前言:一篇好文章的誕生,需要你不斷地搜集資料、整理思路,本站小編為你收集了豐富的動(dòng)畫(huà)電影市場(chǎng)分析主題范文,僅供參考,歡迎閱讀并收藏。
夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)公司目前已經(jīng)制作發(fā)行了24部動(dòng)畫(huà)長(zhǎng)片。此前其作品發(fā)行權(quán)一直歸派拉蒙公司所有,后者從夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)電影和家庭影音產(chǎn)品發(fā)行中可獲取8%的利潤(rùn)分配額度。自2006年來(lái),雙方成功合作發(fā)行了《怪物史萊克》系列、《馬達(dá)加斯加》系列、《功夫熊貓》系列以及《馴龍高手》等影片,在全球創(chuàng)造了超過(guò)65億美元的票房收入。
今年7月,夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)剛以1.55億美元的價(jià)格收購(gòu)了著名動(dòng)畫(huà)制作及角色版權(quán)運(yùn)營(yíng)公司Classic Media。該公司耳熟能詳?shù)淖髌钒ā锻谀睦铩罚╓here's Wally?)、《鬼馬小精靈》(Casper the Friendly Ghost)、《獨(dú)行俠》(The Lone Ranger)等知名動(dòng)畫(huà)系列,旗下總共擁有450部各類(lèi)電視作品,總集數(shù)達(dá)到6100集。此外還擁有眾多漫畫(huà)作品的版權(quán),漫畫(huà)書(shū)刊的累計(jì)發(fā)行量超過(guò)20億冊(cè)。
8月,夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)的第二財(cái)季營(yíng)收?qǐng)?bào)告顯示,公司營(yíng)收從2.183億美元下降到1.628億美元,跌幅達(dá)25%;而1280萬(wàn)美元的盈利與去年同期的3410萬(wàn)美元相比也下跌了63%。夢(mèng)工廠總裁杰弗瑞·卡森伯格(Jeffrey Katzenberg)在營(yíng)收?qǐng)?bào)告中指出,夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)第二財(cái)季利潤(rùn)主要來(lái)自于《馬達(dá)加斯加3:歐洲大圍捕》(Madagascar 3: Europe's Most Wanted)——該片全球票房收入截至目前超過(guò)5億美元,在年度票房榜上排名第七。家庭娛樂(lè)方面,兩部2011年上映的影片繼續(xù)發(fā)力:《穿靴子的貓》(Puss in Boots)在第二財(cái)季收入中貢獻(xiàn)了2280萬(wàn)美元;《功夫熊貓2》(Kung Fu Panda 2)收入4640萬(wàn)美元,主要源于本土付費(fèi)電視點(diǎn)播。
夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)與派拉蒙此前曾為延續(xù)發(fā)行協(xié)議進(jìn)行過(guò)談判,派拉蒙方面提出提高發(fā)行分成,但這個(gè)提議沒(méi)有得到卡森伯格的同意。另一方面,派拉蒙現(xiàn)在已經(jīng)有了自己的動(dòng)畫(huà)公司——派拉蒙動(dòng)畫(huà)(Paramount Animation),其動(dòng)畫(huà)片《蘭戈》(Rango)不僅票房?jī)?yōu)異,還獲得了奧斯卡最佳動(dòng)畫(huà)電影獎(jiǎng)。此種情形下,雙方似乎早已先去了繼續(xù)合作的意愿。而對(duì)于下一個(gè)合作伙伴,夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)曾希望將利潤(rùn)分配額度壓到7%左右。除??怂雇?,夢(mèng)工場(chǎng)動(dòng)畫(huà)此前曾經(jīng)與索尼公司進(jìn)行了數(shù)次洽談,但未能達(dá)成一致。
