jīng)生長(zhǎng)因子家族的重要成員。BDNF廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS),特別是海馬及皮層神經(jīng)元,能促進(jìn)膽堿能、多巴胺能及運(yùn)動(dòng)性神經(jīng)元存活、分化和軸突再生。
9結(jié)語(yǔ)
多年的臨床實(shí)踐證明,針灸對(duì)急性腦出血有較好的療效,但是在臨床和實(shí)驗(yàn)研究中仍然存在一些問(wèn)題,如:針灸對(duì)急性腦出血的治療忽視早期的預(yù)防。中醫(yī)學(xué)指出“不治已病治未病”,但是仍然沒(méi)有引起許多患者高度重視;不僅傳統(tǒng)的針刺方法具有雙向調(diào)節(jié)作用,而且還有較好的抗腦缺血再灌后腦損傷的作用。因此在腦損傷作用的研究中尚有許多作用機(jī)制與問(wèn)題有待進(jìn)一步探討。
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主管單位:湖南師范大學(xué)
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出版地址:湖南省長(zhǎng)沙市
語(yǔ)
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本:大16開(kāi)
國(guó)際刊號(hào):1007-7847
國(guó)內(nèi)刊號(hào):43-1266/Q
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