在新的合作協(xié)議中,??怂箤陌l(fā)行夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)電影和家庭影音產(chǎn)品的利潤(rùn)中提取8%作為發(fā)行費(fèi)用,此外??怂惯€允許夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)在美國(guó)本土的電視窗口(包括付費(fèi)電視、有線電視和Netflix在內(nèi))發(fā)行其動(dòng)畫(huà)作品,而不再額外收取發(fā)行費(fèi)用;而對(duì)于夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)的新媒體發(fā)行收入(包括線上銷(xiāo)售、在線視頻點(diǎn)播和線上租賃),??怂怪荒芴岢?%。分析認(rèn)為,夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)和??怂购炗喌男掳l(fā)行協(xié)議對(duì)夢(mèng)工廠一方較為有利??ㄉ駡?jiān)信新媒體發(fā)行將在未來(lái)大放異彩,雖然現(xiàn)在這部分收入所占比例還很低,但他顯然準(zhǔn)備牢牢握住這部分利益。
對(duì)于新的發(fā)行合作伙伴,卡森伯格表示夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)曾考慮過(guò)多家公司,甚至包括自主發(fā)行影片,但他最終選擇了具有“壓倒性?xún)?yōu)勢(shì)”的??怂构荆骸案?怂箵碛袕V泛的發(fā)行平臺(tái),在全球范圍內(nèi)的影院和家庭影音行業(yè)都位于領(lǐng)先地位。??怂菇⒘藫碛袑?zhuān)業(yè)力量和資源的世界級(jí)發(fā)行團(tuán)隊(duì),我們相信在接下來(lái)的五年內(nèi),夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)可借此充分發(fā)揮其作品的市場(chǎng)潛力?!?/p>
盡管20世紀(jì)福克斯旗下?lián)碛凶约旱膭?dòng)畫(huà)公司——藍(lán)天工作室(Blue Sky),但分析人士認(rèn)為,夢(mèng)工廠未來(lái)幾年與藍(lán)天工作室可能會(huì)形成有益的競(jìng)爭(zhēng)態(tài)勢(shì)。以“慢工出細(xì)活”著稱(chēng)的藍(lán)天工作室短期內(nèi)不會(huì)因?yàn)榕c夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)爭(zhēng)搶檔期而產(chǎn)生內(nèi)耗。前者出品的《樹(shù)葉人艾匹克》(Epic)和《里約大冒險(xiǎn)2》(Rio 2)將分別在2013年5月24日和2014年4月11日上映。
市場(chǎng)分析師們紛紛對(duì)??怂乖谌蚱狈康挠绊懥Τ挚隙☉B(tài)度。Cowen&Company公司分析師道格·克魯茲(Doug Creutz)說(shuō):“??怂乖诤M獍l(fā)行業(yè)務(wù)方面的規(guī)模和經(jīng)驗(yàn)將對(duì)夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)拓展國(guó)際市場(chǎng)發(fā)揮重要作用。”證券評(píng)級(jí)機(jī)構(gòu)Janney Montgomery Scott分析師托尼·韋伯(Tony Wible)則認(rèn)為這番合作的戰(zhàn)略意義遠(yuǎn)重于經(jīng)濟(jì)效益:“新聞集團(tuán)可能助力夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)發(fā)展新的動(dòng)畫(huà)頻道,這對(duì)夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)本身以及Classic Media的內(nèi)容推廣都將起到積極作用。”
在皮克斯的動(dòng)畫(huà)電影出現(xiàn)疲態(tài)的情況下,手握藍(lán)天工作室,又與夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)聯(lián)姻的20世紀(jì)??怂构荆谂c皮克斯、迪士尼陣營(yíng)抗衡中無(wú)疑有了更重的砝碼。業(yè)內(nèi)預(yù)估此項(xiàng)合作將為新聞集團(tuán)帶來(lái)每年7500萬(wàn)美元的收益。
夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)未來(lái)的動(dòng)畫(huà)電影項(xiàng)目
2012年(派拉蒙發(fā)行)
《守護(hù)者的崛起》(Rise of the Guardians) 11月21日上映
2013年(??怂拱l(fā)行)
《克魯?shù)乱患摇罚═he Croods) 3月22日 上映
《蝸牛》(Turbo) 7月19日上映
《眼鏡狗和眼鏡男孩》(Mr. Peabody & Sherman) 11月8日上映
2014年
《我和我的影子》(Me and My Shadow) 3月14日上映
《馴龍記2》(Dragons) 6月20日上映
《斯麥克節(jié)快樂(lè)》(Happy Smekday?。?第四季度上映
2016年
《功夫熊貓3》(Kung Fu Panda 3)
夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)發(fā)行業(yè)務(wù)合約比較
合作方 合約要點(diǎn) 合約期限
派拉蒙 從夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)電影及家庭影音產(chǎn)品利潤(rùn)中提成8%。 7年
從夢(mèng)工廠動(dòng)畫(huà)電影及家庭影音產(chǎn)品利潤(rùn)中提成8%,
[關(guān)鍵詞] 頭頸癌; 量子點(diǎn); 表皮生長(zhǎng)因子受體; 成像; 體內(nèi)分布
[中圖分類(lèi)號(hào)] R 739.8 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A [doi] 10.3969/j.issn.1000-1182.2012.06.003
對(duì)活體內(nèi)癌細(xì)胞可視化實(shí)時(shí)成像觀察在研究癌癥的發(fā)生發(fā)展和個(gè)體化治療中具有重要作用,同時(shí)也是抗癌領(lǐng)域里研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的量子點(diǎn)(quantum dots,QDs)在該領(lǐng)域顯示出巨
大的發(fā)展前景[1-2]。
QDs是一種由Ⅱ~Ⅵ族元素或Ⅲ~Ⅴ族元素組成的納米微晶體,與目前傳統(tǒng)的有機(jī)熒光染料和熒光蛋白相比,QDs具有如下獨(dú)特的光學(xué)特性:QDs激發(fā)光譜寬且連續(xù)分布,發(fā)射光譜窄而對(duì)稱(chēng),熒光度強(qiáng),光化學(xué)穩(wěn)定性好,不易發(fā)生光漂白,通過(guò)改變粒子的尺寸和組成可獲得從紫外到近紅外范圍內(nèi)任意點(diǎn)的光譜[1-3]。QDs的這些光學(xué)特征是目前所有熒光探
針都不具備的。特別是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的發(fā)射波長(zhǎng)在700~900 nm范圍內(nèi)的近紅外熒光量子點(diǎn)(near-infrared fluorescent quantum dots,NIRF-QDs),其不僅可以避免組織自發(fā)熒光(400~600 nm)的干擾,同時(shí)對(duì)組織具有強(qiáng)的穿透力,因而特別適合于體內(nèi)可視化成像研究[4-5]。
目前研究表明:頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞高表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,
EGFR)[6-7]。本研究將人頰鱗狀細(xì)胞癌BcaCD885細(xì)胞植入裸鼠的頦-頸交界部皮下,建立頦-頸部鱗癌模型,用最大發(fā)射波長(zhǎng)為800 nm的QDs與EGFR單克隆抗體(monoclonal antibody,mAb)連接,制備QD800-EGFR mAb探針,通過(guò)靜脈注射QD800-EGFR mAb對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)行原位可視化成像觀察,并觀察其體內(nèi)分布特征,為進(jìn)一步探索基于抗體靶向性的NIRF-QDs對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的可視化成像和個(gè)體化診治提供依據(jù)。
1 材料和方法
1.1 主要材料
1.1.1 試劑和儀器 QD800抗體偶聯(lián)試劑盒(Invitro-
gen公司,美國(guó)),EGFR mAb(Abcam公司,英國(guó)),人頰鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株BcaCD885(四川大學(xué)口腔疾
病研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室),紫外分光光度計(jì)(DU600,Beckman公司,美國(guó)),冷凍離心機(jī)(Z233MK-2,
HERMLE公司,德國(guó)),激光掃描共聚焦顯微鏡(la-ser scanning confocal microscope,LSCM)(TCS-SP5,Leica公司,德國(guó)),Maestro活體成像系統(tǒng)(Maestro EX,Cri公司,美國(guó))。
1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的SPF級(jí)BALB/c nu/nu裸鼠12只為研究對(duì)象,鼠齡6~8周,體重20~25 g。恒溫恒濕條件下飼養(yǎng),墊料、飼料和飲水均經(jīng)滅菌處理。所有實(shí)驗(yàn)操作程序均經(jīng)過(guò)重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用管理委員會(huì)批準(zhǔn)。
1.2 方法
1.2.1 QD800-EGFR mAb探針的制備和純化 根據(jù)QD800抗體偶聯(lián)試劑盒中實(shí)驗(yàn)手冊(cè)所提供的實(shí)驗(yàn)步
驟來(lái)進(jìn)行QD800-EGFR mAb探針的制備,本實(shí)驗(yàn)分為4步,具體如下。1)QDs的活化和洗脫:將濃度為
10 mmol·L-1的雙功能SMCC溶液14 μL以及濃度為
4 μmol·L-1的QD800液125 μL混合,在室溫下活化1 h后用脫鹽柱洗脫,收集有色洗脫液500 μL備用。2)抗體還原和分離:將濃度為1 mol·L-1的二硫蘇糖醇液體6.1 μL加入到300 μL濃度為1 mg·mL-1的EGFR單抗PBS液中,室溫下還原反應(yīng)30 min后加入染料指示液,用脫鹽柱洗脫,收集著色液500 μL備用。3)偶聯(lián)和滅活:將收集的以上兩種洗脫液混合,室溫下偶聯(lián)反應(yīng)1 h后加入3 μL濃度為10 mmol·L-1的2-巰基乙醇,室溫下滅活反應(yīng)30 min。4)濃縮和純化:將以上偶聯(lián)滅活后的液體加入超濾裝置管中7 000 r·min-1離心15 min,收集超濾離心膜內(nèi)側(cè)偶聯(lián)溶液,然后用Pierce柱行色譜分離,得純化的QD800-EGFR mAb探針。最后根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)提供的消光系數(shù)和測(cè)量波長(zhǎng)兩個(gè)參數(shù),以及以此波長(zhǎng)作為激發(fā)光在紫外分光光度計(jì)中測(cè)出相對(duì)應(yīng)的吸光度和比色杯的光程,計(jì)算出QD800-EGFR mAb探針的濃度。計(jì)算公式為:A=εcl,其中A為吸光度值,ε為消光系數(shù),c為分子濃度,l為光程。
1.2.2 QD800-EGFR mAb探針體外標(biāo)記BcaCD885活細(xì)胞 將生長(zhǎng)良好的BcaCD885細(xì)胞以每毫升5×104個(gè)的濃度接種到9個(gè)35 mm玻璃底培養(yǎng)皿(直徑為15 mm)中,每個(gè)1 mL,培養(yǎng)24 h后,棄去培養(yǎng)基,PBS清洗3次。然后分為3組,每組3個(gè)培養(yǎng)皿。實(shí)驗(yàn)組加入濃度為100 nmol·L-1的QD800-EGFR mAb探針100 μL;對(duì)照組Ⅰ加入100 μL濃度為100 nmol·L-1的QD800;對(duì)照組Ⅱ先加入濃度為1 μg·mL-1的EGFR mAb 200 μL以封閉EGFR,2 h后用PBS清洗3次,然后加入濃度為100 nmol·L-1的QD800-EGFR mAb探針100 μL。以上各組在37 ℃下孵育30 min后用PBS沖洗3次,然后在LSCM下觀察QD800-EGFR mAb探針標(biāo)記BcaCD885細(xì)胞的情況。
1.2.3 裸鼠頭頸鱗狀細(xì)胞癌模型的建立 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的BcaCD885細(xì)胞,采用0.5%胰蛋白酶進(jìn)行消化,在4 ℃下,800 r·min-1離心4 min,然后將BcaCD885細(xì)胞懸于PBS液中,將含有2×106個(gè)BcaCD885細(xì)胞的PBS懸液0.2 mL注射于12只裸鼠的頦-頸交界部皮下,從而建立了頭頸部鱗狀細(xì)胞癌模型,每日觀察腫瘤的生長(zhǎng)情況,待腫瘤的最大徑達(dá)到0.8~1.0 cm時(shí)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。
1.2.4 腫瘤活體可視化成像觀察 將頭頸部鱗狀細(xì)胞癌模型裸鼠分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組6只,用2%戊巴比妥鈉(40 mg·kg-1)行腹腔注射麻醉后,實(shí)驗(yàn)組通過(guò)尾靜脈注射100 μL的QD800-EGFR mAb探針
(含100 pmol當(dāng)量的QD800)。對(duì)照組通過(guò)尾靜脈注射250 μL濃度為1 mg·mL-1的EGFR mAb,24 h后再注射100 pmol當(dāng)量的QD800-EGFR mAb探針100 μL。所
有動(dòng)物于注射QD800-EGFR mAb探針之后15 min、30 min、1 h、3 h、6 h、9 h、24 h的7個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)用Maestro活體成像系統(tǒng)進(jìn)行可視化成像檢測(cè),激發(fā)光/發(fā)射光為630 nm/800 nm,曝光時(shí)間為50 ms,像素為1 024×1 024。將采集的圖像用Maestro 2.10.0軟件進(jìn)行處理和數(shù)據(jù)分析,分別顯示自發(fā)熒光和目標(biāo)熒光信號(hào),然后測(cè)量其熒光值,并且計(jì)算熒光信噪比,即腫瘤熒光強(qiáng)度與背景自發(fā)熒光強(qiáng)度之比。將每種信號(hào)添加偽色彩,本研究將自發(fā)熒光設(shè)置為綠色,目標(biāo)熒光信號(hào)設(shè)置為紅色,最后將兩種色彩相疊加。
1.2.5 QD800-EGFR mAb熒光探針的體內(nèi)分布和器官的組織檢查 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別在3 h成像完畢后斷頸處死裸鼠3只,24 h成像后處死裸鼠3只,解剖取出裸鼠的腫瘤、心、肝、脾、肺、左腎、右腎、腦、腸、胃,各器官用PBS沖洗后切分為2塊,一塊器官組織稱(chēng)重后剪成小碎片,放入玻璃勻漿器內(nèi)勻漿,取各器官勻漿液100 μL放入96孔培養(yǎng)板內(nèi),用Maestro活體成像系統(tǒng)進(jìn)行成像,根據(jù)各器官勻漿液的平均熒光和各器官重量對(duì)各器官內(nèi)QD800熒光行半定量分析。同時(shí)將各器官另一塊組織用冰凍切片包埋劑包埋并速凍,在-20 ℃下連續(xù)切割為7 μm厚的組織切片,每?jī)蓮堖B續(xù)的冰凍切片中,一張行常規(guī)HE染色,另一張冰凍組織切片在LSCM下觀察QD800在組織中的分布情況。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
采用SPSS 13.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±s表示,對(duì)兩均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn),對(duì)3個(gè)均數(shù)以上間的比較采用方差分析,P
2 結(jié)果
2.1 QD800-EGFR mAb探針的制備和純化
收集純化的QD800-EGFR mAb探針樣本,按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上提供的在550 nm下的消光系數(shù)ε550=1.7×106(mol·L-1)-1cm-1,以及在550 nm下測(cè)得的A為
3.442,l=1 cm,計(jì)算得到最終純化的QD800-EGFR mAb探針濃度為2.025 μmol·L-1。
2.2 QD800-EGFR mAb探針體外標(biāo)記BcaCD885活
細(xì)胞
在LSCM下,實(shí)驗(yàn)組BcaCD885細(xì)胞膜上可見(jiàn)明顯的QD800紅色熒光,對(duì)照組Ⅰ和對(duì)照組Ⅱ的BcaCD885細(xì)胞均未觀察到QD800的熒光(圖1)。
2.3 腫瘤活體可視化成像
裸鼠頦-頸交界處皮下接種BcaCD885細(xì)胞1周后即可見(jiàn)明顯的腫瘤生長(zhǎng),12只裸鼠全部成瘤。3周后腫瘤最大直徑達(dá)到0.8~1.0 cm時(shí)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)組在尾靜脈注射QD800-EGFR mAb探針15 min后腫瘤部位出現(xiàn)明顯的熒光信號(hào),30 min~6 h時(shí)腫瘤的熒光信號(hào)最完整,與腫瘤大小對(duì)應(yīng),在9 h時(shí)觀察到腫瘤的熒光成像明顯變小,24 h時(shí)只有很小的熒光成像(圖2)。30 min~6 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組熒光信噪比較高,9 h時(shí)熒光信噪比明顯降低,24 h時(shí)熒光信噪比接近基線水平(圖3)。對(duì)照組只在15 min時(shí)腫瘤部位可檢測(cè)到微弱熒光信號(hào),可能是BcaCD885癌細(xì)胞對(duì)QD800-EGFR mAb非特異性吞噬所導(dǎo)致,但30 min~24 h時(shí)未檢測(cè)到明顯區(qū)別于背景熒光的熒光信號(hào)(圖2、3)。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組裸鼠肝脾相對(duì)應(yīng)的部位在靜脈注射QD800-EGFR mAb探針后15 min可見(jiàn)明顯的熒光信號(hào),一直持續(xù)到24 h(圖2)。
2.4 QD800-EGFR mAb探針的體內(nèi)分布和器官的組
織檢查
在3 h和24 h實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組成像完畢后,在光鏡下觀察腫瘤的HE染色切片均可見(jiàn)大量癌細(xì)胞,顯示腫瘤生長(zhǎng)良好(圖4)。在LSCM下觀察腫瘤和各器官的冰凍組織切片可見(jiàn):3 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的肝、脾組織以及實(shí)驗(yàn)組腫瘤中均有大量QD800聚集,左右腎組織中可見(jiàn)有散在QD800。在24 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的肝、脾組織中有大量QD800聚集,左右腎組
織和實(shí)驗(yàn)組腫瘤中可見(jiàn)有散在QD800(圖5)。在3 h和24 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的心、腦、腸、肺、胃和對(duì)照組腫瘤中均未見(jiàn)有明顯的QD800(圖5)。
cinoma
在3 h和24 h各器官組織勻漿的熒光半定量分析結(jié)果見(jiàn)圖6。由圖6可見(jiàn),在3 h和24 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組肝中QD800的平均熒光均最高,顯著高于其他器官(P
均熒光在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>
0.05)。
3 討論
目前對(duì)癌癥成像檢測(cè)較好的方法如CT、MRI等傳統(tǒng)方法均不適合臨床醫(yī)師在術(shù)中對(duì)癌細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)可視化檢查。近年來(lái)基于納米技術(shù)發(fā)展起來(lái)的NIRF-QDs在對(duì)體內(nèi)癌細(xì)胞的直接可視化成像檢測(cè)顯示出巨大的發(fā)展前景[1-5]。表面生物功能化的QDs標(biāo)記活
細(xì)胞后,在實(shí)驗(yàn)檢測(cè)所需濃度范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性,不影響活細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、凋亡和分化[3,8-10]。由于NIRF-QDs具有獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì),同時(shí)QDs作為納米粒還具有易于表面修飾連接和易于穿透腫瘤新生血管到達(dá)癌細(xì)胞的性質(zhì),因此,QDs在癌癥個(gè)體化手術(shù)治療方面顯示出獨(dú)一無(wú)二的優(yōu)勢(shì)[3-10]。
本研究體外結(jié)果表明:QD800不能與BcaCD885細(xì)胞結(jié)合,QD800-EGFR mAb探針能與BcaCD885細(xì)胞結(jié)合,但不能夠與被EGFR mAb封閉EGFR后的BcaCD885細(xì)胞結(jié)合,這就證明了mAb與QD800連接后,EGFR mAb的免疫活性沒(méi)有改變,QD800-EGFR mAb探針能通過(guò)特異性免疫識(shí)別BcaCD885細(xì)胞表達(dá)
的EGFR,從而使QD800結(jié)合到細(xì)胞表面。
筆者選擇高表達(dá)EGFR的BcaCD885細(xì)胞移植于頭頸部進(jìn)行活體可視化成像研究,主要是因?yàn)椋?)納米粒QDs進(jìn)入血液后易被體內(nèi)的單核吞噬系統(tǒng)細(xì)胞作為異物識(shí)別而吞噬,從而大量聚集于含單核吞噬系統(tǒng)細(xì)胞豐富的肝脾等器官,這對(duì)軀體部腫瘤的成像產(chǎn)生很大的干擾,但對(duì)頭頸部的成像無(wú)干擾,因此頭頸部是QDs可視化成像較理想的部位;2)各種靶向性探針經(jīng)靜脈注射后對(duì)腫瘤的靶向性本身與腫瘤的生長(zhǎng)部位也密切相關(guān);3)頭頸部惡性腫瘤大多為鱗狀細(xì)胞癌,而90%以上的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞高表達(dá)EGFR[6-7],以EGFR為靶點(diǎn)用QDs進(jìn)行可視化
成像對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌具有廣泛的適用性。
本研究基于頭頸部鱗狀細(xì)胞癌高表達(dá)EGFR為靶點(diǎn),用靜脈途徑注射QD800-EGFR mAb探針,檢查表明:QD800-EGFR mAb在體內(nèi)能通過(guò)EGFR mAb作為橋梁對(duì)表達(dá)EGFR的BcaCD885細(xì)胞靶向結(jié)合,即QD800的熒光能代表BcaCD885細(xì)胞的存在,QD800與細(xì)胞結(jié)合后的熒光在體外能夠清楚可見(jiàn)。本研究中在注射QD800-EGFR mAb探針15 min后能夠看到清楚的成像,但在30 min能檢測(cè)到較15 min熒光度更高和更完整的腫瘤成像,這種高熒光度能完整顯示腫瘤的成像,但是30 min~6 h無(wú)明顯變化,在9 h時(shí)腫瘤成像明顯變小,熒光度也明顯減低,提示用QD800-EGFR mAb探針行頭頸部鱗狀細(xì)胞癌個(gè)體化成像檢測(cè)的最佳時(shí)間為靜脈注射QD800-EGFR mAb探針后30 min~6 h這一時(shí)間段內(nèi),隨著時(shí)間的推移,在24 h時(shí)腫瘤成像進(jìn)一步變小,熒光度也更低。
前期研究也表明:在皮膚屏障存在的情況下,QD800標(biāo)記癌細(xì)胞后能可視化成像檢測(cè)到104個(gè)癌細(xì)胞,比目前的CT和MRI對(duì)最小癌灶檢測(cè)的敏感性提高了100倍,但如果在實(shí)際手術(shù)中,由于腫瘤暴露在開(kāi)放的創(chuàng)面下,其檢測(cè)的敏感性將會(huì)進(jìn)一步提高[11]。Gao等[12]預(yù)測(cè)NIRF-QDs標(biāo)記癌細(xì)胞后能可視化檢測(cè)
到10~100個(gè)細(xì)胞的水平。隨著更高質(zhì)量、更強(qiáng)組織穿透力QDs的合成和光學(xué)成像技術(shù)的不斷發(fā)展,在暴露的創(chuàng)面下QDs對(duì)癌細(xì)胞的可視化成像檢測(cè)有望達(dá)到單個(gè)細(xì)胞水平,以后臨床醫(yī)師只需佩帶一個(gè)很小的激發(fā)光源探頭和近紅外光接受器,就可在手術(shù)中對(duì)腫瘤進(jìn)行真正“量體裁衣”的個(gè)體化手術(shù)切除。
目前對(duì)QD800-EGFR mAb探針進(jìn)入體內(nèi)后的代謝過(guò)程還不清楚,本研究結(jié)果可見(jiàn):靜脈注射QD800-EGFR mAb探針后15 min~24 h,肝脾相應(yīng)部位均顯示出清楚的成像,提示肝、脾內(nèi)一直有大量QD800聚集。在注射QD800-EGFR mAb探針3 h和24 h后,QD800在肝、脾組織中分布最多,其次是腎,而心、腦、腸、肺、胃和對(duì)照組腫瘤中均未見(jiàn)有明顯QD800分布,但在3 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組腫瘤中QD800顯著高于24 h時(shí)。
本研究結(jié)果表明:QD800-EGFR mAb探針靜脈注射后對(duì)高表達(dá)EGFR的頭頸鱗狀細(xì)胞癌能進(jìn)行清楚的可視化個(gè)體成像檢測(cè),在非侵入可視化成像研究頭頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展和個(gè)體化治療等方面有著巨大的發(fā)展前景。但QD800-EGFR mAb探針進(jìn)入體內(nèi)后在肝、脾組織中大量聚集。如何減少Q(mào)D800-EGFR mAb探針進(jìn)入體內(nèi)后在肝、脾組織中聚集,以及研究如何代謝和清除是今后研究的重要方向。
[參考文獻(xiàn)]
[1] Bentolila LA, Ebenstein Y, Weiss S. Quantum dots for in vivo
small-animal imaging[J]. J Nucl Med, 2009, 50(4):493-496.
[2] Ciarlo M, Russo P, Cesario A, et al. Use of the semiconductor
nanotechnologies “quantum dots” for in vivo cancer imaging[J].
Recent Pat Anticancer Drug Discov, 2009, 4(3):207-215.
[3] Michalet X, Pinaud FF, Bentolila LA, et al. Quantum dots for live
cells , in vivo imaging , and diagnostics[J] . Science, 2005, 307(5709):
538-544.
[4] Aswathy RG, Yoshida Y, Maekawa T, et al. Near-infrared quantum
dots for deep tissue imaging[J]. Anal Bioanal Chem , 2010, 397(4):
1417-1435.
[5] Jiang W, Singhal A, Kim BYS, et al. Assessing near-infrared quan-
tum dots for deep tissue, organ, and animal imaging applications
[J]. J Assoc Lab Autom, 2008, 13(1):6-12.
[6] Rogers SJ, Harrington KJ, Rhys-Evans P, et al. Biological signi-
ficance of c-erbB family oncogenes in head and neck cancer[J].
Cancer Metastasis Rev, 2005, 24(1):47-69.
[7] Kalyankrishna S, Grandis JR. Epidermal growth factor receptor
biology in head and neck cancer[J]. J Clin Oncol, 2006, 24(17):
2666-2672.
[8] 楊凱, 曹雨庵, 李志剛, 等. 肽段-量子點(diǎn)對(duì)鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞成
瘤及淋巴轉(zhuǎn)移能力影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[J]. 中華口腔醫(yī)學(xué)雜志, 2010,
45(5):299-302.
Yang Kai, Cao Yu’an, Li Zhigang, et al. Effect of peptide-con-
jugated quantum dots on the tumorigenicity and lymph node meta-
stasis of human tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113
and mouse uterine cervix carcinoma U14 in vivo[J]. Chin J Sto-
matol, 2010, 45(5):299-302.
[9] Jaiswal JK, Mattoussi H, Mauro JM, et al. Long-term multiple co-
lor imaging of live cells using quantum dot bioconjugates[J]. Nat
Biotechnol, 2003, 21(1):47-51.
[10] Sun D, Yang K, Zheng G, et al. Study on effect of peptide-conju-
gated near-infrared fluorescent quantum dots on the clone forma-
tion, proliferation, apoptosis, and tumorigenicity ability of human
buccal squamous cell carcinoma cell line BcaCD885[J]. Int J Na-
nomedicine, 2010, 5:401-405.
[11] Yang K, Cao YA, Shi C, et al. Quantum dot-based visual in vivo
imaging for oral squamous cell carcinoma in mice[J]. Oral Oncol,
2010, 46(12):864-868.
[12] Gao X, Cui Y, Levenson RM, et al. In vivo cancer targeting and
級(jí)別:部級(jí)期刊
榮譽(yù):中國(guó)優(yōu)秀期刊遴選數(shù)據(jù)庫(kù)
級(jí)別:部級(jí)期刊
榮譽(yù):
級(jí)別:省級(jí)期刊
榮譽(yù):中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CJFD)
級(jí)別:省級(jí)期刊
榮譽(yù):中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CJFD)
級(jí)別:CSSCI南大期刊
榮譽(yù):中國(guó)優(yōu)秀期刊遴選數(shù)據(jù)庫(kù)